抗5T4抗体-药物偶联物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了抗5T4抗体‑药物偶联物及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种抗5T4抗体‑药物偶联物，实验结果表明，所述抗体‑药物偶联物具有显著的抗肿瘤效果。本发明专利技术还公开了所述抗5T4抗体‑药物偶联物的制药用途，及其在抑制或预防肿瘤中的作用。

【技术实现步骤摘要】
抗5T4抗体-药物偶联物及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及抗5T4抗体-药物偶联物及其应用。
技术介绍
人5T4癌胚抗原是由TPBG基因(滋养层糖蛋白基因)编码的分子量约为72kDa的高度糖基化的跨膜糖蛋白。5T4最早发现于胚胎发育，在胎盘滋养层细胞中高表达，在正常组织中基本不存在，仅在某些特殊的上皮中存在，如基底层复层鳞状上皮，腺体和导管上皮，以及视网膜次级神经元和嗅球。后来相继发现5T4表达于众多癌症类型中，包括卵巢癌、结直肠癌、胃癌、肾癌、前列腺癌等，并且5T4在肿瘤中的过量表达已经与疾病进展关联，其可能发挥的作用是影响肿瘤细胞之间的连接，影响细胞形态、运动和黏附能力，继而促进远端转移，但具体的调控机制尚不完全清楚。但显而易见的是，5T4是癌症靶向治疗的一个非常有吸引力的靶点。几种抗5T4抗体已经得到描述，包括鼠源或人源化单克隆抗体。5T4用作靶向治疗药物的设计靶点已经提出，如将抗5T4抗体的Fab片段与超抗原融合，利用超抗原激活T细胞产生免疫反应；如将单链抗5T4抗体scFv-Fc与人胰核糖核酸酶融合，利用人胰核糖核酸酶降解RNA，使肿瘤细胞因翻译过程受阻而优先死亡(专利号US2016304617)；如CAR-T疗法，将编码靶向5T4的嵌合抗原受体的载体转入患者的T细胞，经过修饰的T细胞能够识别并结合肿瘤细胞上的5T4抗原，进而杀死肿瘤细胞，嵌合抗原受体的胞外配体结合区可以是抗5T4单克隆抗体的scFv(专利号WO2016034666)；另外，重组5T4疫苗也被尝试用于治疗癌症。癌症靶向治疗的发展过程中，另一个成功的策略是利用抗体作为载体，将毒性小分子携带进入癌细胞，然后利用解离下来的小分子来杀死癌细胞。目前已经有两个抗体药物偶联物(Antibody-drugconjugates，ADC)被用于癌症靶向治疗—Adcetris和Kadcyla。靶向5T4的抗体药物偶联物已经得到描述(专利号ZA200702793，US2007231333，US2012251558)，如huA1-mcMMAF(US2012251558)是通过传统的抗体二硫键还原的方式将微管蛋白抑制剂MMAF连接到人源化的抗5T4单克隆抗体A1上产生的抗体药物偶联物(一个抗体分子连接2-8个数量不等的MMAF，平均DAR为4)，一期临床显示出较好的安全性(2015ASCO)。抗体药物偶联物已经显示出了对肿瘤的显著的治疗效果，在此基础上，本领域技术人员致力于开发新的、更有效的抗体药物偶联物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型抗5T4抗体药物偶联物及其治疗用途。本专利技术的第一方面，提供了一种抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，所述抗体-药物偶联物包括抗体和偶联于所述抗体的药物，所述抗体包括一重链可变区和一轻链可变区，其中，所述重链可变区包括三个互补决定区：CDR1：GFTFSSYECDR2：ISSSGSTI和CDR3：AREMQFGWELLGAFDI；所述轻链可变区包括三个互补决定区：CDR1’：QSVSSSYCDR2’：GAS和CDR3’：QQYGSS。在另一优选例中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。在另一优选例中，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。在另一优选例中，所述抗体包括SEQIDNO.9所示的重链。在另一优选例中，所述抗体包括SEQIDNO.10所示的轻链。在另一优选例中，所述药物包括选自下组的小分子药物：Duostatin5、MMAF、Duostatin14、Duomycin2、Duomycin4、Calicheamicin、Amanitine。在另一优选例中，所述药物为Duostatin5。在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物结构如式I所示：Ab－(L-D)n，I其中，Ab为所述抗体；L为无或连接所述抗体和所述药物的接头；D为抑制肿瘤细胞的小分子药物；n为偶联于所述抗体的所述药物的数量“－”为键或接头。在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物的轻链恒定区偶联有至少1个药物分子(优选为每条轻链恒定区偶联1个药物分子)，并且所述药物分子连接于所述轻链恒定区的赖氨酸位点。在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含EKH基序,并且所述所述药物分子连接于所述基序的赖氨酸(K)位点。