The technical proposal of the invention belongs to the field of biological separation, in particular to a method for concentrating urokinase in human urine by foam separation. The process includes: first step, qualified urine detection; second step, qualified urine pretreatment; third step, two stage foam separation process. This process can effectively inhibit the inactivation of urokinase in the foam separation process by adding urokinase active stabilizer, which greatly improves the concentration ratio of urokinase activity (the ratio of the activity of urokinase is 100 to 233.3), and the recovery rate is increased (the total yield of the high urokinase is 75 to 90%).
【技术实现步骤摘要】
泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法
本专利技术的技术方案属于生物分离领域,尤其涉及泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法。
技术介绍
尿激酶,是从健康人尿中分离的,或从人肾组织或动物细胞培养中获得的一种酶蛋白。它可将不具有丝氨酸蛋白酶活性的纤溶酶原激活从而发挥其溶栓作用,在临床上可预防和控制心肌梗死和脑血栓等疾病。尿激酶的主要来源于人尿。目前,从人尿中分离尿激酶的方法主要包括沉淀法和吸附法,其中后者使用最为广泛。但是,人尿中尿激酶含量很低,造成沉淀法和吸附法的成本较高。泡沫分离技术具有低浓度下效率高、成本低和无污染等优点,在分离低浓度蛋白质方面有明显的优势。泡沫可以诱导蛋白质变性是降低蛋白质泡沫分离效果的主要原因之一。对此问题,上述及目前研究并未采取任何有效技术以减少泡沫诱导的尿激酶失活。
技术实现思路
专利技术的目的:为了提供一种效果更好的泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法,具体目的见具体实施部分的多个实质技术效果。为了达到如上目的,本专利技术采取如下技术方案:泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:合格尿液的预处理:向收集到的合格尿液中加入尿激酶活性稳定剂,加入质量为尿液质量的0.2~0.5%,然后调节尿液pH至8.7;两级泡沫分离工艺:第一级泡沫分离工艺:对预处理尿液进行泡沫分离,用泡沫分离塔间歇分离,温度为20.0~30.0℃,表观气速为1.7~3.4mm/s,液层高度为1.0~1.6m,泡沫层高度为0.6~1.2m,对流出塔顶的泡沫进行收集并消泡,待泡沫不能从塔顶流出时,即可停止鼓气;从塔顶流出的泡沫经过消泡后得到第一级消泡液,其尿激酶活性 ...
【技术保护点】
1.泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:合格尿液的预处理:向收集到的合格尿液中加入尿激酶活性稳定剂,加入质量为尿液质量的0.2~0.5%,然后调节尿液pH至8.7;两级泡沫分离工艺:第一级泡沫分离工艺:对预处理尿液进行泡沫分离,用泡沫分离塔间歇分离,温度为20.0~30.0℃,表观气速为1.7~3.4mm/s,液层高度为1.0~1.6m,泡沫层高度为0.6~1.2m,对流出塔顶的泡沫进行收集并消泡,待泡沫不能从塔顶流出时,即可停止鼓气;从塔顶流出的泡沫经过消泡后得到第一级消泡液,其尿激酶活性浓度为50.0~80.0IU/mL,该消泡液直接作为第二级泡沫分离的进料;第二级泡沫分离工艺:将第一级分离得到的消泡液进行泡沫分离,用泡沫分离塔间歇分离,温度为35.0~45.0℃,表观气速为0.8~2.6mm/s,液层高度为0.8~1.2m,泡沫层高度为0.8~1.4m,对流出塔顶的泡沫进行收集并消泡,待泡沫不能从塔顶流出时,即可停止鼓气;从塔顶流出的泡沫经过消泡方法后得到第二级消泡液,其尿激酶活性浓度为500.0~700.0IU/mL,该消泡液作为亲和层析法纯化尿激酶的原 ...
【技术特征摘要】
1.泡沫分离法浓缩人尿中尿激酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:合格尿液的预处理:向收集到的合格尿液中加入尿激酶活性稳定剂,加入质量为尿液质量的0.2~0.5%,然后调节尿液pH至8.7;两级泡沫分离工艺:第一级泡沫分离工艺:对预处理尿液进行泡沫分离,用泡沫分离塔间歇分离,温度为20.0~30.0℃,表观气速为1.7~3.4mm/s,液层高度为1.0~1.6m,泡沫层高度为0.6~1.2m,对流出塔顶的泡沫进行收集并消泡,待泡沫不能从塔顶流出时,即可停止鼓气;从塔顶流出的泡沫经过消泡后得到第一级消泡液,其尿激酶活性浓度为50.0~80.0IU/mL,该消泡液直接作为第二级泡沫分离的进料;第二级泡沫分离工艺:将第一级分离得到的消泡液进行泡沫分离,用泡沫分离塔间歇分离,温度为35.0~45.0℃,表观气速为0.8~2.6mm/s,液层高度为0.8~1.2m,泡沫层高度为0.8~1.4m,对流出塔顶的泡沫进行收集并消泡,待泡沫不能从塔顶流出时,即可停止鼓气;从塔顶流出的泡沫经过消泡方法后得到第二级消泡液,其尿激酶活性浓度为500.0~700.0IU/mL,该消泡液作为亲和层析法纯化尿激酶的原料;泡沫分离塔内所剩残液的尿激酶活性浓度为15.0~35.0IU/mL,该残液稀释至与合格尿液的尿激酶活性浓度相同,与预处理尿液混合均匀后,作为第...
【专利技术属性】
技术研发人员:李瑞,关晶,葛顺,朱友双,
申请(专利权)人:济宁医学院,
类型:发明
国别省市:山东,37
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