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七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用制造技术

技术编号:18455084 阅读:61 留言:0更新日期:2018-07-18 11:24
本发明专利技术涉及医药技术领域,尤其涉及七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用。本发明专利技术提供的多肽如SEQ ID NO:1所示,并实验证明其对宫颈癌细胞或组织存在特异性识别的作用,因此可作为宫颈癌细胞的检测试剂或宫颈癌的诊断试剂,也能够作为宫颈癌靶向治疗药物的载体。本发明专利技术实验表明,该多肽仅能够识别宫颈癌细胞而对其他肿瘤细胞则无识别作用。

【技术实现步骤摘要】
七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用
本专利技术涉及医药
,尤其涉及七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用。
技术介绍
子宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,发病率在全球女性恶性肿瘤中位居第二,且有年轻化的趋势,死亡率高,为女性肿瘤死亡的第三位,严重威胁着女性的生命健康。目前,对于宫颈癌的临床治疗,尤其是转移/复发性宫颈癌,仍然具有挑战性。与早期宫颈癌相比,转移/复发性宫颈癌通常没有标准的治疗方案,往往是姑息性治疗。早期宫颈癌患者经治疗后五年生存率可达91.5%,而晚期患者的平均生存期仅有8~13个月。其难以治愈的主要原因是常规化疗药物的非特异性与癌细胞的不敏感性而致的肿瘤细胞耐药。因此,探寻宫颈癌早期诊断新方法和新型高效靶向治疗药物载体是目前妇产科学所面临的重要课题之一。肿瘤靶向治疗旨在提高药物对肿瘤细胞的特异性识别和攻击,减少药物对正常细胞的毒性作用。然而,目前的宫颈癌靶向治疗效果并不理想,主要是因其缺乏有效的靶向药物载体系统。理想的抗肿瘤靶向药物载体可以向肿瘤部位定向传递抗肿瘤药物,以攻击癌细胞,而不损害正常细胞。具有肿瘤组织高度特异性和靶向性的小分子多肽因其分子量小,结构简单,易制备,肿瘤组织穿透力强且免疫原性低等特点,可以作为抗肿瘤靶向药物的理想载体。肿瘤特异性靶向肽的筛选可利用噬菌体展示技术实现。噬菌体展示通过将外源多肽或蛋白的编码/目的基因片段插入噬菌体DNA中而使相应的多肽或蛋白表达在pⅢ衣壳蛋白上。被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性,以利于靶分子的识别和结合。噬菌体展示肽库技术使大量随机多肽与其DNA编码序列之间建立直接联系,使得各种靶分子的多肽配体通过体外或体内筛选程序得以快速鉴定。相对体外筛选,体内筛选过程筛选出的多肽与体内环境更相吻合,可能更好维持了其靶向组织或细胞的天然结构和功能构象,因而体内筛选获得的靶向肽可能更具临床应用价值。到目前为止,应用噬菌体展示体内筛选技术已成功筛选出多种肿瘤特异性靶向肽,例如分别靶向骨肉瘤、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌的短肽NF-1、NYZL1、OSTP和WSGPGVWGASVK、PKRGFQD和SNTRVAP,但是对于宫颈癌特异性靶向肽(cervicalcancerspecifictargetingpeptides,CSPs)的相关研究报道鲜见。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术要解决的技术问题在于提供七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用。本专利技术提供了氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。SEQIDNO:1所示的氨基酸序列为KQNLAEG。氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽在制备靶向识别宫颈癌细胞的试剂中的应用。本专利技术实施例中,所述宫颈癌细胞为C-33A、SiHa和/或ME-180。本专利技术还提供了一种宫颈癌细胞检测试剂盒,其包括氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。本专利技术提供的宫颈癌细胞试剂盒中还包括荧光染料。本专利技术实施例中,所述荧光染料为FITC。本专利技术提供的宫颈癌细胞检测试剂盒适用于细胞的免疫荧光检测。本专利技术还提供了一种非诊断目的的宫颈癌细胞检测方法,以荧光染料标记氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽作为检测试剂,对待测样品进行检测,被染色的细胞为宫颈癌细胞。本专利技术提供了氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。本专利技术实施例中,所述宫颈癌为宫颈鳞状细胞癌。