用于实体瘤靶向的双特异性CAR T细胞制造技术

本文公开了双特异性T细胞的工程化方法，所述双特异性T细胞表达用于促进效应细胞的体内扩增和活化的嵌合抗原受体以及对肿瘤上的配体具有特异性的第二嵌合抗原受体或TcR。还提供了向有需要的受试者给予携带双特异性嵌合抗原受体的细胞的方法。 1

Dual specific CAR T cells for solid tumor targeting

In this paper, the engineering method of dual specific T cells is disclosed. The dual specific T cells express the chimeric antigen receptor for promoting the in vivo amplification and activation of the effector cells and the specific second chimeric antigen receptor or TcR on the ligands on the tumor. A method for providing cells with dual specific chimeric antigen receptors to the subjects in need is also provided. One

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于实体瘤靶向的双特异性CART细胞以引用的方式将任意优先权申请并入本申请要求2015年8月7日提交的美国临时专利申请No.62/202,698的优先权，以引用的方式将其全部公开内容整体并入本文。序列表、表格或计算机程序列表的引用本申请与电子格式的序列表一起提交。该序列表作为题为SCRI.95WO.TXT的文件而提供，创建于2016年7月26日，大小为45kb。以引用的方式将序列表的电子格式中的信息整体并入本文。
本文所述的本专利技术的方面包括用于提高携带过继性转移的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞针对实体瘤的治疗效力的方法、细胞和组合物。具体而言，本文提供了针对在各个T细胞中各自共表达两种CAR的CAR-T细胞产物的方法、细胞和组合物，例如用于促进效应细胞的体内扩增和活化的B细胞靶向“驱动(driver)”CAR，以及对靶向实体瘤而言具有期望特异性的CAR或T细胞受体(TcR)(随从(passenger)CAR/TcR)。
技术介绍
多种细胞疗法已被纳入用于癌症治疗的标准方法中。细胞疗法对患有癌症或疾病的患者而言是将细胞物质(如活细胞)注射至有需要的患者体内。这可包括输注多克隆或抗原特异性T细胞、淋巴因子活化杀伤细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞以及巨噬细胞。在用于癌症治疗的过继性T细胞疗法的携带嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的开发方面已取得了进展，这对癌症免疫疗法和病毒疗法而言是有前景的治疗途径。CART细胞疗法是一种免疫疗法，其中将患者自身的T细胞在实验室中分离，进行基因操作来表达合成受体以识别特定抗原或蛋白质，并回输至患者体内。CAR可由几个结构域组成。不受限制地，CAR可具有：(1)通常源于抗体的抗原结合区；(2)将CAR锚定到T细胞内的跨膜结构域；和/或(3)1个或多个细胞内T细胞信号传导结构域。第一代CAR通常包含源自单克隆抗体(mAb)的单链可变片段(scFv)加上来自TCRζ链的信号基序。具有共刺激活化基序的第二代CAR和第三代CAR是对第一代CAR的改善，可导致携带CAR的细胞的增殖、细胞毒性和持久性(persistence)在体内增强。临床试验以不充足的活化、持久性和向癌症组织归巢显示了抗肿瘤活性的一些迹象。例如，在B细胞淋巴瘤患者中已报道了一些抗肿瘤应答，而且在一些神经母细胞瘤(neuroblastoma)患者中已报道了部分应答、疾病稳定和缓解。第二代和第三代CAR修饰的T细胞已被证明能够在临床前试验中提供CAR修饰的T细胞的增强的活化信号、增殖、细胞因子的产生以及效应功能。证明了初始临床试验表现出了一些有前景的结果。不幸的是，免疫治疗领域无法充分解决与携带CAR的T细胞相关的问题。这些问题可包括输注细胞后发生的未达最佳标准的细胞扩增和活化以及毒性作用。随着CART细胞的给予可发生几种类型的毒性。输注携带CAR的T细胞后的不良反应可包括B细胞发育不良、细胞因子释放综合征(CRS)和肿瘤溶解综合征。B细胞发育不良可由于有效靶向B细胞上的抗原而发生。然而，B细胞不是维持生命型的组织，可作为CART细胞的起始靶标。在机体内扩增CART细胞可与CRS相关联。CRS的症状可包括发热、低血压、缺氧和神经病学变化(neurologicchanges)。神经病学变化可包括癫痫、失语症和精神状态变化。可发生其它临床和生化变化，例如与铁蛋白和C反应蛋白显著升高相关联的转氨酶升高(transaminitis)和/或弥散性血管内凝血，这些被发现与巨噬细胞活化综合征或噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)相似。不良作用还可包括显示植入(engraftment)失败，这可能是由于输注的T细胞向肿瘤转移部位的有限迁移和有限的实体瘤免疫刺激活性及其免疫抑制环境。由于CAR的开发仍处于初级阶段，为了规避治疗期间出现的不良作用，CART细胞疗法领域的进步仍是十分需要的。
技术实现思路
在第一方面，提供了编码嵌合抗原受体的核酸。所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第二核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性，并且其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5′末端；包含编码去免疫(de-immunized)细胞外间隔区(spacer)的序列的第三核酸，其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3＇末端；包含编码跨膜结构域的序列的第四核酸，其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3′末端；包含编码信号传导结构域的序列的第五核酸，其中所述信号传导结构域包含4-1BB结构域和/或CD3-ζ结构域，并且其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3′末端；包含编码接头的序列的第六核酸，其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3′末端；以及包含编码标记结构域的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3′末端，从而得到所述编码嵌合抗原受体的核酸。