在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含YEKHK基序,并且所述药物分子连接于所述基序的第一个赖氨酸(K)位点。在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含ADYEKHK基序,并且所述药物分子连接于所述基序的第一个赖氨酸(K)位点。在另一优选例中，所述药物分子为抑制肿瘤细胞的小分子药物。在另一优选例中，n为所述抗体-药物偶联物中的药物平均偶联数量，较佳地n为1～4，优选为1.5～3.5，更优选为1.8～2。在另一优选例中，D选自下组：Duostatin5、MMAF、Duostatin14、Duomycin2、Duomycin4、Calicheamicin、Amanitine。在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物结构如式III所示：式III中，所述L1-L2的结构选自下组的L-1、L-2、和L-3：其中，L21、L22、L23为独立地选自下组的接头-(CH2)n-,-(CH2CH2O)n-,Val-Cit,Ala-Ala-Asn,或其组合；Ab、D、n如上所述；波浪线表示与抗体的连接位置。在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物选自下组：ZV00508、ZV0512、ZV0513、ZV0501、ZV0503、ZV0504、ZV0517、ZV0518、ZV0505、ZV0516、ZV0515、ZV0519其中，偶联物ZV00508的结构如下：偶联物ZV0512的结构如下：偶联物ZV0513的结构如下：偶联物ZV0501的结构如下：偶联物ZV0503的结构如下：偶联物ZV0504的结构如下：偶联物ZV0517的结构如下：偶联物ZV0518的结构如下：偶联物ZV0505的结构如下：偶联物ZV0516的结构如下：偶联物ZV0515的结构如下：偶联物ZV0519的结构如下：本专利技术的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本专利技术第一方面所述的抗体-药物偶联物，以及药学上可接受的载体。本专利技术的第三方面，提供了如本专利技术第一方面所述的抗体-药物偶联物的用途，用于制备抗肿瘤的药物。在另一优选例中，所述肿瘤为5T4阳性肿瘤，优选地包括乳腺癌、胃癌、卵巢癌、肺癌等。本专利技术的第四方面，提供了一种治疗或预防肿瘤的方法，所述方法包括步骤给需要的对象施用本专利技术第一方面所述的抗体-药物偶联物；或本专利技术第二方面所述的药物组合物。在另一优选例中，所述对象为哺乳动物，包括人。本专利技术的第五方面，提供了一种制备本专利技术第一方面所述的抗体-药物偶联物的方法，所述方法包括步骤：配置反应体系，所述反应体系中包括抗体和游离的药物分子，然后进行偶联反应，从而制得所述抗体-药物偶联物，其中，所述药物分子包括接头。在另一优选例中，所述反应体系的pH为6.5～8.0；优选地pH为6.8～7.8；更优选地pH为7.0～7.5，如7.1、7.2、7.3、7.4。在另一优选例中，所述药物分子连接于所述抗体的轻链恒定区的赖氨酸位点。在另一优选例中，反应时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体‑药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述抗体‑药物偶联物包括抗体和偶联于所述抗体的药物，所述抗体包括一重链可变区和一轻链可变区，其中，所述重链可变区包括三个互补决定区：CDR1：GFTFSSYECDR2：ISSSGSTI和CDR3：AREMQFGWELLGAFDI；所述轻链可变区包括三个互补决定区：CDR1’：QSVSSSYCDR2’：GAS和CDR3’：QQYGSS。

【技术特征摘要】
1.一种抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述抗体-药物偶联物包括抗体和偶联于所述抗体的药物，所述抗体包括一重链可变区和一轻链可变区，其中，所述重链可变区包括三个互补决定区：CDR1：GFTFSSYECDR2：ISSSGSTI和CDR3：AREMQFGWELLGAFDI；所述轻链可变区包括三个互补决定区：CDR1’：QSVSSSYCDR2’：GAS和CDR3’：QQYGSS。2.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。3.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。4.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述抗体包括SEQIDNO.9所示的重链。5.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其药学上可...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗振伟，朱同，阿里舍尔B·卡萨诺夫，曹小冬，李朝辉，吴敏，
申请(专利权)人：浙江昭华生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33