一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法技术

本发明专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法。该方法是将鸡组织、鸡蛋或猪肉样品通过加速溶剂萃取和固相萃取方法提取、净化后，经丹磺酰氯衍生，再用超高效液相色谱荧光检测法检测。本方法相对于其他检测方法来说，具有分析效率更高、流动相消耗少、回收率、准确度和灵敏度高，重现性好的优点。

An efficient method for the determination of piperazine residues in chicken tissues, eggs and pork

The invention relates to the field of veterinary drug residue detection, in particular to an efficient method for the determination of piperazine residues in chicken tissues, eggs and pork. The method is to extract and purify the samples of chicken tissues, eggs or pork by accelerated solvent extraction and solid phase extraction. The method is derived from sulfonyl chloride and detected by high performance liquid chromatography fluorescence detection. Compared with other detection methods, this method has the advantages of higher analysis efficiency, less flow phase consumption, high recovery, high accuracy, high sensitivity and good reproducibility.

【技术实现步骤摘要】
一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法
本专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法。
技术介绍
目前，国内外哌嗪检测方法有气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-串联质谱，但柱前衍生-超高效液相色谱荧光检测法(UPLC-FLD)检测动物源性组织与食品中哌嗪残留的方法均还未见报道。因此，本专利技术首次建立鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留柱前衍生-超高效液相色谱荧光检测法。该方法洗脱程序简单，溶剂消耗少，分析效率更高，灵敏度和精密度更好，更适合在大批量样品分析中应用与推广。
技术实现思路
为了能高效、准确的检测哌嗪在鸡组织(肌肉、肾脏、肝脏)、鸡蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)及猪肉中的残留，本专利技术提供了一种柱前衍生-超高效液相色谱荧光检测(UPLC-FLD)方法。该方法能高效、准确的检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪的残留，且满足中国农业部、欧盟(EU)兽药残留检测方法的要求。将鸡组织(肌肉、肾脏、肝脏)、鸡蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)及猪肉样品通过加速溶剂萃取(ASE)和固相萃取(SPE)技术提取、净化后，经丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生，再用超高效液相色谱荧光检测法(UPLC-FLD)检测。色谱条件：以ACQUITYUPLCHSST3(2.1×100mm,1.8μm)为色谱柱；水-乙腈(15∶85，V∶V)体系为流动相；检测器为荧光检测器，激发波长330nm，发射波长531nm；流速为0.2mL/min；进样体积为10μL；柱温为25℃；外标法定量。本专利技术中采用ACQUITYUPLCHSST3(2.1×100mm,1.8μm)色谱柱，以水-乙腈(15∶85，V∶V)体系为流动相，流速为0.2mL/min，色谱峰峰型尖锐(即灵敏度高)，分析物保留时间适中，无其他杂质峰干扰。本专利技术在分析效率、溶剂消耗、回收率、精密度、灵敏度及重现性角度，与其他检测方法进行比较，发现本方法分析效率更高、流动相消耗少、回收率、准确度和灵敏度高，重现性好。附图说明图1丹磺酰氯标准品超高效液相色谱图。图2哌嗪标准品(50μg/kg)超高效液相色谱图。图3空白鸡肌肉衍生产物超高效液相色谱图。图4鸡肌肉中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图5空白鸡肾脏衍生产物超高效液相色谱图。图6鸡肾脏中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图7空白鸡肝脏衍生产物超高效液相色谱图。图8鸡肝脏中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图9空白鸡全蛋衍生产物超高效液相色谱图。图10鸡全蛋中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图11空白鸡蛋清衍生产物超高效液相色谱图。