可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品及应用制造技术

本发明专利技术提供一种可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品及应用，包括阳性参考品、阴性参考品；所述阳性参考品包含来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150‑200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述阴性参考品包含有非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150‑200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述的TN1选自T21、T18、T13中的一种或几种；所述DNA保护剂包含金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸盐。本发明专利技术提供的质控品通过向每个参考品中加入保护剂，抑制了质控品中参考品的DNA降解，使其更稳定，更易保存，延长了有效期。

【技术实现步骤摘要】
可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品及应用
本专利技术涉及产前诊断
，特别是涉及可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品及应用。
技术介绍
染色体非整倍体，是指细胞中染色体数目非正常配子染色体数目的整数倍，即细胞中某一条或几条染色体数目的增加或减少。人类染色体非整倍体的危害极其严重，是导致自发流产、胚胎停育、先天性出生缺陷、智力低下、生长发育迟缓、多发畸形的主要原因之一。常见的常染色体非整倍体疾病包括21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征,在新生儿中的发病率分别为1/800-1/600，1/7000-1/3500，1/6000-1/5000。当前，染色体非整倍体引起的三体综合征缺乏有效的治疗手段。因此，通过产前筛查与产前诊断积极开展出生缺陷预防工作是实现优生优育和提高人口质量的重要保障。常用的筛查诊断方法包括传统的无创、有创产前诊断技术及无创产前基因检测技术。其中，传统的无创性产前诊断技术有遗传学超声检查、唐氏血清学筛查等方法。无创性检查，易于被孕妇及其家庭接受，但具有较高的漏检率。传统的有创性产前诊断方法包括羊水穿刺、绒毛取样、经皮脐血管穿刺术、植入前胚胎遗传学诊断、胎儿镜等。此类方法通过获取胎儿的羊水、绒毛、脐血或胎儿组织进行诊断，其检测准确率高，是进行染色体非整倍体产前诊断的金标准。但是这些侵袭性的产前诊断技术可能造成0.5％-1％流产风险。由于传统方法和分子诊断方法的局限性，多年来科学家致力于寻找一种无创、经济、准确的产前诊断方法。1997年，Lo等人首次证明孕妇外周血血浆和血清中存在着稳定的胎儿游离DNA(cell-freefetalDNA,cffDNA)，后续研究证实这种游离DNA占全部碎片化DNA的10％-20％，这个发现为无创产前DNA检测技术开辟了新的道路。cffDNA在母体血浆中的含量与孕周存在一定的关系，胎儿cffDNA最早可出现在妊娠第4周的母体外周血中，当孕周大于10周时，几乎所有孕妇的外周血中都能检测到胎儿cffDNA。通常，cffDNA片段长度约为150-200bp，当胎儿染色体数目发生改变时，该染色体的cffDNA比例就会超出正常范围。因此，通过数据分析统计染色体DNA片段在血浆中的比例，可获得染色体数目信息。随着下一代测序技术(NextGenerationSequencing,NGS)的发展，其测序结果可分析出DNA片段的长度分布，进而将胎儿DNA与母体区分开来，且相对于传统测序技术具有通量高、成本低的特点，一次测序可以产生巨大数据量，使得单个核酸测序的成本则急剧下降，加速了cffDNA的研究进展。这种革命性的方法为全球无数的孕妇提供了无创性产前诊断的可能性。无创产前诊断NIPT(Non-invasivePrenatalTesting)技术对母体外周血浆中的胎儿游离DNA进行测序，并将测序结果进行生物信息学分析，可以从中得到胎儿的遗传信息，进而判断胎儿是否患有染色体非整倍体疾病。相比传统诊断方式，NIPT技术具有以下优势：①检出率高：相比绒毛取样、羊水穿刺、血清学筛查等传统技术，NIPT准确性高，且漏诊率更低，风险更低；②操作简便：仅需抽取适量孕妇外周血，无需高难度的穿刺手术便可获得检测材料；③时间周期：检测周期短，一般一周左右出具准确检测报告，为孕妇后续进一步确诊预留充足时间；④检测全面：除了能同时检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征，还能检测XXY(克兰费尔特综合征)和XO(特纳综合征)等性染色体整倍体缺陷和大片段非整倍体基因缺陷筛查；⑤适用人群广：12-24孕周孕妇均可检测，检测结果不受孕妇年龄、种族等影响。NIPT因无创、安全、早期、准确、快速的特点得到普遍认可和推广。目前，高通量基因测序检测21、18、13三体综合征试剂盒性能评价用的质控品普遍存在核酸降解严重的问题，远远不能满足实际操作中对质控品有效期的需求。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种核酸降解少的可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，该质控品有效期长，能够满足实际操作中对质控品有效期的需求。一种可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，包括阳性参考品、阴性参考品；所述阳性参考品包含来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述阴性参考品包含有非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述DNA保护剂包含金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸盐。在其中一些实施例中，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为100-500μM、所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为80-180mM、所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为20-60nM。