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人源化或全人源Notch4受体单克隆抗体药物的开发及应用制造技术

技术编号:18452683 阅读:24 留言:0更新日期:2018-07-18 10:53
人源化或全人源Notch4受体单克隆抗体的开发及应用。Notch4在一些特定病变组织中异常表达,尤其在许多肿瘤细胞如肝癌细胞中非常高的表达,并发挥癌基因作用,表明Notch4受体可以作为药物靶点。因此以Notch4单克隆抗体来开发相应的抗体靶向药物或临床诊断试剂将具有非常重要的临床应用价值。目前尚没有针对Notch4的人源化或全人源单克隆抗体。本发明专利技术首次公布人源化或全人源Notch4单克隆抗体的开发,并以此Notch4单克隆抗体为治疗性抗体药物,或为药物载体与各种生物活性分子(如化疗药物,放射性药物,诊断标记)偶联,构建各种人源化或全人源Notch4抗体靶向药物或抗体诊断标记,用于相关疾病的治疗与诊断。这对于相关疾病的预防与治疗有非常重要的临床应用价值。

Development and application of humanized or full human Notch4 receptor monoclonal antibody drugs

Development and application of humanized or full human Notch4 receptor monoclonal antibodies. The expression of Notch4 in some specific lesions, especially in many tumor cells, such as hepatoma cells, is highly expressed and plays the role of oncogene, indicating that Notch4 receptor can be used as a drug target. Therefore, using Notch4 monoclonal antibody to develop corresponding antibody targeting drugs or clinical diagnostic reagents will have very important clinical application value. Currently, there is no humanized or whole human monoclonal antibody directed against Notch4. The invention has first published the development of humanized or all human Notch4 monoclonal antibody, and using Notch4 monoclonal antibody as a therapeutic antibody drug, or a drug carrier coupled with a variety of bioactive molecules such as chemotherapeutic drugs, radiopharmaceuticals, and diagnostic markers, to construct a variety of humanized or all human Notch4 antibody targeting drugs. Or antibody diagnostic markers are used for the diagnosis and treatment of related diseases. This is of great clinical value for the prevention and treatment of related diseases.