在一些可选方式中，所述接头为核糖体跳跃序列(ribosomeskipsequence)或IRES序列。在一些可选方式中，所述核糖体跳跃序列为P2A序列、T2A序列、E2A序列或F2A序列。在一些可选方式中，所述核糖体跳跃序列是T2A。在一些可选方式中，所述T2A序列包含SEQIDNO：33中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：34中所示的核酸序列进行编码。在一些可选方式中，所述接头进一步在该接头的5′末端包含IRES序列。在一些可选方式中，所述编码跨膜结构域的序列进一步在该编码跨膜结构域的序列的3′末端包含IRES序列。在一些可选方式中，所述B细胞特异性细胞表面分子为CD1d、CD5、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23/FcεRII、CD24、CD25/IL-2RαCD27/TNFRSF7、CD32、CD34、CD35、CD38、CD40(TNFRSF5)、CD44、CD45、CD45.1、CD45.2、CD54(ICAM-1)、CD69、CD72、CD79、CD80、CD84/SLAMF5、LFA-1、CALLA、BCMA、B细胞受体(BCR)、IgM、IgD、B220/CD45R、ClqR1/CD93、CD84/SLAMF5、BAFFR/TNFRSF13C、B220/CD45R、B7-1/CD80、B7-2/CD86、TNFSF7、TNFRSF5、ENPP-1、HVEM/TNFRSF14、BLIMP1/PRDM1、CXCR4、DEP-1/CD148或EMMPRIN/CD147。在一些可选方式中，所述核酸进一步包含编码自杀基因系统的多核苷酸。在一些可选方式中，所述自杀基因系统为单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVTK)/更昔洛韦(Ganciclovir，GCV)自杀基因系统或可诱导的半胱天冬酶(Caspase)自杀基因系统。在一些可选方式中，药物为类固醇(例如雌激素受体的配体)。在一些可选方式中，类固醇为他莫昔芬(tamoxifen)和/或其代谢物。在一些可选方式中，所述间隔区是IgG4铰链间隔区。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQIDNO：1中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：2中所示的核酸序列进行编码。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQIDNO：3中所示的氨基酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.07 US 62/202,6981.编码嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第二核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性，并且其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第三核酸，其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第四核酸，其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域的序列的第五核酸，其中所述信号传导结构域包含4-1BB结构域和/或CD3-ζ结构域，并且其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第六核酸，其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端，从而得到所述编码嵌合抗原受体的核酸。2.编码嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码可由药物诱导的第一启动子的序列的第二核酸，其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第三核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性，并且其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第四核酸，其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第五核酸，其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域的序列的第六核酸，其中所述信号传导结构域包含4-1BB结构域和/或CD3-ζ结构域，并且其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第八核酸，其中所述第八核酸共价连接至所述第七核酸的3'末端，从而得到所述编码嵌合抗原受体的核酸。3.编码嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第二核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第三核酸，其中所述第三核酸序列共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第四核酸，其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域序列的序列的第五核酸，其中所述信号传导结构域包含4-1BB结构域、CD3-ζ结构域和/或CD28-ζ结构域，并且其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第六核酸，其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端，从而得到所述编码嵌合抗原受体的核酸。4.