金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中应用。本发明专利技术提供的一种金钗石斛生物总碱的新用途，即将金钗石斛生物总碱应用于制备治疗帕金森病药物中。金钗石斛生物总碱对于6‑羟基多巴胺诱导的多巴胺能神经元损伤具有显著的保护作用。本发明专利技术中针对帕金森病的发病机理，通过研究金钗石斛生物总碱对于多巴胺能神经元的保护作用，为金钗石斛生物总碱用于预防或治疗帕金森病药物的研究和开发提供了可靠的药理学基础。金钗石斛生物总碱能显著降低神经元‑胶质共培养细胞中的神经元数量及酪氨酸羟化酶的表达，对6‑羟基多巴胺对多巴胺能神经元的损伤起到保护作用作用。

Application of total alkaloids from Dendrobium nobile Lindl in preparation of drugs for preventing or treating Parkinson's disease

The invention discloses the application of Dendrobium nobile total alkaloids in the preparation of medicine for preventing or treating Parkinson's disease. The invention provides a new application of Dendrobium nobile total alkaloids, and applies the total alkaloids of Dendrobium nobile to prepare medicine for treating Parkinson's disease. The total alkaloids of Dendrobium nobile have significant protective effects on dopaminergic neurons induced by 6 hydroxydopamine. In view of the pathogenesis of Parkinson's disease, this study provides a reliable pharmacological basis for the study and development of the general alkaloid of Dendrobium nobile used for the prevention or treatment of Parkinson's disease by studying the protective effect of the total alkaloid of Dendrobium nobile on dopaminergic neurons. The total alkaloids of Dendrobium nobile can significantly reduce the number of neurons and the expression of tyrosine hydroxylase in the glial co cultured cells, and protect the damage of dopaminergic neurons by 6 hydroxyl dopamine.

【技术实现步骤摘要】
金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中的应用
本专利技术涉及一种金钗石斛生物总碱的新用途，具体是在制备预防或治疗帕金森病药物中的应用，属于医药