图12鸡蛋清中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图13空白鸡蛋黄衍生产物超高效液相色谱图。图14鸡蛋黄中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图15空白猪肉衍生产物超高效液相色谱图。图16猪肉中添加50μg/kg哌嗪标准品衍生产物超高效液相色谱图。图17空白鸡肌肉基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图18空白鸡肾脏基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图19空白鸡肝脏基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图20空白鸡全蛋基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图21空白鸡蛋清基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图22空白鸡蛋黄基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。图23空白猪肉基质中添加哌嗪标准曲线(n＝7)。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。1.实验家禽的饲养和样品采集本试验随机选取112日龄京海黄鸡(江苏京海禽业集团有限公司)12只(公、母各半)，196日龄的京海黄鸡产蛋鸡(江苏京海禽业集团有限公司)20只，及180日龄三元(杜×长×约)杂交猪(常州康乐农牧有限公司)12头(公、母各半)，单笼或单栏饲养，饲喂不含任何药物的全价饲料(江苏京海禽业集团有限公司饲料厂和扬州市扬大饲料厂提供)，自由饮水。饲养2周后屠宰，分别取供试鸡的肌肉、肝脏、肾脏及供试猪的肌肉作为空白样品，置于-35℃中保存。此外，京海黄鸡产蛋鸡饲养2周后，连续收集10d鸡蛋，置于4℃冰箱中暂时保存，样品采集后分别取全蛋、蛋清、蛋黄匀浆后分装，分别作为空白样品，置于-35℃中保存。2.本专利技术提取与净化步骤1)准确称取(2.0±0.02)g均质好的空白样品放于研钵中，并加入4.0g硅藻土研磨，为了达到最佳的萃取效率，尽可能将样品研磨成小颗粒，装入22mL的萃取池中，用ASE进行萃取；2)在1500psi，80℃萃取条件下，每个萃取池首先用正己烷静态萃取1次，弃掉萃取液；再用2％甲酸乙腈静态萃取2次，收集萃取液待用。每个萃取过程15～20min；3)将上述萃取收集的萃取液经Strata-X-C小柱净化，鸡组织、猪肉用60mg/3mLStrata-X-C柱净化(净化程序见表1)，鸡蛋用100mg/3mLStrata-X-C柱净化(净化程序见表2)。将上述洗脱液用15mL离心管收集，洗脱液置于氮吹仪中吹干，待用；4)将氮吹后的样品用1.0mL乙腈复溶，超声10min，摇匀，移取100μL0.12％三乙胺和600μL1.0mg/mL丹磺酰氯溶液，用乙腈定容至2.0mL，置于50℃环境下避光反应20min，待反应结束后，涡旋1min，过0.22μm有机相针式滤器，滤液供UPLC-FLD检测。表1鸡组织及猪肉样品固相萃取程序表2鸡蛋样品固相萃取程序3试验条件色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3,2.1×100mm,1.8μm；流动相A：超纯水；流动相B：乙腈，其比例为15∶85(V∶V)；检测器：荧光检测器，激发波长330nm，发射波长531nm；流速：0.2mL/min；进样体积：10μL；柱温：25℃。4定量方法4.1标准曲线的绘制分别准确称取10份(2.0±0.02)g匀质好的鸡肌肉、鸡肾脏、鸡肝脏、猪肉及鸡全蛋、蛋清、蛋黄空白样品，按2中的方法对上述空白样品进行前处理，制备空白基质提取液，备用。分别移取适量的空白鸡肌肉、鸡肾脏、鸡肝脏及猪肉基质提取液将标准工作液稀释成一系列浓度，按2中的方法进行衍生，使得最终对应在空白鸡肌肉、鸡肾脏、鸡肝脏及猪肉中哌嗪的添加浓度为LOQ、5.0、10.0、50.0、100.0、150.0、200.0μg/kg。分别移取适量空白鸡全蛋、蛋清及蛋黄基质提取液将标准工作液稀释成一系列浓度，按2中的方法进行衍生，使得最终对应在空白鸡全蛋、蛋黄、蛋清样品中哌嗪的添加浓度为LOQ、10.0、20.0、50.0、100.0、150.0、200.0μg/kg。将上述处理的各浓度样品在优化好的HPLC-FLD方法下进行分析。以哌嗪标准工作液在不同空白基质中添加浓度为自变量(x)，以哌嗪衍生产物峰面积为应变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法，其特征在于，将鸡组织、鸡蛋或猪肉样品通过加速溶剂萃取和固相萃取方法提取、净化后，经丹磺酰氯衍生，再用超高效液相色谱荧光检测法检测。

【技术特征摘要】
1.一种高效检测鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的分析方法，其特征在于，将鸡组织、鸡蛋或猪肉样品通过加速溶剂萃取和固相萃取方法提取、净化后，经丹磺酰氯衍生，再用超高效液相色谱荧光检测法检测。2.根据要求1所述的方法，其特征在于，超高效液相色谱荧光检测的色谱条...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢恺舟，张杨杨，庞茂达，谢星，王雅娟，赵霞，王波，卜晓娜，郭亚文，刘楚君，张跟喜，戴国俊，王冉，高玉时，张涛，王金玉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32