The invention discloses the application of a kind of retarded Edward flagellin FlgJ with immune protection in subunit vaccine. The recombinant protein is prepared by the prokaryotic expression method, which includes the template of the ET CL genomic sequence of the ET bacterium tarda, the PCR amplification of the flgJ gene, and the construction of the pMD18 T flgJ vector, to f. The lgJ gene was sequenced, and the recombinant expression vector, pET 32a flgJ, was constructed, and the recombinant expression vector was transformed into DH5 alpha receptive cells, and the monoclonal was tested by PCR and double enzyme digestion, and the positive clones were obtained, the plasmid was extracted and sequenced, and the recombinant protein was transformed into the prokaryotic expression of the recombinant protein, and the recombinant protein was reorganized by SDS PAGE analysis. The expression of protein was verified by Western blot. The prokaryotic expression system was used to express and purify the flagellin FlgJ of Edward bacteria, and the recombinant protein was proved to have protective immunity through animal experiments, indicating that the recombinant protein could be used in the development of the subunit vaccine of the slow Edward bacteria.
【技术实现步骤摘要】
一种具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ
本专利技术涉及生物工程
,具体地说,涉及一种具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ。
技术介绍
迟缓爱德华菌(Edwardsiellatarda,E.tarda)在水产养殖中十分普遍,危害巨大。目前生产上针对迟缓爱德华菌感染主要通过抗生素和化学药物进行应对,但由此造成的水体污染和菌株耐药情况,不容乐观,特别是多重耐药菌株的不断出现给该病防控带来严峻挑战。此外,E.tarda人兽共患,且近年来人感染病例逐年增加,揭示其重要的公共卫生学意义。目前国内已有针对迟缓爱德华菌病的灭活疫苗和弱毒疫苗获批生产,其中灭活疫苗免疫效果差强人意,弱毒疫苗设计专为大菱鲆使用,远远无法满足多元化水产养殖的需求。开发高效的、满足不同动物使用的迟缓爱德华菌疫苗仍在研究当中,基于保护性抗原筛选研究的亚单位疫苗和活载体疫苗研究是一个重要方向。研究发现,细菌鞭毛蛋白具有优良的免疫原性,同时能够促进吞噬细胞的吞噬作用起到免疫增强作用,具有一定的应用前景。基于此,本专利技术通过原核表达系统对迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ进行表达纯化,通过动物实验证明该重组蛋白具有免疫保护力,为进一步研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ,具体通过原核表达方法,获得迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ的重组蛋白,从而进一步研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗。为实现上述目的,本专利技术采用如下技术方案:具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ在亚单位疫苗中的应用。进一步,所述的 ...
【技术保护点】
1.具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ在亚单位疫苗中的应用。
【技术特征摘要】
1.具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ在亚单位疫苗中的应用。2.根据权利要求1所述的具有免疫保护作用的迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)以迟缓爱德华菌ET-CL基因组序列为模板,P1和P2为引物,PCR扩增flgJ基因;其中引物P1和P2为:P1:5’-gGAATTCATGGCCGACGATAGCCTGGCGTTTA-3’,EcoRI;SEQIDNO:1;P2:5’-gcGTCGACCTAAAACAGATTCGCCAAATCGTGG-3’,SalI;SEQIDNO:2;(2)构建pMD18-T-flgJ载体,对flgJ基因进行序列测定;(3)利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ对pMD18-T-flgJ载体和pET-32a载体分别进行双酶切,构建重组表达载体pET-32a-flgJ;(4)将重组表达载体转化DH5α感受态细胞,挑取单克隆进行PCR和双酶切验证,获得阳性克隆,提取质粒,测序;(5)将重组表达载体pET-32a-flgJ和空载体pET-32a分别转化BL21工程菌,进行重组蛋白的原核表达;(6)利用SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况...
【专利技术属性】
技术研发人员:张志强,高桂生,吴同垒,史秋梅,杨楠,
申请(专利权)人:河北科技师范学院,
类型:发明
国别省市:河北,13
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