The present invention relates to a flu virus imprinted fluorescence sensor immobilized on 96 pore enzyme plate and its application, belonging to the field of biomolecular detection technology. Specifically, the influenza virus particles are immobilized on the 96 hole enzyme labeled plate as a template molecule, and a thin layer of polyaniline is polymerized to imprint the template virus, the template molecules are eluted and the 2-D imprinted holes are left to identify the target virus, and the HRP is used as a biomarker directly on the surface of the influenza virus immobilized on the imprinted membrane, HRP can effectively catalyze the sensitive fluorescence effect of the H2O2 OPDA system. The fluorescence intensity produced is directly related to the concentration of influenza virus. Thus, a novel influenza virus fluorescent sensor is constructed. The imprinted polymer film prepared by it has the characteristics of artificial antibody, which can be used for identification and detection of influenza virus and has been successfully applied to the detection of influenza virus. Detection of serum samples. The sensor provides a highly stable, highly specific and highly sensitive method for identification and detection of influenza viruses.
【技术实现步骤摘要】
一种96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器及应用
本专利技术涉及一种96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器及应用,属于生物分子检测
技术介绍
流行性感冒病毒,简称流感病毒,属于正黏液病毒科,是一种单股负链RNA病毒,它会造成急性上呼吸道感染,并通过呼吸、讲话等途径借由空气迅速的传播,在世界各地常会有周期性的大流行。新的亚型流感病毒造成的流感大流行威胁到人类的健康,随着人类经济及文化的全球化,为流感全球性大流行创造了合适的条件。为实现流感病毒传播的潜伏期进行检测与预防,一些简便的仪器及快速低成本的检测方法受到极大关注。预防流感病毒和可能的流感大流行的最重要的先决条件是尽早隔离,检测病毒核酸存在。发展新型流感病毒检测方法意义重大,重在改善方法的条件和属性,以达到易操作,便携式仪表,快速测试和低成本等要求。分子印迹技术,是模拟自然界所存在的分子识别作用,制备包裹模板分子的聚合物网状结构的人工受体,它是涉及高分子化学、生物化学、材料化学、分析化学等学科的一种用于分离纯化的先进技术。基于“分子印迹聚合物(MIPs)”取代生物分子作为识别元件仿生传感器,在21世纪逐渐成为传感器领域的研究热点,可望在将来逐步取代不稳定的传统生物传感器。迄今,分子印迹技术已被成功应用于小分子识别,由于生物分子的特殊性质,如大的分子尺寸,复杂的空间结构,大量的功能基团,水溶性等,对生物分子的印迹技术仍然为国内外研究的重点与难点。当目标物分子尺寸进一步放大到病毒颗粒时,又将遇到新的困难与挑战,因此关于分子印迹技术在病毒中的应用少有报道。然而由病毒引起的疾病不容小觑,如流感病毒引 ...
【技术保护点】
1.一种96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器,其特征在于:将一定量流感病毒作为模板分子固定于96孔酶标板上,接着制备一层聚苯胺分子印迹膜,洗去模板病毒,形成的分子印迹膜可特异性识别目标病毒,并通过辣根过氧化物酶HRP标记于固载在印迹膜上流感病毒的表面,被吸附的HRP催化过氧化氢 H2O2 –邻苯二胺 OPDA体系产生灵敏的荧光效应,从而构建一种新型流感病毒荧光传感器。
【技术特征摘要】
1.一种96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器,其特征在于:将一定量流感病毒作为模板分子固定于96孔酶标板上,接着制备一层聚苯胺分子印迹膜,洗去模板病毒,形成的分子印迹膜可特异性识别目标病毒,并通过辣根过氧化物酶HRP标记于固载在印迹膜上流感病毒的表面,被吸附的HRP催化过氧化氢H2O2–邻苯二胺OPDA体系产生灵敏的荧光效应,从而构建一种新型流感病毒荧光传感器。2.根据权利要求1所述的96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器,其特征在于:包括以下步骤:1)模板分子的固定:于96孔酶标板中,每孔加入30μL一定浓度的流感病毒,室温孵育1小时,超纯水洗去未键合的病毒颗粒;2)分子印迹膜的制备:苯胺与过硫酸铵APS的摩尔比例为3∶1,在试剂管中预聚合,并加入到步骤(1)处理后的96孔酶标板的板孔中,每孔加入50μL,孵育30min,超纯水洗去未聚合的反应物,200μL洗脱液孵化,洗去模板病毒,超纯水水洗去残留洗脱液;3)印迹膜的识别目标病毒:取一定浓度范围的目标流感病毒入到步骤(2)得到的96孔酶标板的板孔中,每孔加入30μL,孵育60min,超纯水洗去未吸附的目标病毒;4)HRP标记于固载在印迹膜上流感病毒的表面:吸附了目标病毒的96孔酶标板中加入50μL一定浓度HRP溶液,轻轻的震动,室温孵化,超纯水洗去未吸附的HRP;5)光化学反应:新鲜配制一定浓度的H2O2溶液和OPDA避光保存,二者等体积混合,向步骤(4)获得的96孔酶标板中每孔加入100μL,避光37℃恒温一定时间,测定荧光强度,激发波长为468nm,最大发射波长567nm处的荧光强度作为定量分析的依据。3.根据权利要求1所述的96孔酶标板固载的流感病毒印迹荧光传感器,其特征在于:...
【专利技术属性】
技术研发人员:李艳霞,郑黎云,陈毅挺,黄露,娄本勇,
申请(专利权)人:闽江学院,
类型:发明
国别省市:福建,35
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