溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法技术

本发明专利技术提供一种溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，包括：提取，净化，测定，进行添加回收率试验，得到溴氰虫酰胺和J9Z38的添加回收率和相对标准偏差（RSDs）；检出溴氰虫酰胺和J9Z38的最小检出量；得出溴氰虫酰胺、J9Z38在猪肉中的最低检测浓度。本发明专利技术建立了猪肉中溴氰虫酰胺及其代谢物J9Z38的分析检测方法；采用乙腈提取，正己烷除去猪肉中脂肪、蛋白质等杂质，净化分离效果好，本方法的前处理过程相对简单，回收率高，重复性好，净化分离效果好，而且最低检测浓度比较低，适合于溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的分析检测。

Determination of cyanide and its metabolite J9Z38 in pork

The present invention provides a method for detection of bromo cyanamide and metabolite J9Z38 in pork, including extraction, purification, determination, adding recovery test, obtaining the addition recovery rate and relative standard deviation (RSDs) of brominamide and J9Z38, detecting the minimum detection amount of bromo cyanamide and J9Z38, and obtaining the cyanoacyl bromide The lowest detection concentration of amines and J9Z38 in pork. The invention establishes a method for the analysis and detection of bromo cyanamide and its metabolite J9Z38 in pork. Extraction of acetonitrile and hexane remove the impurities such as fat and protein in pork, and the purification and separation effect is good. The pretreatment process of this method is relatively simple, the recovery rate is high, the reproducibility is good, the purification separation effect is good, and the lowest detection is done. It is suitable for analysis and detection of bromincyanamide and metabolite J9Z38 in pork.

