一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测待测物中D‑苦杏仁苷和/或L‑苦杏仁苷含量的方法，包括使用液相色谱法检测，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为苯基色谱柱；流动相由乙腈和水构成，乙腈作为流动相A，水作为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为1～5:95～99。该方法对D‑苦杏仁苷和L‑苦杏仁苷有较高的分离度。

A method for the determination of D- amygdalin and / or L- amygdalin in the tested substance

The present invention relates to a method for detecting the content of D, amygdalin and / or L bitter amygdalin in the subject matter, including the liquid chromatography, which includes a chromatographic column as a phenyl chromatographic column; the mobile phase is composed of acetonitrile and water, acetonitrile is a flow phase A, water as a mobile phase B, and a mobile phase A. The volume ratio of B to mobile phase is 1 ~ 5:95 ~ 99. The method has high separation of D amygdalin and L amygdalin.

【技术实现步骤摘要】
一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法
本专利技术属于医药化工领域，具体涉及一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法。
技术介绍
苦杏仁为蔷薇科植物山杏、西伯利亚杏、东北杏或杏的干燥成熟种子。性味苦，微温，有小毒；归肺、大肠经。具有降气止咳平喘，润肠通便之功效，多用于咳嗽气喘，胸满痰多，肠燥便秘。根据《中华人民共和国药典》(2015年版)记载，苦杏仁药材为蔷薇科植物山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.、西伯利亚杏PrunussibiricaL.、东北杏Prunusmandshurica(Maxim.)Koehne或杏PrunusarmeniacaL.的干燥成熟种子。夏季采收成熟果实，除去果肉及核壳，取出种子，晒干。苦杏仁苷是常见的氰苷类物质，也是传统中药苦杏仁中的有效成分，迄今已成为医药上常用的祛痰止咳剂、辅助性抗癌药物。苦杏仁中除了含有苦杏仁苷外，一般还含有β-葡萄糖苷酶。苦杏仁苷在β-葡萄糖苷酶的作用下生成葡萄糖和扁桃腈，而扁桃腈可以自发或经羟基腈裂解酶产生氢氰酸和苯甲醛。少量氢氰酸具镇静作用，可以麻痹咳嗽中枢，体现杏仁的平喘镇咳等效果；而大量的氢氰酸进入人体后则发生中毒危险。氰基易与氧化型细胞色素氧化酶分子中的Fe3+结合，阻断氧还电子传递，抑制呼吸酶活性，发生细胞窒息，最后导致呼吸麻痹死亡。因此苦杏仁中所含的苦杏仁苷既是其有效成分又是内源性毒性成分。苦杏仁苷在苦杏仁药材及制剂中通常以D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷两种形式存在，由于D-苦杏仁苷、L-苦杏仁苷化学性质接近，二者的色谱行为也较为一致，D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷分别如下式I和II所示：
技术实现思路
专利技术人发现，目前《中华人民共和国药典》(2015年版)尚未区分规定D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷的含量标准，同时也尚未有很好的检测方法能够将二者成功分离。本专利技术专利技术人惊奇地发现，使用本申请公开实施方案的方法能够快速有效地分离和检测D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷，且分离度较高。进一步，本申请公开实施方案的方法能够对苦杏仁药材中D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷进行定量测定，能够弥补《中华人民共和国药典》(2015年版)中关于苦杏仁药材及相关制剂标准在定量苦杏仁苷时无法准确测定L-苦杏仁苷的含量的空白，可为日后有关L-苦杏仁苷科学研究提供可靠的检测方法，同时对进一步制定中成药中苦杏仁苷的安全限量标准提供依据及方法支撑。本专利技术的一个目的是提供一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法。本专利技术第一方面提供一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法，包括使用液相色谱法检测，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为苯基色谱柱；流动相由乙腈和水构成，乙腈作为流动相A，水作为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为1～5:95～99。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：检测波长为205～210nm，例如207nm。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：流动相流速为0.8～1.2mL/min，例如1mL/min。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱的柱温为20～40℃，例如30℃。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：优选地，色谱柱长度200～300mm，例如250mm；优选地，色谱柱的直径3～6mm，例如4.6mm；优选地，色谱柱的填料粒径为3～10μm，例如5μm；优选地，色谱柱的填料孔径为12nm。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为YMC-PackPh色谱柱。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：采用外标法定量。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，所述液相色谱法的液相色谱法为高效液相色谱法。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷的色谱峰分离度大于或等于2.0。