本发明专利技术公开了补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的医药用途。本发明专利技术提供的实验证明了补骨脂宁为HSP90AB1的有效抑制剂，可以用于制备抑制HSP90AB1的药物制剂。该药物制剂含有补骨脂宁或其药用盐或其前药，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型；药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料；药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂。
The use of psoralen as a HSP90AB1 inhibitor
The invention discloses psoralen as a pharmaceutical use of HSP90AB1 inhibitors. The experiment provided by this invention proves that psoralen is an effective inhibitor of HSP90AB1 and can be used for preparing a pharmaceutical preparation for inhibiting HSP90AB1. The pharmaceutical preparation contains psoralen or its medicinal salt or its precursor, also contains pharmaceutically acceptable carriers or excipients to make pharmaceutically acceptable formulations; pharmaceutically acceptable carriers or excipients include one or more solid, semisolid, or liquid excipients; pharmaceutically acceptable formulations include tablets. Capsules, granules, injections, pills, syrup, powder and ointment.
【技术实现步骤摘要】
补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的医药用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的医药用途。
技术介绍
热休克蛋白90(heatshockprotein，Hsp90)是ATP依赖的高度保守的分子伴侣，其可利用ATP水解产生的能量参与蛋白质的正确折叠，稳定蛋白质结构，参与细胞信号转导激素应答及转录调控等反应以及肿瘤凋亡、增殖相关通路的调节。Hsp90对因环境改变等各种应激状态下蛋白质稳定性的保持至关重要。除了在正常细胞中发挥重要作用外，Hsp90与底物蛋白相结合参与多种疾病的发生发展，如恶性肿瘤、自身免疫性疾病。他还是多种致癌蛋白的分子伴侣，包括表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)、人类表皮生长因子受体-2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2，HER2)、间质表皮转化因子(mesenchymal-epithelialtransition，MET)、蛋白激酶B(proteinkinaseB，AKT)等。目前认为，人类Hsp90主要包括4种亚型：Hsp90AA1和Hsp90AB1均位于胞质内，Grp94位于内质网中，而TRAP1亚型则定位于线粒体基质内。Hsp90AA1和Hsp90AB1有85％同源，但是两者作用不同，Hsp90AA1是诱导性表达，参与应激状态下细胞保护和细胞周期的调节，而Hsp90AB1是组成性表达，参与早期胚胎发育、信号转导及细胞长期适应性。目前在世界范围内，肺癌发生率和死亡率均居恶性肿瘤首位，其中约85％为非小细胞肺癌。作为分子伴侣，Hsp90有助于促肺癌蛋白质的折叠和成熟，例如EGFR和ALK。阻断这些伴侣蛋白发挥功能是癌症治疗中的一种全新策略。Ramalingam等对Hsp90新型抑制剂ganetespib的一项临床II期研究发现，在治疗晚期肺腺癌患者过程中，ganetespib与多西他赛(docetaxel)联合用药治疗与多西他赛单药治疗相比，可延长晚期肺腺癌患者的总生存期(参考文献：ArandomizedphaseIIstudyofganetespib,aheatshockprotein90inhibitor,incombinationwithdocetaxelinsecond-linetherapyofadvancednon-smallcelllungcancer.AnnOncol,2015,26:1741-1748)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的医药用途。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的医药用途。