胸腺素α1衍生物的制备方法技术

本发明专利技术公开一种胸腺素α1衍生物的制备方法，包括以下步骤：1)由Fmoc‑Cys(Trt)‑OH和取代度为0.3～0.5mmol/g的2‑氯三苯甲基氯树脂(2 Cl‑Trt Resin)出发，得到Fmoc‑Cys(Trt)‑2 Cl‑Trt树脂；2)将Fmoc‑Cys(Trt)‑2 Cl‑Trt树脂采用逐一偶联的方式合成得到胸腺素α1衍生物‑2‑氯三苯甲基氯树脂；3)将胸腺素α1衍生物‑2‑氯三苯甲基氯树脂进行裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经反相纯化得胸腺素α1衍生物纯品。

Preparation of thymosin alpha 1 derivatives

The invention discloses a preparation method of thymosin alpha 1 derivative, including the following steps: 1) a Fmoc Cys (Trt) 2 Cl 2 resin is obtained from Fmoc Cys (Trt) OH and 0.3 to 0.5mmol/g (2 Cl Trt Resin) with a substitution degree of 0.3 to 0.5mmol/g. The thymosin alpha 1 derivative, 2 chlorochloride three benzyl chloride resin, and 3) the thymosin alpha 1 derivative, 2 chlorochloride three benzyl chloride resin was cracked to obtain the thymosin alpha 1 derivative crude peptide, and the pure thymosin alpha 1 derivative was purified by reverse phase.