【技术实现步骤摘要】
溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法
本专利技术涉及农药检测，尤其涉及溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法。
技术介绍
溴氰虫酰胺(Cyantraniliprole)是杜邦公司继氯虫苯甲酰胺后的另一个新型邻氨基苯甲酰胺类杀虫剂。它具有高效、低毒、作用机制新颖、对非靶标生物安全、对现有杀虫剂无交互抗性等特点。溴氰虫酰胺尤其对刺吸式口器害虫具有优异的防效，具有广阔的应用前景，引起人们的广泛关注。溴氰虫酰胺的化学名称为3-溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-N-{4-氰基-2-甲基-6-[(甲基氨基)羰基]苯基}-1H-吡唑-5-甲酰胺；化学结构式为分子式C19H14BrClN6O2，分子量473.7。溴氰虫酰胺为白色粉末，熔点168～173℃，相对密度(20℃)1.387g/cm3，不易挥发。水中溶解度(20℃)0～20mg/L，其他溶剂中的溶解度，2.383g/L(甲醇)，5.965g/L(丙酮)、0.576g/L(甲苯)、5.338g/L(二氯甲烷)，1.728g/L(乙腈)。溴氰虫酰胺在植物体和动物体中的典型代谢物为J9Z38，结构式为：分子式为C19H12BrClN6O，分子量457。目前，有关溴氰虫酰胺检测方法的报道有：溴氰虫酰胺在谷物(水稻、小麦、玉米)、蔬菜(黄瓜、番茄、小白菜、辣椒、豇豆、生菜)、水果(苹果、葡萄、柑橘)等植物源农产品、土壤和水中的检测方法。但是关于溴氰虫酰胺和代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，能够对猪肉中溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38进行检测，满足农药残留分析中对准确度、精密度和灵敏度的要求。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，包括以下步骤：(1)提取：称取猪肉样品2g，置于50mL离心管中，加入2mL0.1％甲酸水和20mL提取液，在6000rpm条件下匀浆30s，加入1g无水乙酸钠和2g无水硫酸镁，剧烈摇动30s，在4000rpm条件下离心5min；(2)净化：移取离心管中提取液10mL置于分液漏斗中，第一次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，分液漏斗中第二次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，收集分液漏斗中的提取液于平底烧瓶中，在40℃条件下浓缩干，定容至5mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；(3)测定：配制0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg/L的溴氰虫酰胺和J9Z38标准溶液，分别进样1μL，获得UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积绘制溴氰虫酰胺标准溶液曲线和J9Z38标准溶液曲线；(4)设定溴氰虫酰胺在猪肉中添加浓度为0.02、0.1和10.0mg/kg时，进行添加回收率试验，分别得到溴氰虫酰胺和J9Z38的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)；(5)采用超高效液相色谱串联质谱仪检出溴氰虫酰胺和J9Z38的最小检出量；(6)根据溴氰虫酰胺和J9Z38在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及猪肉中溴氰虫酰胺和J9Z38按最低添加浓度添加的样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出溴氰虫酰胺、J9Z38在猪肉中的最低检测浓度。提取液是乙腈匀浆。净化液是正己烷液。超高效液相色谱条件是：色谱柱：WatersacquityBEHC18(1.7μm，2.1×100mm)；流动相：乙腈/0.1％甲酸水溶液＝80/20；流速：0.2mL/min；柱温：40℃；进样量：1μL；质谱条件是：离子源：ESI+；定量模式：MRM模式；毛细管电压：4.0KV；雾化气流量：3.0L/min；加热气流量：10.0L/min；Interface温度：300℃；DL温度：250℃；HeatBlock温度：400℃；干燥气流量：10L/min；溴氰虫酰胺定量离子对：475.10>286.00，定性离子对：475.10>444.10；J9Z38定量离子对：456.80>188.00；定性离子：456.80>299.00。本专利技术的有益效果是：本专利技术建立了猪肉中溴氰虫酰胺及其代谢物J9Z38的分析检测方法；采用乙腈匀浆提取，正己烷液液分配除去猪肉中脂肪、蛋白质等杂质，净化分离效果好(专利技术的核心)，本专利技术的前处理过程相对简单，回收率高，重复性好，净化分离效果好，而且最低检测浓度比较低，适合于溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的分析检测。附图说明图1是溴氰虫酰胺和J9Z38的添加回收率和相对标准偏差。图2是溴氰虫酰胺的标准曲线图。图3是J9Z38的标准曲线图。图4是溴氰虫酰胺(0.1mg/L)、J9Z38(0.1mg/L)标准溶液色谱图。具体实施方式本专利技术公开了一种溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，该方法所采用到的主要仪器和化学试剂有：超高效液相色谱串联质谱仪UPLC-MS/MS(超高效液相色谱仪型号为LC-30AD，质谱仪型号为LCMS-8050，岛津公司)、SPS402F型电子天平：(梅特勒－托利多(常州)测量技术有限公司)、IKAT18型分散器(德国IKA实验室)、TD5A-WS型台式大容量低速离心机(金南仪器制造有限公司)、R-201型旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司)、HH-4型恒温水浴锅(江苏金坛市江南仪器厂)、SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、TYZD-ⅡA型振荡器(姜堰市天仪电子仪器有限公司)、甲醇(分析纯500mL，天津市大茂化学试剂厂)、乙酸乙酯(分析纯500mL，天津市大茂化学试剂厂)、乙腈(分析纯500mL，上海凌峰化学试剂有限公司)、无水乙酸钠(分析纯500g，温州市化学用料厂)、无水硫酸镁(分析纯500g，天津市福晨化学试剂厂)、正己烷(分析纯500mL，国药集团化学试剂有限公司)、CleanertMAS-Q净化管(2mL，PSA50mg，C1850mg，PC50mg，MgSO4150mg，型号为MS-9PP0250，天津博纳艾杰尔科技有限公司)、CleanertNANOCARB净化管(150mg/1mL，型号为IC-NN1510-S，天津博纳艾杰尔科技有限公司)、OasisHLB3cc小柱(60mg/3mL，型号为WAT094226，Waters公司)、CleanertNH2-SPE小柱(500mg/6mL，型号为NH5006，天津博纳艾杰尔科技有限公司)、乙腈(色谱纯4L，默克股份两合公司)、甲酸(色谱纯500mL，美国ROEScientificInc)、有机针式滤器(0.22μm，型号为TQP-61322,天源科技公司)、注射器(2mL，常州悦康医疗器材有限公司)。其中，仪器的条件是：超高效液相色谱条件：色谱柱：WatersacquityBEHC18(1.7μm，2.1×100mm)；流动相：乙腈/0.1％甲酸水溶液＝80/20；流速：0.2mL/min；柱温：40℃；进样量：1μL。质谱条件：离子源：ESI+；定量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，其特征是，包括以下步骤：(1)提取：称取猪肉样品2g，置于50mL离心管中，加入2mL 0.1％甲酸水和20mL提取液，在6000rpm条件下匀浆30s，加入1g无水乙酸钠和2g无水硫酸镁，剧烈摇动30s，在4000rpm条件下离心5min；(2)净化：移取离心管中提取液10mL置于分液漏斗中，第一次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，分液漏斗中第二次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，收集分液漏斗中的提取液于平底烧瓶中，在40℃条件下浓缩干，定容至5mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；(3)测定：配制0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg/L的溴氰虫酰胺和J9Z38标准溶液，分别进样1μL，获得UPLC‑MS/MS的响应值，以浓度‑峰面积绘制溴氰虫酰胺标准溶液曲线；(4)设定溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中添加浓度为0.01、0.2和8.0mg/kg，进行添加回收率试验，分别得到溴氰虫酰胺和J9Z38的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)；(5)采用超高效液相色谱串联质谱仪检出溴氰虫酰胺和J9Z38的最小检出量；(6)根据溴氰虫酰胺和J9Z38在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及猪肉中溴氰虫酰胺和J9Z38按最低添加浓度添加的样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出溴氰虫酰胺、J9Z38在猪肉中的最低检测浓度。...

【技术特征摘要】
1.溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中的检测方法，其特征是，包括以下步骤：(1)提取：称取猪肉样品2g，置于50mL离心管中，加入2mL0.1％甲酸水和20mL提取液，在6000rpm条件下匀浆30s，加入1g无水乙酸钠和2g无水硫酸镁，剧烈摇动30s，在4000rpm条件下离心5min；(2)净化：移取离心管中提取液10mL置于分液漏斗中，第一次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，分液漏斗中第二次加入30mL净化液，剧烈摇动1min，静置20min，待分液漏斗中液体分层后，弃去下层净化液，收集分液漏斗中的提取液于平底烧瓶中，在40℃条件下浓缩干，定容至5mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；(3)测定：配制0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg/L的溴氰虫酰胺和J9Z38标准溶液，分别进样1μL，获得UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积绘制溴氰虫酰胺标准溶液曲线；(4)设定溴氰虫酰胺及代谢物J9Z38在猪肉中添加浓度为0.01、0.2和8.0mg/kg，进行添加回收率试验，分别得到溴氰虫酰胺和J9Z38的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)；(5)采用超高效液相色谱串联质谱仪检出溴氰虫酰胺和J9Z38的最小检出量；(6)根据溴氰虫酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：张昌朋，汤涛，胡秀卿，苍涛，陈列忠，王彦华，蒋金花，许振岚，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33