编码嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码可由药物诱导的第一启动子的序列的第二核酸，其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第三核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第四核酸，其中所述第四核酸序列共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第五核酸，其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域序列的序列的第六核酸，其中所述信号传导结构域包含4-1BB结构域、CD3-ζ结构域和/或CD28-ζ结构域，并且其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第八核酸，其中所述第八核酸共价连接至所述第七核酸的3'末端，从而得到所述编码嵌合抗原受体的核酸。5.编码双特异性嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸序列；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第二核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性或者对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第三核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性或者对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第四核酸，其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第五核酸，其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域序列的序列的第六核酸，其中所述信号传导结构域包含共刺激结构域，其中所述共刺激结构域包含4-1BB结构域、CD3-ζ结构域和/或CD28-ζ结构域，并且其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第七核酸，其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第八核酸，其中所述第八核酸共价连接至所述第七核酸的3'末端，从而得到所述编码双特异性嵌合抗原受体的核酸。6.编码双特异性嵌合抗原受体的核酸，所述核酸包含：包含编码前导序列的序列的第一核酸；包含编码可由药物诱导的第一启动子的序列的第二核酸，其中所述第一核酸共价连接至所述第二核酸的5'末端；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第三核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性或者对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第三核酸共价连接至所述第二核酸的3'末端；包含编码抗体或其结合片段或scFv的序列的第四核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性或者对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，并且其中所述第四核酸共价连接至所述第三核酸的3'末端；包含编码去免疫细胞外间隔区的序列的第五核酸，其中所述第五核酸共价连接至所述第四核酸的3'末端；包含编码跨膜结构域的序列的第六核酸，其中所述第六核酸共价连接至所述第五核酸的3'末端；包含编码信号传导结构域序列的序列的第七核酸，其中所述信号传导结构域包含共刺激结构域，其中所述共刺激结构域包含4-1BB结构域、CD3-ζ结构域和/或CD28-ζ结构域，并且其中所述第七核酸共价连接至所述第六核酸的3'末端；包含编码接头的序列的第八核酸，其中所述第八核酸共价连接至所述第七核酸的3'末端；以及包含编码标记结构域的序列的第九核酸，其中所述第九核酸共价连接至所述第八核酸的3'末端，从而得到所述编码双特异性嵌合抗原受体的核酸。7.如权利要求1-6中任一项所述的核酸，其中所述接头为核糖体跳跃序列或IRES序列。8.如权利要求7所述的核酸，其中所述核糖体跳跃序列为P2A序列、T2A序列、E2A序列或F2A序列。9.如权利要求8所述的核酸，其中所述核糖体跳跃序列为T2A。10.如权利要求9所述的核酸，其中所述T2A序列包含SEQIDNO：33中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：34中所示的核酸序列进行编码。11.如权利要求1-10中任一项所述的核酸，其中所述接头进一步在该接头的5'末端包含IRES序列。12.如权利要求2、4或6-11中任一项所述的核酸，其中所述第一启动子是可由他莫昔芬和/或其代谢物诱导的。13.如权利要求2、4或6-12中任一项所述的核酸，其中所述第一启动子是可由药物诱导的。14.如权利要求1-13中任一项所述的核酸，其中所述编码跨膜结构域的序列进一步在该编码跨膜结构域的序列的3'末端包含IRES序列。15.如权利要求1、2或5-14中任一项所述的核酸，其中所述B细胞特异性细胞表面分子为：CD1d、CD5、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23/FcεRII、CD24、CD25/IL-2RαCD27/TNFRSF7、CD32、CD34、CD35、CD38、CD40(TNFRSF5)、CD44、CD45、CD45.1、CD45.2、CD54(ICAM-1)、CD69、CD72、CD79、CD80、CD84/SLAMF5、LFA-1、CALLA、BCMA、B细胞受体(BCR)、IgM、IgD、B220/CD45R、ClqR1/CD93、CD84/SLAMF5、BAFFR/TNFRSF13C、B220/CD45R、B7-1/CD80、B7-2/CD86、TNFSF7、TNFRSF5、ENPP-1、HVEM/TNFRSF14、BLIMP1/PRDM1、CXCR4、DEP-1/CD148或EMMPRIN/CD147。16.如权利要求1-15中任一项所述的核酸，其中所述核酸进一步包含编码自杀基因系统的多核苷酸。17.如权利要求16所述的核酸，其中所述自杀基因系统为单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVTK)/更昔洛韦(GCV)自杀基因系统或可诱导的半胱天冬酶自杀基因系统。18.如权利要求13-17中任一项所述的核酸，其中所述药物为类固醇，例如雌激素受体的配体。19.如权利要求18所述的核酸，其中所述类固醇为他莫昔芬和/或其代谢物。20.如权利要求3-19中任一项所述的核酸，其中所述细胞表面肿瘤特异性分子为癌抗原。21.