舌苔简明弯曲杆菌丰度作为测定胃炎癌转化风险的生物标志物的应用及相关的确定系统技术方案

本发明专利技术提供了检测一种无损的生物标志物的丰度的试剂在制备用于胃炎癌转化风险测定的组合物中的应用，其中该生物标志物是患者舌苔中的简明弯曲杆菌。还提供了一种用于测定胃炎癌转化风险的检测试剂盒和一种胃炎癌转化风险测定系统。该胃炎癌转化风险测定系统用来测定一种与胃炎癌转化相关的生物标志物的丰度，包括：所述试剂盒，用于确定舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果；舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分，用于根据该定量检测结果，确定舌苔中简明弯曲杆菌的丰度。

【技术实现步骤摘要】
舌苔简明弯曲杆菌丰度作为测定胃炎癌转化风险的生物标志物的应用及相关的确定系统
本专利技术涉及检测一种生物标志物的丰度的试剂在制备用于胃炎癌转化风险测定的组合物中的应用，其中该生物标志物是患者舌苔提取物中的简明弯曲杆菌；本专利技术还涉及一种用于测定胃炎癌转化风险的检测试剂盒、一种胃炎癌转化风险测定系统、以及一种胃炎癌转化风险指标的测定方法。
技术介绍
近几十年的流行病学资料以及越来越多的临床证据表明，“非可控炎症”与肿瘤发生密切相关[1]。目前全球至少有15％的恶性肿瘤，尤其是消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统肿瘤源于非可控炎症[2]。例如，结肠癌的发生与慢性溃疡性结肠炎、克罗恩氏病等炎症性肠病相关[3,4]；食管癌的发病机理与炎症有很密切的关系[5]；胃癌的发生与胃炎有很强的相关性[6]。胃癌的发生是一个多阶段，多因素的过程。从最初的慢性胃炎，发展为萎缩性胃炎、肠化、异型增生，直到胃癌的发生[7]。因此，找到与炎癌转化过程相关的生物标志物，对于肿瘤预防、早期诊断与治疗具有重大科学价值和现实意义。许多研究者致力于寻找与炎癌转化相关的生物标志物。但这一过程存在两个难点。首先，炎癌转化是一个长期的过程，且炎症转向肿瘤是小概率事件。有研究发现在30年的病程中，累积约18％的炎症性肠病患者最终进展为大肠癌[4,8]。在这一漫长的过程中，很难做到长期坚持采样。其次，从组织采样对患者有一定的损伤，连续采样不利于患者的健康。因此，为了达到预防肿瘤和阻断炎癌转化的目标，人们迫切需要一种无损的、适于长期监测的生物标志物。本专利技术人通过对93例胃炎患者和50例健康人的舌苔微生物高通量测序和生物信息学分析发现，舌苔中的简明弯曲杆菌，与胃炎癌转化密切相关，有望成为一种客观、无损、适于长期监测的新型生物标志物。本专利技术提供了一种检测舌苔简明弯曲杆菌、用于确定胃炎癌转化风险的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术提供了一种检测舌苔简明弯曲杆菌的试剂盒，根据试剂盒的结果，通过确定部分得到简明弯曲杆菌的丰度信息，用于确定胃炎癌转化的风险。首先，专利技术人发现了舌苔中简明弯曲杆菌的丰度与胃炎的发生及胃炎癌转化有很强的相关性；其次，专利技术人提供了一个可定量检测简明弯曲杆菌的试剂盒；最后，专利技术人实现了一种基于试剂盒检测结果得到舌苔简明弯曲杆菌丰度的计算系统，并预测胃炎癌转化的风险。根据本专利技术的一个方面，提供了检测一种生物标志物的丰度的试剂在制备用于胃炎癌转化风险测定的组合物中的应用，其中该生物标志物是患者舌苔中的简明弯曲杆菌。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种用于测定胃炎癌转化风险的检测试剂盒，包括以下组分：试剂A：简明弯曲杆菌引物试剂B：细菌的16s引物试剂C：土壤微生物DNA强力提取试剂盒试剂D：PBS缓冲液或生理盐水试剂E：反转录qPCR预混液(如TransStartTopGreenqPCRSuperMix、Roche-FastStartUniversalSYBRGreenMaster、PowerUpTMGreenMasterMix等)根据本专利技术的又一个方面，提供了一种胃炎癌转化风险测定系统，其特征在于：该胃炎癌转化风险测定系统用来测定一种与胃炎癌转化相关的生物标志物的丰度，包括：上述的试剂盒，用于确定舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果，舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分，用于根据上述定量检测结果，确定舌苔提取物中简明弯曲杆菌的丰度。根据本专利技术的又一个方面，提供了一种胃炎癌转化风险指标的测定方法，其特征在于：该胃炎癌转化风险指标是患者舌苔中的简明弯曲杆菌的丰度，所述测定方法包括：上述的试剂盒，确定舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果，用舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分，根据上述定量检测结果，确定舌苔提取物中简明弯曲杆菌的丰度。附图说明图1显示了本专利技术的实施例的实验结果中舌苔简明弯曲杆菌的丰度在正常人与胃炎病人中存在显著差异的情况。图2显示了本专利技术的实施例实验结果中舌苔简明弯曲杆菌的丰度在胃炎癌转化过程中逐渐上升的情况。图3显示了根据本专利技术的一个实施例的胃炎癌转化风险测定系统。具体实施方式一、舌苔简明弯曲杆菌的定量检测首先，运用本专利技术中的试剂盒对舌苔中简明弯曲杆菌做定量检测结果。本实施例中的试剂盒，包括以下组分：(其中，土壤微生物DNA强力提取试剂盒中的试剂代号是C1-C5，土壤微生物DNA强力提取试剂盒的代号是C。)(1)试剂A：简明弯曲杆菌引物(2)试剂B：细菌的16s引物(3)试剂C：土壤微生物DNA强力提取试剂盒(4)试剂D：PBS缓冲液或生理盐水(5)试剂E：反转录qPCR预混液(如TransStartTopGreenqPCRSuperMix、Roche-FastStartUniversalSYBRGreenMaster、PowerUpTMGreenMasterMix等)二、舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分其根据上述试剂盒得到的舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果，确定舌苔中简明弯曲杆菌的丰度。根据本专利技术的一个实施例，该确定部分的处理包括：－将内参16srRNA基因的三次重复值取平均，得到Cp_16s＝(Cp1+Cp2+Cp3)/3；－将简明弯曲杆菌的三次重复值取平均，得到Cp_cc＝(Cp4+Cp5+Cp6)/3；－计算2^(Cp_16s-Cp_cc)，从而确定舌苔中简明弯曲杆菌的丰度。如图3所示，根据本专利技术的一个方面，提供了一种胃炎癌转化风险测定系统，该胃炎癌转化风险测定系统用来测定一种与胃炎癌转化相关的生物标志物的丰度，包括：上述的舌苔简明弯曲杆菌的定量检测试剂盒，上述舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分，用于根据上述试剂盒得到的检测结果，确定舌苔提取物中简明弯曲杆菌的丰度。本专利技术人收集了93个胃炎病人和50个健康人的舌苔样本，拍摄了舌苔图像，并统计了所有93个胃炎病人的中医表型和胃组织病理信息。通过本专利技术所述方法，得到每个舌苔样本中，简明弯曲杆菌的丰度。经过统计分析，本专利技术人发现与健康人的舌苔微生物相比，简明弯曲杆菌的丰度在胃炎病人的舌苔中显著增多，即简明弯曲杆菌可以作为区分胃炎病人与正常病人的生物标志物。通过比较胃炎癌转化过程中微生物的变化，本专利技术人发现舌苔上简明弯曲杆菌的丰度在这一过程中逐渐升高，表明舌苔上的简明弯曲杆菌能够作为胃炎癌转化的生物标志物。这也是首次在舌苔上发现与胃炎癌相关的微生物，其构成了一种客观、无损、适于长期监测的新型标志物。实施例：1、实验设计和样本收集。从医院采集的93个胃炎病人被选取入组。对于所有这93个病人，用舌像仪对舌苔拍照，刮取其的舌苔样本，并记录了病人的性别、年龄、病理结果以及中医表型等信息。同时，在清华大学选择了50个健康人作为正常对照。对其拍摄了舌苔图像，并收集了舌苔样本，记录了年龄性别等信息。从获取的上述93个胃炎病人和50个健康人的舌苔样本中，提取出微生物的DNA，并确定每个样本中简明弯曲杆菌的含量，具体操作是：一、使用上述试剂盒检测舌苔中的简明弯曲杆菌的含量：a、舌苔的刮取：a1、准备3个标识好序号1，2，3的1.5mlEP管，加入1ml试剂Da2、取1支拭子，由舌根至舌尖方向刮取舌苔(稍用力)，转动拭子刮取约30次，之后将拭子放入1号EP管中，晃动拭子以洗下刮取物，然后在2，3号管中依次洗涤刮取物。取第2支拭子，刮取舌苔之后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测一种无损的生物标志物的丰度的试剂在制备用于胃炎癌转化风险测定的组合物中的应用，其中该生物标志物是患者舌苔提取物中的简明弯曲杆菌。

