蒙药小秦艽花指纹图谱建立方法以及质量评价方法技术

本发明专利技术涉及一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括：1)供试品溶液的制备：取药材粉末0.4g，置150mL具塞锥形瓶中，加40％甲醇25mL，称重，超声提取，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔、滤膜滤过；2)色谱条件：色谱柱：Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD；流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸水溶液(含0.05％四氢呋喃)(B)，采用梯度洗脱95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速：1.0mL/min；检测条件：DAD检测器，检测波长：245nm；柱温：25℃；进样量：20μL。本发明专利技术利用HPLC建立蒙药小秦艽花指纹图谱，提供一种较全面评价蒙药小秦艽花药材质量的方法。 1

【技术实现步骤摘要】
蒙药小秦艽花指纹图谱建立方法以及质量评价方法
本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及药材指纹图谱建立方法和药材质量评价方法。
技术介绍
近年来，国内外对民族药的重视程度与日俱增，迫切需要对药物的质量标准进行控制，以确保研究用药更加稳定可靠。由于对蒙药的了解不足(基源、采收加工、用药部位等)，导致市场上品种混乱，所以建立全面有效地质量控制方法势在必行，保证用对药，用好药。小秦艽花为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)秦艽组达乌里秦艽(GentianadahuricaFisch.)的干燥花，广泛分布于陕西、甘肃、宁夏、内蒙古、新疆、山西、河北等地，多生长于田边、路旁、河滩、水沟边、向阳山坡等地。小秦艽花入蒙药，蒙药名为呼和-朱力根-其木格，具有清热、解毒、止咳、祛痰的功效，主治肺热咳嗽，咽喉热，咽喉肿痛，毒热，瘟热等症。小秦艽花为蒙医临床常用药，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)，且质量标准项下仅限于显微鉴别和化学鉴别方法，相关文献报道的含量测定也仅有龙胆苦苷等环烯醚萜类成分，并不能保证用药的安全性和有效性。指纹图谱技术作为天然药物提取物及其制剂的质量控制方法已达成国际共识，是一种综合的鉴定手段，专属性强，稳定性、重复性好，能较全面的评价药材的真实性、优良性。因此，本专利技术利用高效液相色谱法构建了蒙药小秦艽花的指纹图谱，并对不同产地的多批次小秦艽花进行分析确定了该药材的标准指纹图谱，建立一种稳定可靠的蒙药小秦艽花质量控制方法。
技术实现思路
本专利技术提出一种小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：取药材粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相选自甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水、乙腈-甲酸四氢呋喃水溶液中的一种，其中最优选乙腈(A)-0.1％甲酸和0.05％四氢呋喃的水溶液(B)；洗脱梯度：95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；进样量：10～20μL。作为优选，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的ThermoSCIENTIFICHypersilGOLD、HypersilODS2、KromasilTMC18和AgilentEclipsePlusC18色谱柱。进一步的优选是，步骤1)中，取药材粉末约0.4g，精密称定，加入40％甲醇25mL，超声提取30min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。更优选地，流速为1.0mL/min；采用DAD检测器，检测波长245nm；柱温25℃；进样量20μL。本专利技术还提供一种利用指纹图谱评价小秦艽花药材质量的方法，包括以下内容：建立指纹图谱，包括：a)供试品溶液的制备：分别制备10个不同批次的小秦艽花样品供试品溶液，取药材粉末(4号筛)0.1～0.4g，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)5-羟基-2-吡啶羧酸、2)5-羟基糠醛、3)2-糠酸、4)马钱素、5)间羟基苯甲酸、6)龙胆苦苷、7)木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷、8)獐牙菜苷、9)芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷、10)木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷、11)芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷共11种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的单一对照溶液，微孔滤膜0.45μm滤过，备用；c)先后将各供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；色谱条件：流动相：甲醇-水，乙腈-水，乙腈-磷酸水，乙腈-甲酸水，乙腈-甲酸水(含四氢呋喃)，采用梯度洗脱95％B(0min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；流速：0.8～1.2mL/min；进样量：10～20μL；d)利用10批次样品建立指纹图谱，并用相似度评价软件计算其相似度。进一步地，所述指纹图谱包含以下19个共有峰，各峰的保留时间分别为：4.00，8.20，10.46，11.76，12.00，12.69，14.79，18.52，19.93，22.04，22.62，23.40，23.89，25.64，30.61，32.40，41.32，54.25，58.33。更进一步地，其中，所述19个共有峰的相对峰面积分别为2.929，0.177，5.354，0.122，0.189，0.438，1.000，1.791，0.822，0.401，0.578，0.161，0.280，0.534，0.306，0.902，0.692，0.414，0.678。本专利技术首次建立了蒙药小秦艽花HPLC指纹图谱，标识了19个共有峰中的11个峰。此法操作简单，分离度高，重现性好，为全面有效地反映小秦艽花药材的真伪优劣提供一种技术支持，能全面有效的反映小秦艽花药材质量，为小秦艽花药材质量控制提供依据。附图说明图1是根据本专利技术的方法获得的指纹图谱；图2显示11个单一对照品与指纹图谱的对照图谱；图3是10批小秦艽花药材HPLC指纹图谱叠加图。具体实施方式供试品溶液的制备取干燥至恒重的小秦艽花，粉碎并过4号筛，取过筛粉末，精密加入计算量的甲醇溶液，超声处理，放置至室温，溶剂补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。本专利技术中，使用甲醇水溶液作为供试品溶剂，优选甲醇溶液的浓度范围在30～50％之间，最优选为40％的甲醇溶液；提取方法为回流或者超声提取，优选为超声提取，提取时间20～60min，优选提取30min；取样量可以在0.1～0.4g的范围内，最终优选取样0.4g。因此，本专利技术最优选的小秦艽花供试品溶液的制备方法为：取药材粉末约0.4g，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入40％甲醇25mL，超声提取30min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。该制备方法在色谱图的峰数、峰高、峰面积和分离度方面表现最佳。对照品溶液的制备精密称取各对照品，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成一定浓度对照品溶液，进样前用0.45μm微孔滤膜滤过。对照品均为在小秦艽花化学成分研究中得到并鉴定其结构，如下11种：1)5-羟基-2-吡啶羧酸2)5-羟基糠醛3)2-糠酸4)马钱素5)间羟基苯甲酸6)龙胆苦苷7)木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷8)獐牙菜苷9)芹菜素-6-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