宫颈癌的诊断方法包括,将待测组织以石蜡封片,以荧光染料标记氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽作为检测试剂,被染色的则为宫颈癌组织。本专利技术还提供了一种宫颈癌诊断试剂盒,其包括氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。本专利技术提供的宫颈癌诊断试剂盒中还包括荧光染料。本专利技术实施例中,所述荧光染料为FITC。本专利技术提供的宫颈癌诊断试剂盒适用于待测组织的免疫荧光检测。本专利技术提供的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。本专利技术提供的治疗宫颈癌的药物,其原料包括氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。本专利技术提供的药物以氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽为靶向载体,负载抗肿瘤药物,从而实现对宫颈癌的靶向治疗。本专利技术提供了如SEQIDNO:1所示氨基酸序列的多肽,并实验证明其对宫颈癌细胞或组织存在特异性识别的作用,因此可作为宫颈癌细胞的检测试剂或宫颈癌的诊断试剂,也能够作为宫颈癌靶向治疗药物的载体。本专利技术实验表明,该多肽仅能够识别宫颈癌细胞而对其他肿瘤细胞则无识别作用。该多肽靶向效果好,组织分布特异性强,又具有分子量小,肿瘤组织穿透力强,免疫原性低,且易制备等普遍特点,是一系列较为理想的宫颈癌靶向治疗药物载体,所以该多肽既可用于制备宫颈癌诊断试剂,又可用于制备宫颈癌靶向治疗药物,具有较广阔的应用前景。附图说明图1示各轮筛选后肿瘤组织中的噬菌体回收率;图2示ELISA检测第三轮筛选所得噬菌体单克隆对宫颈癌细胞的亲和力(特异性结合系数P/N=OD450筛选噬菌体单克隆/OD450原库随机噬菌体单克隆);图3示荷瘤裸鼠体内回输CSP-KQ噬菌体后肿瘤组织中的噬菌体回收率;图4示FITC-CSP-KQ在人宫颈癌SiHa、C-33A及ME-180细胞中的免疫荧光强度分析;图5示FITC-CSP-KQ在人宫颈癌组织中的免疫荧光强度分析。具体实施方式本专利技术提供了七肽及其在制备治疗和/或诊断宫颈癌的产品中的应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本专利技术技术。本专利技术利用噬菌体展示肽库技术在宫颈癌裸鼠移植瘤模型体内筛选得到1条可特异性靶向宫颈癌的7肽,并验证此多肽对宫颈癌细胞或组织存在靶向性,本专利技术的筛选方法包括:第一步:将噬菌体原肽库经尾静脉注射到荷瘤(C-33A)裸鼠体内循环15min,从肿瘤组织回收噬菌体,并将其与OD600=0.5大肠杆菌ER2738菌液充分混合,常温感染后,再将该噬菌体扩增、纯化。第二步:将第一步扩增纯化的噬菌体注射到新的荷瘤裸鼠体内,重复第一步,进行第二轮筛选,如此筛选进行3轮,以得到与宫颈癌组织结合特异性强、亲和力高的噬菌体多肽。第三步:以每轮筛选后噬菌体的回收率和免疫组化染色分析其在肿瘤组织中的富集情况(取相应的心、肝、脑、肾组织为对照)。第四步:将最后一轮筛选所得噬菌体单克隆化,用ELISA实验检测噬菌体单克隆对宫颈癌细胞株的亲和力,以原库噬菌体单克隆作为对照,当特异性结合系数P/N(OD450筛选噬菌体单克隆/OD450原库随机噬菌体单克隆)>2.1时,认为该克隆为阳性克隆,与肿瘤细胞结合有特异性。第五步:将最后一轮筛选所得噬菌体单克隆(包括第四步ELISA检测为阳性的噬菌体单克隆)进行噬菌体DNA提取和测序,对比分析得到重复率较高的多肽序列,即为特异性结合肽序列。第六步:将第五步所得重复率较高的单克隆噬菌体多肽回输至荷瘤裸鼠体内,验证其体内靶向效果。第七步:将第六步体内本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的多肽。

【技术特征摘要】
1.氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。2.氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽在制备靶向识别宫颈癌细胞的试剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述宫颈癌细胞为C-33A、SiHa和/或ME-180。4.一种宫颈癌细胞检测试剂盒,其特征在于,包括氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽。5.一种非诊断目的的宫颈癌细胞检测方法,其特征在于,以荧光染料标记氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的多肽作为检测试剂,对...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘小敏梁晓秋
申请(专利权)人:南华大学
类型:发明
国别省市:湖南,43

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