【技术实现步骤摘要】
人源化或全人源Notch4受体单克隆抗体药物的开发及应用
本专利技术涉及到靶向抗癌药物的开发,属于生物医药或诊断试剂领域。
技术介绍
Notch信号在进化上非常保守,对决定细胞的命运起着关键作用。Notch信号参与调控各种正常和非正常的生理功能,在许多肿瘤中发挥着很重要的调控作用,但是,在不同肿瘤中,Notch信号都可能发挥不同的作用。了解Notch信号在特定肿瘤中的作用及作用机理对寻找靶向抗癌药物将非常有利。如,在肝癌的研究中,越来越多的证据表明Notch信号与肝癌发生与维持有非常紧密的联系。与肝癌紧密相关的乙肝病毒X蛋白(HBx)能够激活Notch信号,Notch受体在绝大多数肝癌病人肝癌组织中也比周围正常组织中表达量异常高,同时,激活Notch信号可促进细胞生长和肝癌发生,而抑制Notch信号则可抑制细胞生长。Notch4在肝癌,白血病等癌症细胞中作为癌基因发挥致癌作用。因此,Notch4可以作为一个受体靶点开发靶向抗肿瘤药物。单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)是药物开发的一个新的热点方向。单克隆抗体是大分子蛋白,特异性很强,亲和力很高,稳定性很好。这些抗体可以用于疾病治疗,疾病诊断或者健康检查。目前,全球已有几十个临床用mAb药物如adalimumab,这些药物被用于抗肿瘤治疗,自身免疫病等人类疾病。在全球生物药物市场,单克隆抗体药物市场快速增长,抗体药物在未来全球药物市场上大有可为。本专利技术将开发人源化或全人源Notch4受体单克隆抗体,以此为基础进一步开发抗体药物或抗体诊断试剂。小鼠(murine)和嵌合(chimeric)类单克隆抗体具有很强的免疫原性(immunogen),相关药物应用会诱导机体对外来抗体的免疫应答,产生严重副作用,药物效果也很有限。人源化和全人源单克隆抗体具有高度的人源特异性,大大降低机体识别对这些抗体的识别和免疫排斥,因而安全性大大提高。目前,开发人源化和全人源单克隆抗体技术也已出现,如噬菌体展示技术(phagedisplay),转基因小鼠技术(transgenicmice),细胞展示技术,新克隆生物技术(neoclonebiotechnology)等。人源化和全人源单克隆抗体可以直接作为抗体药物用于人类疾病治疗,同时,也可以被用作药物载体与其它非特异性,非选择性药物(如传统的肿瘤化疗药物)联合应用,形成抗体药物复合物(antibody-drugconjugates,ADCs)。这些抗体药物复合物ADCs变成了抗原靶向的特异性药物,进一步提高药物靶向性,减少对人体的副作用。这些人源化和全人源单克隆抗体也可用于与其它生物活性分子(如放射性同位素,核酸片段oligoDNA,多肽片段,siRNA,microRNA,荧光分子,抗肿瘤药物,免疫抑制剂,代谢调控因子等等)相连,构成相应的靶向复合物,广泛应用于疾病治疗,疾病诊断和健康检测等等。目前,人源化和全人源单克隆抗体主要是针对一些特定靶点如CD25,CD33,TNF-α,VEGF,VEGFR,EGFR。这些分子在特定组织表达或具有特定功能,因而可用于靶向治疗或临床检测。例如,VEGF为血管内皮细胞生长因子。Bevacizumab是人源化(humanized)抗VEGF单克隆抗体,用于治疗转移性直肠结肠癌。TNF-α为肿瘤坏死因子。Adalimumab是全人源抗TNF-α单克隆抗体,用于治疗类风湿关节炎。此外,还有更多人源化和全人源单克隆抗体正在临床试验中。单克隆抗体药物代表着全新的现代药物发展方向之一。Notch4受体已经被确认为特定的分子靶点,也被应用于靶向药物的研究开发,我们也长期开发以Notch信号为靶点开发抗肿瘤药物。然而,还没有针对Notch4的人源化或全人源单克隆抗体的开发。本专利技术首次公布人源化或全人源Notch4单克隆抗体的开发,并以此单克隆抗体为载体与各种生物活性分子(如化疗药物,放射性药物)偶联,构建各种抗体靶向药物复合物或用于疾病诊断的抗体复合物。
技术实现思路
本专利技术是确认人源化(humanized)或全人源(fullyhuman)Notch4受体单克隆抗体(monoclonalantibody)及其相关药物或诊断试剂的开发与应用。1,人源化(humanized)或全人源(fullyhuman)Notch4受体单克隆抗体。本专利技术是基于Notch4的表达特异性和功能特异性来开发人源化或全人源Notch4单克隆抗体(可以是,但不限于,IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA,IgD,IgE,IgM等,更倾向于IgG1。)。可以通过计算机模拟,预测,软件分析和实验,筛选Notch4特定序列片段作为免疫原(immunogen)。Notch4特定序列片段如,但不限于:HLCLCPPGFIGPDCEVNPDNCVSHQCQNGGTCQDG,LDTYTCLCPETWTGWDCSEDVDECETQGPPHCRNGGTCQN,SAGSFHCVCVSGWGGTSCEENLDDCIAATCAPGSTCIDRVGSFSCLCPPGRTGLLCHL,EDMCLSQPCHGDAQCSTNPLTGSTLCLCQPGYSGPTCHQDLDECLMAP等等。利用噬菌体展示(phagedisplay),细胞展示技术,转基因(transgenic)老鼠等技术获得所要求的人源化或全人源Notch4单克隆抗体。2,以人源化或全人源Notch4单克隆抗体开发抗体药物或抗体诊断试剂。2.1直接利用人源化或全人源Notch4单克隆抗体(mAb)作为疾病治疗药物。已经有一些人源化或全人源单克隆抗体药物已被成功开发和临床应用。Notch4单克隆抗体也可以直接应用于一些Notch4特异性的人类疾病如肿瘤的治疗。2.2利用人源化或全人源Notch4单克隆抗体作为载体,将相关生物活性分子与抗体相连,构建抗体-活性分子复合物,开发Notch4靶向的临床药物或临床诊断试剂。生物活性分子与Notch4单克隆抗体的复合物,其形式(formula)为:A-B-mAb。在A-B-mAb中,mAb代表全人源或人源化Notch4单克隆抗体。B为药物(A)与抗体(mAb)之间的连接链(linkers),可以是(但不限于)肽(peptide),单个氨基酸,葡萄糖醛酸(glucuronides),腙(hydrazone),二硫桥(disulfidebridge),硫醚(thioether),螯合基团(chelatinggroups)或其他等。也可以是可裂解的连接链(cleavablelinkers)如Val-Ala,或非裂解的连接链(Non-cleavablelinkers),或两个或多个联合应用(如多肽与硫醚一起作为连接链,多肽连接链一端连接螯合基团,另一端连接硫醚,构成完整的连接链),将药物与Notch4单克隆抗体连接在一起。连接链(linkers)的应用与策略主要基于不同抗体,不同药物等多方面的考量。肽可以是(但不限于)含两个或多个氨基酸(自然态氨基酸或修饰后的氨基酸),如DTyr-DSer,DSer-Lys-D-Tyr,Val-Ala等)。连接链B一端连接药物(A),另一端连接mAb。在药物(A)一测,连接链B的连接方式可以更偏向于,但不本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.根据权利要求1所述,其特征在于:Notch4是一个大分子的过膜蛋白,作为免疫原的Notch4特定序列片段可以是Notch4受体序列中的一段片段,例如,免疫原序列片段可以是,但不限于,HLCLCPPGFIGPDCEVNPDNCVSHQCQNGGTC,QDGLDTYTCLCPETWTGWDCSEDVDECETQG等等,用于构建人源化或全人源Notch4单克隆抗体的Notch4免疫原可以是一个序列或多个序列,序列长度可以变化,不限于所列片段之序列长度,个别氨基酸也可以不同,可以(但不限于)通过计算机模拟,预测,软件分析和实验,筛选最佳Notch4特定序列片段作为免疫原(immunogen), 通过(但不限于),噬菌体展示(phage display),细胞展示技术,转基因(transgenic)老鼠等技术获得所要求的人源化或全人源Notch4单克隆抗体,并进一步开发人源化或全人源Notch4单克隆抗体药物和单克隆抗体诊断试剂。