一种抑制HSP90AB1的药物制剂，含有补骨脂宁或其药用盐或其前药，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。进一步地，药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。进一步地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂。本专利技术发现，补骨脂宁可以与HSP90AB1相互结合(结合能力为阳性化合物17-AAG的10倍)并抑制HSP90AB1下游蛋白的表达，这表明补骨脂宁为HSP90AB1的有效抑制剂。附图说明图1为阳性药17-AGG与EGFP-HSP90AB1的相互作用关系图；图2为补骨脂宁与EGFP-HSP90AB1的相互作用关系图；图3为CompoundA与EGFP-HSP90AB1的相互作用关系图；图4为Neobavaisoflavone与EGFP-HSP90AB1的相互作用关系图；图5为不同浓度补骨脂宁干预2h对HSP90AB1下游客户蛋白AKT稳定性的影响；磷酸化AKT被去磷酸化，p-AKT显著减少，证明补骨脂宁降低了AKT的稳定性；图6为相同浓度(3μg/mL)补骨脂宁干预不同时间对HSP90AB1下游客户蛋白AKT稳定性的影响；磷酸化AKT被去磷酸化，p-AKT显著减少，证明补骨脂宁降低了AKT稳定性。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容。一、实验材料补骨脂宁纯度大于95％。补骨脂宁的衍生物CompoundA和Neobavaisoflavone自制，纯度大于95％。补骨脂宁、CompoundA和Neobavaisoflavone的化学结构式如下。二、实验方法1、光亲和纯化实验1)用1mM预冷的HCl润洗NHS-ActivatedSepharose4Flowagrosematrix，然后与过量的补骨脂宁在偶联缓冲液(0.2MNaHCO3，0.5MNaCl，pH8.3)中4℃孵育过夜；2)补骨脂宁固定于agarosebeads上。0.5M乙醇胺(pH8.3)封闭过量未反应的补骨脂宁。经缓冲液洗脱后Beads储存于4℃冰箱备用；3)分别将偶联前后的补骨脂宁溶液通过HPLC分析其偶联效率；4)1％NP-40裂解液(50mMTris-HCl(pH7.5)，150mMNaCl，1％NP-40)洗脱补骨脂宁偶联beads；5)洗脱后，与C57BL/6J小鼠肝脏组织裂解液混合，4℃孵育2h；6)结束后，用1％NP-40裂解液洗脱3次，再用5mM补骨脂宁进行洗脱；7)在竞争性洗脱实验中，蛋白裂解液与1mM补骨脂宁混合，4℃孵育2h后，再与besds混合孵育；8)结合至beads上的蛋白利用质谱进行鉴定。2、补骨脂宁与HSP90AB1的分子相互作用2.1重组EGFP-HSP90AB1蛋白的纯化制备1)pET28a-HSP90AB1-EGFP扩增并纯化以上质粒备用；2)单克隆：转化各自质粒于BL-21感受态细胞中，涂板过夜，次日挑取各自转化平板上单克隆接种于含50μg/mlKana的4mlLB培养基中，220rpm，37℃振摇过夜；3)扩增：次日按1:100接种于50μg/mlKan的500mlLB培养基中，220rpm，37℃振摇培养约2-4h，待菌体OD600值达到0.6左右为止；4)鉴定：取出1ml培养物，室温12000g离心2min，弃上清，100μl上样缓冲液重悬菌体沉淀；5)诱导表达：加入乳糖至终浓度0.8g/l，220rpm，22℃振摇培养过夜，诱导蛋白表达；6)鉴定：取出1ml培养物，室温12000g离心2min，弃上清，100μl上样缓冲液重悬菌体沉淀，剩余培养物4℃，4000g离心12min，弃上清，沉淀置-20℃冻存；7)裂解细胞：用400μlNi-IDABinding-Buffer(20mMTris-Hcl，10mM咪唑，0.5MNaCl，pH8.0)将菌体重悬，冰浴中超声破碎，条件为功率100W，工作5s，间歇7s，共25min，破碎液4℃，12000g离心20min，取10μl上清液加入等量的2x上样缓冲液，沉淀用400μl1x上样缓冲液重悬后取5μl，恒压150V进行12％SDS-PAGE，考马斯亮蓝R250染色显带；8)蛋白纯化：利用BiologicLP层析系统，破碎上清液以0.5ml/min流速上样至Ni-IDABinding-Buffer预平衡的Ni-IDA-Sepharose-CL-6B亲和层析柱。用Ni-IDABinding-Buffer本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的用途。
【技术特征摘要】
1.补骨脂宁用作HSP90AB1抑制剂的用途。2.一种抑制HSP90AB1的药物制剂，其特征在于：含有补骨脂宁或其药用盐或其前药，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。3.根据权利要求2所述的药...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓军，郑祖国，敬丹，程慧敏，李会军，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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