【技术特征摘要】
1.检测一种无损的生物标志物的丰度的试剂在制备用于胃炎癌转化风险测定的组合物中的应用，其中该生物标志物是患者舌苔提取物中的简明弯曲杆菌。2.一种用于测定胃炎癌转化风险的检测试剂盒，包括以下组分：试剂A：简明弯曲杆菌引物，试剂B：细菌的16s引物，试剂C：土壤微生物DNA强力提取试剂盒，试剂D：PBS缓冲液或生理盐水，试剂E：反转录qPCR预混液。3.一种胃炎癌转化风险测定系统，其特征在于：该胃炎癌转化风险测定系统用来测定一种与胃炎癌转化相关的生物标志物的丰度，包括：根据权利要求2所述的试剂盒，用于确定舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果，舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分，用于根据上述定量检测结果，确定舌苔提取物中简明弯曲杆菌的丰度。4.根据权利要求3所述的胃炎癌转化风险测定系统，其特征在于借助所述试剂盒获取所述确定舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果的操作包括：对于反应结束得到每孔的Cp值，设16srRNA基因序列N组平行的Cp值分别为Cp1，Cp2，…CpN；简明弯曲杆菌序列N组平行的Cp值分别为Cp(N+1)，……Cp2N，把Cp1-Cp2N作为舌苔简明弯曲杆菌的定量检测结果。5.根据权利要求4所述的胃炎癌转化风险测定系统，其特征在于所述舌苔简明弯曲杆菌丰度确定部分所进行的处理包括：将内参16srRNA基因的N次重复值取平均，得到Cp_16s...

【专利技术属性】
技术研发人员：李梢，张学工，崔佳星，崔鸿飞，杨明冉，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11