【技术实现步骤摘要】
胸腺素α1衍生物的制备方法
本专利技术属于药物化学
，尤其涉及一种胸腺素α1衍生物的制备方法。
技术介绍
胸腺素α1(Thymosinalpha1，Ta1)是从胸腺素组分5中分离出来的，由28个氨基酸残基组成的酸性多肽，不含蛋氨酸、半胱氨酸、芳香族氨基酸，相对分子质量为3108，pI值为4.2，N末端乙酰化但其对活性影响不显著，其序列为：Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys–Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH胸腺是体内的重要免疫器官，在淋巴系统发育和维持免疫系统的正常功能中起重要作用，尤其在抗感染，抗肿瘤，自身免疫性疾病和器官移植等作用中具有特殊的意义。随着机体年龄老化，胸腺会逐渐萎缩退化，肿瘤、感染、免疫性疾病等发病率逐渐增高。近年国外学者将胸腺肽提纯为几种单独成分，发现其中胸腺肽αl的生物学活性比胸腺肽混合物活性高10～1000倍。Chien等(Chien,R-Netal,Hepatology,1998；27:1383-138)用胸腺肽α1治疗慢性乙型肝炎患者，其HBVDNA血清清除率和HBeAg阴转率高于未用胸腺肽α1治疗的对照组，且病理学检查也发现治疗组炎症及纤维生成情况均显著低于对照组。在治疗肝纤维化方面胸腺肽αl也有独到之处。采用化学方法合成的N-乙酰化胸腺素α1已经上市，是1999年由意大利赛生公司开发的，商品名“日达仙”，临床应用治疗乙型肝炎，丙型肝炎，免疫缺陷病毒感染以及一些肿瘤，如黑色素瘤，肺癌，白血病，磷状上皮细胞癌，结肠癌等，效果较为显著。但是胸腺肽α1本身的药物动力学性质较差，在体内逗留时间较短而被排除，其半衰期仅为2小时，动物实验证明不能完全发挥其应有的药效。这就需要频繁注射胸腺肽α1，因此导致治疗的不方便和治疗成本升高，同时因为价格昂贵普通病人难以承受，治疗质量下降。因此，通过改造胸腺素α1的结构，使其结构更加稳定并利于进一步进行其他化学修饰(如脂肪酸化修饰、聚乙二醇修饰等)，从而提高在体内的半衰期。专利CN101166761A公开了以PEG树脂固相合成胸腺素及其类似物的方法；CN101484467A公开了以假脯氨酸二肽的形式固相合成胸腺素α1类似物的方法。综合参考国内外关于胸腺素α1类似物的制备专利以及相关的合成文献报道。发现其在技术上主要存在合成收率低、纯度低等缺陷，从而不能用于工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术的缺陷，提供一种胸腺素α1类似物的制备方法。所述制备方法收率高，制得的胸腺素α1类似物杂质含量低，纯度高，适合于产业化生产。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种胸腺素α1类似物的制备方法，包括如下步骤：1)由Fmoc-Cys(Trt)-OH和树脂出发，得到Fmoc-Cys(Trt)-树脂；2)将Fmoc-Cys(Trt)-2Cl-Trt树脂采用逐一偶联的方式合成得到胸腺素α1衍生物-树脂，其中包括多次脱保护和偶合反应；3)将胸腺素α1衍生物-树脂进行裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经纯化得胸腺素α1衍生物纯品。优选地，所述的腺素α1衍生物的制备步骤1)Fmoc-Cys(Trt)-树脂是Fmoc-Cys(Trt)-OH和树脂在碱性条件下作用生成的。具体是树脂经过DMF或DCM浸泡溶胀，然后加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，在碱性条件作用下反应制得Fmoc-Cys(Trt)-树脂。优选地，其中所述碱性条件的作用为二异丙基乙胺的作用。本专利技术所述制备方法步骤2)通过多肽固相合成法采用从C端向氮端逐一偶联的方式从Fmoc-Cys(Trt)-树脂氮端逐一加入氨基酸合成胸腺素α1衍生物树脂肽，其中所述逐一偶联的偶联剂选自二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、二异丙基乙胺和苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯中的一种或多种，比如二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑或二异丙基乙胺和苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。更优选地，上述二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑或二异丙基乙胺和苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯的摩尔比为1:3～4:1，或者1：2～2：1。专利技术所述的逐一偶联的Fmoc保护氨基酸分别为Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH。本专利技术所述制备方法步骤3)通过裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经纯化得胸腺素α1衍生物纯品。其中，所述裂解剂优选为三氟乙酸、三异丙基硅烷、二硫苏糖醇和水的混合物。进一步地，上述裂解剂中三氟乙酸、三异丙基硅烷、二硫苏糖醇、水的体积比为85～96：1～6：2～8:1～8，或者90～95：2～5：2～5:1～5。所述裂解剂分两次加入，两次加入的体积比为5～10:1～2。本专利技术所述制备方法步骤3)通过裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经纯化得胸腺素α1衍生物纯品，所述纯化优选为反相高效液相色谱纯化。优选地，所述反相高效液相色谱法具体为以反相十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，裂解得到的胸腺素α1衍生物上样后，用0.05％～0.1％TF/乙腈和0.05％～0.1％TFA/水反相纯化后冻干即得胸腺素α1衍生物纯品，或者用0.05％TF/乙腈和0.05％TFA/水。本专利技术中步骤(1)所述树脂选自PEG-王树脂、NovaPEG王树脂或2-氯三苯甲基氯树脂(2Cl-TrtResin)，比如2-氯三苯甲基氯树脂。进一步的，所述2-氯三苯甲基氯树脂的取代度为0.2～0.7mmol/g，或者0.3～0.5mmol/g。与现有技术相比，本专利技术所述制备方法操作简单，原料投入少，适合大规模产业化生产，成本低，收率高，并且制备得到的胸腺素α1衍生物纯度高，杂质含量低，应用前景可观。附图说明图1所示为胸腺素α1衍生物粗品的HPLC分析图谱；图2所示为胸腺素α1衍生物纯品的HPLC分析图谱。具体实施方式本专利技术的方法包括但不限于具体实施例，相关人员能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胸腺素α1衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)由Fmoc‑Cys(Trt)‑OH和树脂制备得到Fmoc‑Cys(Trt)‑树脂；2)采用逐一偶联的方式合成得到胸腺素α1衍生物‑树脂，其中包括多次脱保护和偶合反应；3)将胸腺素α1衍生物‑树脂进行裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经纯化得胸腺素α1衍生物纯品。

【技术特征摘要】
1.一种胸腺素α1衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)由Fmoc-Cys(Trt)-OH和树脂制备得到Fmoc-Cys(Trt)-树脂；2)采用逐一偶联的方式合成得到胸腺素α1衍生物-树脂，其中包括多次脱保护和偶合反应；3)将胸腺素α1衍生物-树脂进行裂解得到胸腺素α1衍生物粗肽，再经纯化得胸腺素α1衍生物纯品。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1)所述树脂选自2-氯三苯甲基氯树脂、NovaPEG王树脂或PEG-王树脂，比如2-氯三苯甲基氯树脂。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述树脂的取代度为0.2～0.7mmol/g，比如0.3～0.5mmol/g。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1)所述Fmoc-Cys(Trt)-树脂是Fmoc-Cys(Trt)-OH和树脂在碱的作用下制备得到。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述碱为二异丙基乙胺。6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)所述偶合反应的偶联剂选自二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、二异丙基乙胺和苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯中的一种或多种，比如二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑或者二异丙基乙胺和苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三氮唑的摩...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭超，闫成玉，周友雷，刘兰海，袁恒立，
申请(专利权)人：江苏豪森药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32