在其中一些实施例中，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为200-400μM，所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为80-120mM，所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为30-50nM。在其中一些实施例中，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为250μM，所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为100mM，所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为40nM。在其中一些实施例中，非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段，选自如下情况中的至少一种：核型正常孕妇血浆游离DNA；核型分析结果为47、TN2人基因组DNA扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段；所述的TN2选自T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8、T9、T10、T11、T12、T14、T15、T16、T17、T19、T20、T22、XXY、X0、XXX、XYY中一种或几种。在其中一些实施例中，所述的TN1选自T21、T18、T13中的一种或几种。在其中一些实施例中，还包括检测限参考品、微缺失微重复参考品、嵌合体参考品、重复性参考品；所述检测限参考品包含来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段；所述微缺失微重复参考品包含来自染色体微缺失微重复人基因组DNA扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段；所述嵌合体参考品包含来自TN1嵌合体的人基因组DNA扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段；所述重复性参考品来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段。在其中一些实施例中，所述检测限参考品、微缺失微重复参考品、嵌合体参考品、重复性参考品中一种或几种参考品还含有所述DNA保护剂。本专利技术还公开了包括上述的质控品的试剂盒。本专利技术还公开了上述的质控品在染色体非整倍体检测试剂盒的质量鉴定中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的质控品通过向每个参考品中加入金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸盐，并进一步控制金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸加入后在质控品中的浓度分别为100-500μM、80-180mM、20-60nM，抑制了质控品中DNA降解，使其更稳定，更易保存，延长了有效期。附图说明图1为A1组DNA检测结果图；图2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，包括阳性参考品、阴性参考品；所述阳性参考品包含来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150‑200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述阴性参考品包含有非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150‑200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述DNA保护剂包含金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸盐。

【技术特征摘要】
1.一种可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，包括阳性参考品、阴性参考品；所述阳性参考品包含来自核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述阴性参考品包含有非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段和DNA保护剂；所述DNA保护剂包含金精三甲酸铵盐、甘氨酸、苯丁抑制素盐酸盐。2.根据权利要求1所述的可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为100-500μM、所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为80-180mM、所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为20-60nM。3.根据权利要求2所述的可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为200-400μM，所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为80-120mM，所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为30-50nM。4.根据权利要求3所述的可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，所述金精三甲酸铵盐在所述参考品中的浓度为250μM，所述甘氨酸在所述参考品中的浓度为100mM，所述苯丁抑制素盐酸盐在所述参考品中的浓度为40nM。5.根据权利要求1至4任一项所述的可稳定保存的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，其特征在于，非来源于所述核型分析结果为47、TN1人基因组DNA的扩增产物的150-200bp区间内的DNA片段，选自如下情况中的至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈嘉昌，陈肖燕，柳俊，张瑶，蒋圆玲，
申请(专利权)人：广州市金圻睿生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广东,44