人直肠癌原代细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人直肠癌原代细胞及其应用，所述人直肠癌原代细胞为人直肠癌原代细胞HRC‑11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017147，所述人直肠癌原代细胞HRC‑11能够完成各类分子生物学实验，并且由于原代细胞实验结果较细胞株实验结果更可靠，且更接近临床个体实验结果，因此HRC‑11细胞的建立，对研究蒙古人种(黄种人)直肠癌的发病和治疗具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
人直肠癌原代细胞及其应用
本专利技术涉及大肠癌肿瘤细胞领域，特别涉及人直肠癌原代细胞及其应用。
技术介绍
直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤，目前，全球直肠癌由来的可用于分子生物学实验的细胞株仅有SW1463一株，并且现有SW1463细胞株是女性高加索人种(白种人)由来的细胞株，且细胞株分子生物学实验结果与临床个体结果的差异很大，一般认为原代细胞实验结果较细胞株实验结果更可靠，且更接近临床个体实验结果，另外，SW1463细胞的培养方法与大多细胞株(5％CO2)不同，培养条件为(Air，100％)；培养基为Leibovitz'sL-15Medium，相对也较昂贵。蒙古人种主要分布于中国、朝鲜、日本、西伯利亚、中南半岛、美洲和北极地区，是四大人种中分布范围最广、人数最多的人种，因此，蒙古人种(黄种人)直肠癌原代细胞的建立将对研究人直肠癌的发病和治疗具有重要意义。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供人直肠癌原代细胞及其应用，从而克服现有的直肠癌细胞株分子生物学实验结果与临床个体结果的差异很大的缺陷。为实现上述目的，本专利技术提供了一种人直肠癌原代细胞，所述人直肠癌原代细胞为人直肠癌原代细胞HRC-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C2017147。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的癌胚抗原(CEA)的产量是0.1-1.7ng/106细胞/10天。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的癌胚抗原的产量是1.3-1.7ng/106细胞/10天。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的肿瘤相关抗原CA199的表达量为1-9U/106细胞/10天。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的肿瘤相关抗原CA199的表达量为5-9U/106细胞/10天。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的倍增时间为30-34小时。优选地，上述技术方案中，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的倍增时间为32小时。本专利技术还提供了上述人直肠癌原代细胞在放疗敏感性检测中的应用。本专利技术还提供了上述人直肠癌原代细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本申请所涉及的人直肠癌原代细胞HRC-11是蒙古人种(黄种人)由来的直肠癌原代细胞，并且人直肠癌原代细胞HRC-11能在5％CO2的培养条件下生长，且使用培养基为常见基础培养基RPMI-1640，也能够完成各类分子生物学实验，并且由于原代细胞实验结果较细胞株实验结果更可靠，且更接近临床个体实验结果，因此人直肠癌原代细胞HRC-11细胞的建立，对研究蒙古人种(黄种人)直肠癌的发病和治疗具有重要意义。保藏信息本专利技术所涉及的人直肠癌原代细胞HRC-11(即保藏证明上所体现的“人直肠癌细胞HRC-11”)已于2017年8月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为CCTCCNO：C2017147。附图说明图1是根据本专利技术的人直肠癌原代细胞HRC-11培养状态下在倒置显微镜下放大400倍的照片；图2是根据本专利技术的人直肠癌原代细胞HRC-11的HE染色后在倒置显微镜下放大400倍的照片；图3是根据本专利技术的人直肠癌原代细胞HRC-11的STR鉴定结果。具体实施方式下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径可购得。实施例1细胞培养(1)组织前处理：选取0.5-1cm3直肠癌组织(直肠癌组织来源：签署知情同意书的河北医科大学第一医院就诊患者)，无菌生理盐水冲洗30s以上，清洗直肠癌组织表面的粪便成分，迅速置于含有高浓度抗生素(500U/mL青霉素，500μg/mL链霉素，1.25μg/mL两性霉素B，80μg/mL庆大霉素)的无血清RPMI-1640培养基中，浸泡5-10分钟后，更换新鲜含高浓度抗生素的无血清RPMI-1640培养基后再浸泡5-10分钟，浸泡过程中，不时颠倒摇晃，摇晃，6-10次/分钟，以更好地清洁；(2)切块：将癌组织用手术刀切成1-3mm3的组织块；(3)培养：将切好的组织块放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁：初期培养：用2ml含有抗生素(100-200U/mL青霉素，100-200μg/mL链霉素，0.25-0.5μg/mL两性霉素B)以及体积分数为20％胎牛血清的RPMI-1640培养基(完全培养基)培养组织24-72小时；正常培养：初期培养结束后，用5mlRPMI-1640完全培养基培养组织，细胞完全贴壁生长后，继续培养传代至第2-5代时，将组织块去除，仅剩贴壁细胞。本专利技术的RPMI-1640培养基为本领域常见的培养基。实施例2形态学观察通过在倒置显微镜下观察可以发现，实施例1培养出的人直肠癌原代细胞的细胞形态为类上皮样，与大肠上皮细胞FHC(CRL-1831TM,https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1831.aspx#characteristics)形态相似，命名为人直肠癌原代细胞HRC-11，并已于2017年8月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C2017147，具体形状详见附图1；将人直肠癌原代细胞HRC-11进行HE染色后发现，其具有恶性肿瘤细胞的形态特征，细胞排列紊乱，失去正常的排列结构，细胞形状大小不一，详见附图2；将人直肠癌原代细胞HRC-11通过中国典型培养物保藏中心进行STR鉴定，结果证实其为单一人类来源，且无交叉污染的细胞，具体结果详见附图3。实施例3生物学鉴定将上述实施例培养出的人直肠癌原代细胞HRC-11通过癌胚抗原检测试剂盒-酶联免疫法(上海晶都生物技术有限公司)进行三次检测，检测出的癌胚抗原的产量分别为1.3ng/106细胞/10天，1.5ng/106细胞/10天和1.7ng/106细胞/10天。将上述实施例培养出的人直肠癌原代细胞HRC-11通过CA199检测试剂盒-酶联免疫法(生工生物工程(上海)股份有限公司)进行三次检测，检测出的肿瘤相关抗原CA199的表达量分别为5U/106细胞/10天，8.5U/106细胞/10天和9U/106细胞/10天。上述实施例培养出的人直肠癌原代细胞HRC-11的倍增时间为32小时。前述对本专利技术的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本专利技术限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本专利技术的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人直肠癌原代细胞，其特征在于，所述人直肠癌原代细胞为人直肠癌原代细胞HRC‑11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017147。

【技术特征摘要】
1.一种人直肠癌原代细胞，其特征在于，所述人直肠癌原代细胞为人直肠癌原代细胞HRC-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C2017147。2.根据权利要求1所述的人直肠癌原代细胞，其特征在于，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的癌胚抗原的产量是0.1-1.7ng/106细胞/10天。3.根据权利要求2所述的人直肠癌原代细胞，其特征在于，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的癌胚抗原的产量是1.3-1.7ng/106细胞/10天。4.根据权利要求1所述的人直肠癌原代细胞，其特征在于，所述人直肠癌原代细胞HRC-11的肿瘤相关...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜霞，赵增仁，张立科，翟从劼，于卫芳，徐菲，韩艳丛，韩雅茹，
申请(专利权)人：河北医科大学第一医院，
类型：发明
国别省市：河北,13