技术介绍
帕金森病(Parkinson’sDisease,PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，又名为震颤麻痹，多见于中老年人，其主要病理特征为中脑黑质致密部多巴胺能神经元变性死亡以及胞质内路易小体的形成，可导致纹状体多巴胺含量下降，出现典型的临床症状(如静止性震颤、肌僵直、运动迟缓和姿势平衡障碍)。目前PD的病因和发病机制尚未阐明，研究认为，年龄老化、遗传因素及环境毒素等共同作用是导致黑质多巴胺能神经元死亡的因素。目前治疗PD的药物主要分为抗胆碱能药和与脑内多巴胺作用有关的药物两大类，这些药物均只能补充脑内的多巴胺含量，并不能治疗多巴胺能神经元(DA能神经元)坏死，并且还会存在一系列的并发症。目前我国的PD患者目前至少有200万，患者的生存质量明显下降，活动受限，给社会和家庭带来了沉重的负担。我国中草药具有资源丰富，不良反应少等优点，并且具有多环节、多层次、多靶点综合作用的特点，在治疗神经疾病方面具备独特的优势。因此从传统的中草药中寻找高效、低毒治疗帕金森病的新型药物已成为研究的热点。金钗石斛(DeudrobiumnobileLindl)为兰科石斛属植物，是一味我国多部医书上均有记载的名贵中药材，享有“仙草”的美誉。其化学成分主要有生物碱类、酚类、多糖、菲类等，生物碱和多糖是主要的药理活性成分。现代药理研究表明，石斛具有降脂，降低血压，调节免疫等作用。现有技术中，尚未见到关于金钗石斛生物总碱用于制备治疗帕金森病药物的相关报道。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种金钗石斛生物总碱在制备药物中的应用，具体是将金钗石斛生物总碱应用于制备预防或治疗帕金森病药物中。为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中应用。前述金钗石斛生物总碱的应用中，金钗石斛生物总碱中亲脂性总生物碱的含量≥80wt％。前述金钗石斛生物总碱的应用，具体应用方法之一为：取金钗石斛生物总碱，用无水乙醇溶解，过滤，除菌，使用时加入生理盐水稀释至使用浓度，即得。前述金钗石斛生物总碱的应用中，使用浓度为每毫升生理盐水中含有0.25ng～25ng金钗石斛生物总碱。前述金钗石斛生物总碱的应用中，具体应用方法之二是指药物是以金钗石斛生物总碱作为活性成分，加入辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸剂、糖浆剂、舌下含片或注射剂。前述金钗石斛生物总碱的应用中，片剂通过以下步骤制备：采用湿法制粒压片，按照重量份数计，将金钗石斛生物总碱干燥粉1份与淀粉3份混匀，加入质量分数为10％的淀粉浆制软材，淀粉浆中含有质量分数为1％的枸橼酸，使之轻握成团、轻压即散，过16目筛制粒，将湿粒于40℃～60℃干燥，用16目筛整粒，并加入质量为制得颗粒质量5％的滑石粉混匀后，直接压片即得。前述金钗石斛生物总碱的应用中，胶囊剂通过以下步骤制备：将金钗石斛生物总碱干燥粉末和质量为干粉质量5倍的可溶性淀粉混匀，过100目筛后，手工填充至5号胶囊内即得。前述金钗石斛生物总碱的应用中，颗粒剂通过以下步骤制备：按照重量份数计，取金钗石斛生物总碱干燥粉1份、蔗糖粉3份和糊精1.25份混匀，加入60％乙醇制软材，使之轻握成团、轻压即散，过16目筛制粒，60℃-80℃干燥，用16目筛整粒，密封即得。前述金钗石斛生物总碱的应用中，金钗石斛生物总碱通过以下方式提取：取金钗石斛茎粗粉，加质量为粗粉质量10～12倍量的90％乙醇浸泡12～16小时，煮沸提取2～4次，每次2～3小时，过滤，将滤液合并浓缩成浸膏，合并的滤液体积是浸膏体积的120倍；随后用pH为3.5的盐酸水溶液溶解，过滤，滤液过阳离子交换树脂，用去离子水洗脱杂质，再用酸性乙醇洗脱，洗脱液浓缩至无醇味，加碱中和，经脱盐处理，冷冻干燥，即得。为了确保本专利技术技术方案的科学、合理、有效，专利技术人进行了一系列实验。一、实验材料1、实验动物胎龄14-15天的SD胎鼠雌雄兼用，清洁级(SPF级)包装，购自于第三军医大学大坪医院实验动物中心(许可证：SCXK(渝)2012-0005)。饲养于SPF标准动物房，光照12h，动物自由进食进水。2、主要试剂及药品金钗石斛生物总碱(DNLA)由遵义医学院自行提取，临用时以无水乙醇溶解，过滤，除菌，用生理盐水稀释所需浓度。6-羟基多巴胺(6-OHDA，Sigma公司)，胎牛血清(FBS)(美国Gibco公司)，DMEM/F12培养基(美国Gibco公司)，酪氨酸羟化酶(TH)兔抗多克隆抗体(英国Abcam公司)，鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒(基因科技(上海)有限公司)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(江苏碧云天生物技术研究所)，β-actin小鼠抗大鼠多克隆抗体(江苏碧云天生物技术研究所)，彩色预染蛋白质Marker(江苏碧云天生物技术研究所)，TritonX-100(上海生工生物工程公司)。金钗石斛生物总碱(DNLA)可以通过以下方式提取：取金钗石斛茎粗粉，加质量为粗粉质量10～12倍量的90％乙醇浸泡12～16小时，煮沸提取2～4次，每次2～3小时，过滤，将滤液合并浓缩成浸膏，合并的滤液体积是浸膏体积的120倍；随后用pH为3.5的盐酸水溶液溶解，过滤，滤液过阳离子交换树脂，用去离子水洗脱杂质，再用酸性乙醇洗脱，洗脱液浓缩至无醇味，加碱中和，经脱盐处理，冷冻干燥，即得。3、主要仪器荧光倒置显微镜(日本NIKON公司)，CO2孵箱(美国Thermo公司)，全自动凝胶图象分析仪(美国BIO-RAD公司)，凝胶垂直电泳槽(美国InvitrogenTM|LifeTechnologies公司)，OLYMPUS光学显微镜(日本OLYMPUS公司)。二、实验方法1、金钗石斛生物总碱对中脑神经元-胶质共培养中神经元损伤的保护作用实验1.1、前期培养取胎龄为14-15天的SD胎鼠，直接断头处死，无菌操作条件下，打开腹腔，取出胚胎，放置于装有细胞培养液的平皿中，在显微镜下分离出中脑，眼科镊剥除掉脑膜，用电动移液器缓慢吹打混匀制备细胞悬浮液，细胞无菌过滤器对细胞进行过滤，以1500rpm/min的转速离心5min。弃掉上培养基，在沉淀的细胞中加入适量的培养液，混匀，计数仪进行计数后，计算稀释比例列，以5×105个/孔的密度，接种于培养板中，放入37℃恒温CO2培养箱中培养，每两天换液一次。1.2、分组及给药神经元长好后，将细胞进行随机分组，分为空白组、DNLA(2.5ng/mL)组、6-OHDA(40μmol)组、综合组(给与2.5ng/mLDNLA30min后再加入40μmol的6-OHDA)。分别给药。1.3、观察指标及操作方法1.3.1免疫细胞化学法检测细胞中TH阳性DA能神经元的形态、数量1)取出细胞，小心地吸出培养基，PBS洗涤3次；2)用4％的多聚甲醛常温固定细胞30min，弃掉4％的多聚甲醛，PBS洗涤3次；3)0.1％Triton-100在37℃孵箱里温育30min，PBS洗涤3次；4)山羊血清封闭37℃温育30min；5)不用洗涤，弃去山羊血清，加入1:300的TH抗体，4℃过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中应用。

【技术特征摘要】
1.金钗石斛生物总碱在制备预防或治疗帕金森病药物中应用。2.根据权利要求1所述的金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于：所述金钗石斛生物总碱中亲脂性总生物碱的含量≥80wt％。3.根据权利要求1所述的金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于：具体应用方法为：取金钗石斛生物总碱，用无水乙醇溶解，过滤，除菌，使用时加入生理盐水稀释至使用浓度，即得。4.根据权利要求3所述的金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于：所述使用浓度为每毫升生理盐水中含有0.25ng～25ng金钗石斛生物总碱。5.根据权利要求1所述的金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于：所述药物是以金钗石斛生物总碱作为活性成分，加入辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸剂、糖浆剂、舌下含片或注射剂。6.根据权利要求5所述的金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于：所述片剂通过以下步骤制备：采用湿法制粒压片，按照重量份数计，将金钗石斛生物总碱干燥粉1份与淀粉3份混匀，加入质量分数为10％的淀粉浆制软材，淀粉浆中含有质量分数为1％的枸橼酸，使之轻握成团、轻压即散，过16目筛制粒，将湿粒于40℃～60℃干燥，用16目筛整粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锋，李戴弟，王国庆，石京山，周延庆，黄纯，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52