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述,其特征在于:Notch4是一个大分子的过膜蛋白,作为免疫原的Notch4特定序列片段可以是Notch4受体序列中的一段片段,例如,免疫原序列片段可以是,但不限于,HLCLCPPGFIGPDCEVNPDNCVSHQCQNGGTC,QDGLDTYTCLCPETWTGWDCSEDVDECETQG等等,用于构建人源化或全人源Notch4单克隆抗体的Notch4免疫原可以是一个序列或多个序列,序列长度可以变化,不限于所列片段之序列长度,个别氨基酸也可以不同,可以(但不限于)通过计算机模拟,预测,软件分析和实验,筛选最佳Notch4特定序列片段作为免疫原(immunogen),通过(但不限于),噬菌体展示(phagedisplay),细胞展示技术,转基因(transgenic)老鼠等技术获得所要求的人源化或全人源Notch4单克隆抗体,并进一步开发人源化或全人源Notch4单克隆抗体药物和单克隆抗体诊断试剂。2.根据权利要求1,2,所述,其特征在于:人源化或全人源Notch4单克隆抗体药物可以是,但不限于,Notch4单克隆抗体本身作为治疗性抗体,或Notch4单克隆抗体复合物(如,但不限于,Notch4单克隆抗体纳米材料复合物)。3.根据权利要求1,2所述,其特征在于:人源化或全人源Notch4单克隆抗体药物或诊断试剂可以是,但不限于,生物活性分子与Notch4单克隆抗体的复合物,其形式(formula)为A-B-mAb,在A-B-mAb复合物中,mAb代表人源化或全人源Notch4单克隆抗体,B为药物(A)与抗体(mAb)之间的连接链(linkers),可以是(但不限于)肽(peptide),单个氨基酸,葡萄糖醛酸(glucuronides),腙(hydrazone),二硫桥(disulfidebridge),硫醚(thioether),螯合基团(chelatinggroups)等,也可以是可裂解的连接链(cleavablelinkers)如Val-Ala,或非裂解的连接链(Non-cleavablelinkers),或两个或多个联合应用(如多肽与硫醚一起作为连接链,多肽连接链一端接螯合基团,另一端接硫醚,构成完整的连接链),将药物与Notch4单克隆抗体连接在一起;连接链(linkers)的应用与策略主要基于不同抗体,不同药物等多方面的考量,肽可以是(但不限于)含两个或多个氨基酸(自然态氨基酸或修饰后的氨基酸),如D-Tyr,DTyr-DSer,DSer-Lys-D-Tyr,Val-Ala等,连接链B一端连接药物(A),另一端连接抗体(mAb),在药物(A)一侧,连接链B的连接方式可以是,但不限于,葡萄糖醛酸(glucuronides),腙(hydrazone),二硫桥(disulfidebridge),硫醚(thioether),螯合基团(chelatinggroups),可以更偏向于,但不限于,增加抗体复合物的的亲水性,如,B可以带有一聚合物(polymer)或亲水聚合物(如polyethyleneglycol,polyvinylalcohol,polyvinylacetate),或为其他连接链,在mAb一侧,连接链B的连接方式也可以是,但并不限于,葡萄糖醛酸(glucuronides),腙(hydrazone),二硫桥(disulfidebridge),硫醚(thioether),螯合基团(chelatinggroups)等,A为生物活性分子,可以通过(但不限于)连接链(linkers)(B),如,二硫桥(disulfidebridge),腙(hydrazine),多肽,或者硫醚(thioether)等与Notch4单克隆抗体相连,A可以是(但不限于),治疗药物(therapeuticagents),细胞毒性药物(cytotoxicagents),检测标记(detectablelabels),核酸(nucleicacid)(如核酸,核酸片段(nucleicacidfragment)或oligoDNA,oligoRNA等),活性多肽(biologicallyactivepeptide),以及螯合基团chelatinggroups等等。4.根据权利要求4所述,其特征在于:与人源化或全人源Notch4单克隆抗体连接的生物活性分子A可以是,但不限于,任何用于治疗人类疾病或其他处理的治疗药物,细胞毒性药物,抗代谢药物,抗细胞增殖药物,这些药物可以是(但不限于)促进或抑制生物活性的,抗肿瘤的,抑制免疫的,细胞毒性的,或抗病毒的,可以是(但不限于)烷化剂,抗生素,抗代谢药,免疫调节剂,拓扑酶抑制剂,微管蛋白抑制剂,激素激动剂或拮抗剂...

【专利技术属性】
技术研发人员:孙立春易岚
申请(专利权)人:南华大学
类型:发明
国别省市:湖南,43

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