【技术特征摘要】
1.一种蒙药小秦艽花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：取药材粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；2)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：选自甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水、乙腈-甲酸四氢呋喃水溶液中的一种，采用梯度洗脱95％B(0min)～65％B(90min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～35℃；流速：0.8～1.2mL/min；进样量：10～20μL。2.权利要求1所述的处理方法，其中，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的ThermoSCIENTIFICHypersilGOLD、HypersilODS2、KromasilTMC18和AgilentEclipsePlusC18色谱柱。3.权利要求1所述的处理方法，其中，步骤1)中，取药材粉末约0.4g，精密称定，精密加入40％甲醇25mL，称重，超声提取30min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。4.权利要求1所述的处理方法，其中，流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸0.05％四氢呋喃水溶液(B)；洗脱梯度：95％B(0min)～95％B(5min)～90％B(10min)～87％B(30min)～80％B(50min)～78％B(60min)～75％B(65min)～65％B(90min)；流速为1.0mL/min；采用DAD检测器，检测波长245nm；柱温25℃；进样量20μL。5.一种利用指纹图谱评价小秦艽花药材质量的方法，包括以下步骤：建立标准指纹图谱，包括：a)供试品溶液的制备：分别制备10个不同批次的小秦艽花样品供试品溶液，取样品粉末，精密称定，置150mL具塞锥形瓶中，精密加入0～100％甲醇25mL，称重，超声提取20～60min，放置到室温后，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)5-羟基-2-吡啶羧酸、2)5-羟基糠醛、3)2-糠酸、4)马钱素、5)间羟基苯甲酸、6)龙胆苦苷、7)木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷、8)獐牙菜苷、9)芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷、10)木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷、11)芹菜素...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓琴，张秀艳，黄慧，李彩峰，
申请(专利权)人：内蒙古医科大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15