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，根据D-苦杏仁苷色谱峰计算的理论塔板数大于或等于7000。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，包括以下步骤的一步或多步：a)对待测物进行前处理，获得样品溶液；b)用液相色谱法检测样品溶液中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷的含量；c)根据样品溶液中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷的含量，计算待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷的含量。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，其中，所述待测物是植物，例如植物果实，例如苦杏仁药材。在一个实施方案中，本专利技术任一项的方法，包括对苦杏仁药材进行前处理的步骤，所述前处理的步骤包括以下一步或多步：1)将苦杏仁药材粉碎、过筛，收集通过筛网的苦杏仁药材粉末；优选地，步骤1)中，过筛为过2号筛；2)用甲醇浸提苦杏仁药材粉末，获得提取液；优选地，步骤2)中，每0.25g苦杏仁药材粉末用25mL甲醇浸提，优选地，步骤2)中，在超声条件下浸提，超声的时间为20～40分钟，优选地，步骤2)中，浸提前对含有苦杏仁药材粉末的甲醇称重，浸提后用甲醇补足损失的重量；3)过滤提取液，取续滤液，将续滤液用甲醇水溶液稀释定容；优选地，步骤3)中，每5mL续滤液用50％(v/v)甲醇水溶液定容至50mL；优选地，步骤3)中，过滤定容后的溶液，取续滤液；优选地，步骤3)中，过滤使用的滤纸是定量滤纸。在一个实施方案中，“分离度”定义为相邻两组分色谱峰的保留时间之差与两峰底宽度之和一半的比值，即(式中tR1、tR2分别为组分1、2的保留时间；W1、W2分别为组分1、2色谱峰的峰宽。在一个实施方案中，，术语“理论塔板数”是指色谱的柱效参数之一，用于定量表示色谱柱的分离效率。在一个实施方案中，“理论塔板数”以n来表示，即(式中tR为组分的保留时间；W为色谱峰的峰宽。在一个实施方案中，理论塔板数根据D-苦杏仁苷的色谱峰计算获得。在一个实施方案中，苯基色谱住为苯基官能团由来的π电子色谱柱。本申请公开实施方案的有益效果1)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法，能够较好地分离D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷，分离度较高；2)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法，平衡时间短，测定速度快；3)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法准确度高；4)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法精密度高；5)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法重现性好；6)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法灵敏度高；7)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法，线性方程的线性较好；8)本申请公开实施方案中对苦杏仁药材的前处理方法，该方法获得的药材样品溶液稳定性好；9)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法，能够为日后有关L-苦杏仁苷科学研究提供可靠的检测方法，同时对进一步制定中成药中苦杏仁苷的安全限量标准提供依据及方法支撑；10)本申请公开实施方案的液相色谱检测方法，对日后L-苦杏仁苷标准品的分离纯化及制备具有启迪或指导的作用。附图说明图1为实施例1药材样品溶液的高效液相色谱图；图2为实施例1对照样品溶液的高效液相色谱图；图3为对比例1药材样品溶液的高效液相色谱图；图4为对比例1对照样品溶液的高效液相色谱图。图1～4中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测待测物中D‑苦杏仁苷和/或L‑苦杏仁苷含量的方法，包括使用液相色谱法检测，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为苯基色谱柱；流动相由乙腈和水构成，乙腈作为流动相A，水作为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为1～5:95～99。

【技术特征摘要】
1.一种检测待测物中D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷含量的方法，包括使用液相色谱法检测，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为苯基色谱柱；流动相由乙腈和水构成，乙腈作为流动相A，水作为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为1～5:95～99。2.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：检测波长为205～210nm，例如207nm。3.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：流动相流速为0.8～1.2mL/min，例如1mL/min。4.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱的柱温为20～40℃，例如30℃。5.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：优选地，色谱柱长度200～300mm，例如250mm；优选地，色谱柱的直径3～6mm，例如4.6mm；优选地，色谱柱的填料粒径为3～10μm，例如5μm；优选地，色谱柱的填料孔径为12nm。6.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：色谱柱为YMC-PackPh色谱柱。7.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的检测条件包括：采用外标法定量。8.根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱法的液相色谱法为高效液相色谱法。9.根据权利要求1所述的方法，D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷的色谱峰分离度大...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小虹，王振华，刘建博，邵瑶昕，黄慧婷，庄轰发，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广东,44