如权利要求20所述的核酸，其中所述细胞表面肿瘤特异性分子为：EGFR、HER2、间皮素、癌睾丸抗原、L1CAM、O-乙酰化GD2、GD2、新抗原、Var2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、HPV抗原、甲胎蛋白、癌胚抗原、CA-125、MUC-1、上皮肿瘤抗原、p53或ras的异常产物、EphA2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-C2、PRAME、SSX2、脂肪分化相关蛋白、AIM2、ALDH1A1、BCLX、EpCAM、CS274、CPSF、细胞周期蛋白D1、DKK1、ENAH、EpCAM、EphA3、EZH2、FGF5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、G250、HLA-DOB、Hepsin、ID01、IGF2B3、IL13Rα2、肠羧酸酯酶、α-胎儿蛋白、激肽释放酶4、KIF20A、Lengsin、M-CSF、MCSP、mdm-2、Meloe、中期因子、MMP-2、MMP-7、MUC1、MUC5AC、p53、PAX5、PBF、PRAME、PSMA、RAGE-1、RGS5、RhoC、RNF43、RUF43、FU2AS、secernin1、SOX10、STEAP1、存活素、端粒酶、TPBG、VEGF、WT1、NY-ESO-1或ROR1。22.如权利要求20或21所述的核酸，其中所述癌抗原为L1CAM。23.如权利要求20或21所述的核酸，其中所述癌抗原为ROR1。24.如权利要求1-23中任一项所述的核酸，其中所述间隔区为IgG4铰链间隔区。25.如权利要求24所述的核酸，其中所述间隔区包含SEQIDNO：1中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：2中所示的核酸序列进行编码。26.如权利要求1-23中任一项所述的核酸，其中所述间隔区包含SEQIDNO：3中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：4中所示的核酸序列进行编码。27.如权利要求1-23中任一项所述的核酸，其中所述间隔区包含SEQIDNO：39中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：40中所示的核酸序列进行编码。28.如权利要求1-27中任一项所述的核酸，其中所述CD28-ζ结构域包含SEQIDNO：5中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：6中所示的核酸序列进行编码。29.如权利要求1-28中任一项所述的核酸，其中所述4-1BB结构域包含SEQIDNO：7中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：8中所示的核酸序列进行编码。30.如权利要求1-29中任一项所述的核酸，其中所述CD3-ζ结构域包含SEQIDNO：9中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：10中所示的核酸序列进行编码。31.如权利要求1、2或5-30中任一项所述的核酸，其中，对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对CD19具有特异性。32.如权利要求31所述的核酸，其中，对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：11中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：12中所示的核酸序列进行编码。33.如权利要求1、2或5-30中任一项所述的核酸，其中，对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对CD20具有特异性。34.如权利要求33所述的核酸，其中，对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：13中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：14中所示的核酸序列进行编码。35.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对L1CAM具有特异性。36.如权利要求35所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对L1CAM上的CE7表位具有特异性。37.如权利要求36所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：15中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：16中所示的核酸序列进行编码。38.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对ROR1具有特异性。39.如权利要求38所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：17中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：18中所示的核酸序列进行编码。40.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对EGFR806具有特异性。41.如权利要求40所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：19中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：20中所示的核酸序列进行编码。42.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对Her2具有特异性。43.如权利要求42所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：21中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：22中所示的核酸序列进行编码。44.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对GD2具有特异性。45.如权利要求44所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：23中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：24中所示的核酸序列进行编码。46.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对EphA2(2H4)具有特异性。