The invention discloses a primer, kit and method for detecting Clostridium perfringens and PGK gene in food. The sequence and probe sequence of the primer are recAF upstream primer, recAR downstream primer, probe recAP, pgkF of upstream primer, pgkR of downstream primer, probe pgkP, and the aim of the present invention is to overcome the existing technology. The present invention provides a method for detecting Clostridium perfringens and PGK in food middle class. The present invention is to provide a method for the detection of Clostridium perfringens and PGK in food by the above kit. It is simple, fast and accurate.
【技术实现步骤摘要】
检测食品中产气荚膜梭菌和pgk基因的引物、试剂盒和方法
本专利技术涉及一种检测食品中产气荚膜梭菌和pgk基因的引物,本专利技术还涉及一种包含上述引物用于检测食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的双重微滴式数字PCR(ddPCR)检测试剂盒,本专利技术还涉及一种采用上述试剂盒检测食食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的方法。
技术介绍
产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)是一种属于梭菌属的革兰氏阳性菌,具有荚膜,可产生芽孢,不具有运动性。C.perfringens是引起人畜共患病的主要病原菌之一,该菌的致病因子是其所产生的外毒素。目前,已发现C.perfringens产生的外毒素多17种,并以α型、β型、ε型和ι型4种毒素最为常见;C.perfringens还会产生其他多种毒素或者潜在的致毒因子,如肠毒素(CPE)。根据所产毒素的不同,C.perfringens可分为5种类型。在美国和一些发展中国家,由A型C.perfringens菌引起的食物中毒是最常见报道的食物中毒之一。由C.perfringens导致的食物中毒多与水、肉和禽肉制品相关。调查美国1998―2010年由C.perfringens引起食物中毒的结果显示,肉类食品占食物总量的92%,其中牛肉制品占46%,禽肉制品占30%,猪肉制品占16%。据报道,生鲜牛肉、猪肉、火鸡肉和鸡肉及各种肉制品中C.perfringens检出率均超过10%,部分日本鸡肉中检出率甚至高达84%。最常见C.perfringens引起食物中毒的错误操作发生于食物加工和准备的过程中,占所有因素的93%。比如,肉制 ...
【技术保护点】
1.一种检测食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的引物,其特征在于该引物和探针组合的序列分别为:上游引物recAF:tgggagattctcacgttggtc下游引物recAR:gcttgcttaaatggaggagca探针recAP:acaacaccaggtggtagagcgt上游引物pgkF:tcctttgctcacacatgggt下游引物pgkR:tgtgtaagccattcctccacc探针pgkP:agtgtttgctgctgacgacaacg
【技术特征摘要】
1.一种检测食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的引物,其特征在于该引物和探针组合的序列分别为:上游引物recAF:tgggagattctcacgttggtc下游引物recAR:gcttgcttaaatggaggagca探针recAP:acaacaccaggtggtagagcgt上游引物pgkF:tcctttgctcacacatgggt下游引物pgkR:tgtgtaagccattcctccacc探针pgkP:agtgtttgctgctgacgacaacg2.一种检测食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的数字PCR检测试剂盒,其特征在于该试剂盒中20.0μL反应体系包括以下组分:其中2×ddPCRSuperMix10.0μL,上、下游引物各1.0μL、探针各1.0μL,DNA模板4.0μL。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于所述上游引物recAF与上游引物pgkF的含量比例为0.1-1:1。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于所述下游引物recAR与下游引物pgkR的含量比例为0.1-1:1。5.一种检测食品中产气荚膜梭菌及pgk基因的方法,其特征在于包括以下步骤:A、提取样品DNA;B、将各反应组分加入如权利要求2所述的20.0μ...
【专利技术属性】
技术研发人员:蔡先全,吴冰,张宪臣,刘恭源,
申请(专利权)人:蔡先全,
类型:发明
国别省市:广东,44
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