47.如权利要求46所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：25中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：26中所示的核酸序列进行编码。48.如权利要求3-34中任一项所述的核酸，其中，对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的所述抗体或其结合片段或scFv对EphA2(4H5)具有特异性。49.如权利要求48所述的核酸，其中所述抗体或其结合片段或scFv包含SEQIDNO：27中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：28中所示的核酸序列进行编码。50.如权利要求1-49中任一项所述的核酸，其中所述前导序列包含粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子信号序列。51.如权利要求50所述的核酸，其中所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子信号序列包含SEQIDNO：29中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：30中所示的核酸序列进行编码。52.如权利要求1-49中任一项所述的核酸，其中所述前导序列包含SEQIDNO：31中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：32中所示的核酸序列进行编码。53.如权利要求1-52中任一项所述的核酸，其中所述标记结构域包含Her2tG。54.如权利要求53所述的核酸，其中，Her2tG包含SEQIDNO：35中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：36中所示的核酸序列进行编码。55.如权利要求1-52中任一项所述的核酸，其中所述标记结构域包含EGFRt。56.如权利要求55所述的核酸，其中，EGFRt包含SEQIDNO：37中所示的氨基酸序列并且由SEQIDNO：38中所示的核酸序列进行编码。57.用于表达对促进B细胞的体内扩增和活化具有特异性的嵌合抗原受体的载体，其中所述载体包含如权利要求1-2、7-19、24-34或50-56中任一项所述的核酸。58.用于表达对靶向实体瘤具有特异性的嵌合抗原受体或TcR的载体，其中所述载体包含如权利要求3-4、7-14、16-30或35-56中任一项所述的核酸。59.用于表达双特异性嵌合抗原受体的载体，其中所述双特异性嵌合抗原受体对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性并且对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性，所述载体包含如权利要求5-56中任一项所述的核酸。60.如权利要求57-59中任一项所述的载体，其中所述载体为病毒载体。61.如权利要求60所述的载体，其中所述载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体、γ逆转录病毒载体或泡沫病毒载体。62.如权利要求57-59中任一项所述的载体，其中所述载体为转座子、整合酶载体系统或mRNA载体。63.由如权利要求1-2或7-56中任一项所述的核酸或者如权利要求57或60-62中任一项所述的载体编码的对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性的嵌合抗原受体或TcR。64.由如权利要求3-4或7-56中任一项所述的核酸或者如权利要求58或60-62中任一项所述的载体编码的对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的嵌合抗原受体或TcR。65.由如权利要求5-56中任一项所述的核酸或者如权利要求59-62中任一项所述的载体编码的对B细胞特异性细胞表面分子具有特异性并且对细胞表面肿瘤特异性分子具有特异性的双特异性嵌合抗原受体。66.包含第一嵌合抗原受体和第二嵌合抗原受体或TcR的细胞，其中所述第一嵌合抗原受体对B细胞上的配体具有特异性，其促进效应细胞的体内扩增和活化；并且其中所述第二嵌合抗原受体或TcR对肿瘤上的配体具有特异性。67.如权利要求66所述的细胞，其中所述B细胞上的配体为：CD1d、CD5、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23/FcεRII、CD24、CD25/IL-2RαCD27/TNFRSF7、CD32、CD34、CD35、CD38、CD40(TNFRSF5)、CD44、CD45、CD45.1、CD45.2、CD54(ICAM-1)、CD69、CD72、CD79、CD80、CD84/SLAMF5、LFA-1、CALLA、BCMA、B细胞受体(BCR)、IgM、IgD、B220/CD45R、ClqR1/CD93、CD84/SLAMF5、BAFFR/TNFRSF13C、B220/CD45R、B7-1/CD80、B7-2/CD86、TNFSF7、TNFRSF5、ENPP-1、HVEM/TNFRSF14、BLIMP1/PRDM1、CXCR4、DEP-1/CD148或EMMPRIN/CD147。68.如权利要求65或67所述的细胞，其中所述肿瘤上的配体为癌抗原。69.如权利要求66-68中任一项所述的细胞，其中所述癌抗原为：EGFR、HER2、间皮素、癌睾丸抗原、L1CAM、O-乙酰化GD2、GD2、新抗原、Var2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、HPV抗原、甲胎蛋白、癌胚抗原、CA-125、MUC-1、上皮肿瘤抗原、p53或ras的异常产物、EphA2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-C2、PRAME、SSX2、脂肪分化相关蛋白、AIM2、ALDH1A1、BCLX、EpCAM、CS274、CPSF、细胞周期蛋白D1、DKK1、ENAH、EpCAM、EphA3、EZH2、FGF5、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、G250、HLA-DOB、Hepsin、ID01、IGF2B3、I...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·C·延森，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院DBA西雅图儿童研究所，
类型：发明
国别省市：美国,US