具有抗炎作用的5，8-对醌式黄烷类化合物及其提取分离方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有抗炎作用的5，8‑对醌式黄烷类化合物及其提取分离方法和应用，所述化合物化学名称为(2S)‑7‑甲氧基‑3′,4′‑二羟基‑5,8‑对醌黄烷，提取分离方法上，依次通过浸泡、分步萃取、利用硅藻土柱层析、通过硅胶柱色谱分离得到，所述分离方法制备过程简便，成本低廉，适合大规模推广应用。所述化合物在抑制脂多糖刺激炎症细胞中NO产物形成和抑制脂多糖刺激炎症细胞中炎症因子IL‑1β释放方面有很好的应用效果。 1

5, 8- quinone flavanone compounds with anti-inflammatory effects and their extraction and separation methods and Applications

The invention discloses a 5, 8, quinone flavane compound and its extraction and separation method and its application. The chemical name of the compound is (2S) 7 methoxy 3 ', and 4' two hydroxy two hydroxyalkanes, the extraction and separation method, in turn, through soaking, stepwise extraction, and diatomite column chromatography The separation method is simple and cheap, and is suitable for large-scale popularization and application. The compounds have good effects on inhibiting the formation of NO products in inflammatory cells and inhibiting the release of inflammatory factor IL 1 beta release in inflammatory cells by lipopolysaccharide stimulation. One

【技术实现步骤摘要】
具有抗炎作用的5，8-对醌式黄烷类化合物及其提取分离方法和应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种具有抗炎作用的5，8-对醌式黄烷类化合物及其提取分离方法和应用。
技术介绍
华中枸骨I.centrochinensisS.Y.Hu(ICC)，又名针齿冬青、猫耳刺，生于山坡，沟边或林下。具有清热解毒、祛风祛湿作用，在恩施土家族地区常用于治疗类风湿关节炎，为常用土家族药物，具有丰富的民族民间药用经验和基础，资源丰富，具有重要的开发利用价值。如果能提取出华中枸骨中的活性天然产物，将能更好地发挥其药性，启发新的药品研发，充分利用我国丰富的资源。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术对华中枸骨化学成分进行了研究，并从中分离到了一个新的5，8-对醌式黄烷化合物，并说明了5，8-对醌式黄烷类化合物的提取分离方法和应用。所述5，8-对醌式黄烷类化合物结构清晰明确，提取过程简单，抗炎症领域应用效果好。本专利技术的技术方案为：一种5，8-对醌式黄烷类化合物，其特征在于，所述化合物化学名称为(2S)-7-甲氧基-3′,4′-二羟基-5,8-对醌黄烷，所述化合物的结构式如下：一种所述5，8-对醌式黄烷类化合物的提取分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤一，取华中枸骨干燥叶，粉碎后用体积浓度为95％的乙醇在室温下浸泡3次，每次48-72小时，每次过滤得浸泡液，收集合并所述浸泡液，减压回收溶剂至所述浸泡液中乙醇完全挥发，得浸膏；步骤二，将所述浸膏悬浮于水中，先后加入石油醚、乙酸乙酯，正丁醇依次分别萃取，每次萃取分离得到萃取液，将所述萃取液减压回收溶剂，依次得到石油醚部分浸膏，乙酸乙酯部分浸膏和正丁醇部分浸膏；所述浸膏与水的比例为：1Kg浸膏加入4-6L水；所述石油醚、乙酸乙酯，正丁醇分别与水体积比均为1:1；步骤三，取所述乙酸乙酯部分浸膏干法上样，利用硅藻土柱层析，以石油醚、乙酸乙酯或石油醚与乙酸乙酯混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到7个流分，所述7个流分根据极性从小到大依次命名为A-F；所述石油醚与乙酸乙酯混合液中石油醚与乙酸乙酯的体积比为1:1-30:1；步骤四，将步骤三得到的流分F通过100～200目的硅胶柱色谱，以二氯甲烷与甲醇混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到5个流分，所述5个流分根据极性从小到大依次命名为Fa-Fe；所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1:1-60:1；步骤五，将步骤四得到的流分Fe干法上样，通过200～300目的硅胶柱层析，以二氯甲烷与甲醇混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到2个流分，所述2个流分根据极性从小到大命名为Fe1-Fe2；所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1:1-40:1；步骤六，将所述Fe1流分通过凝胶色谱柱，以二氯甲烷与甲醇的混合液为洗脱溶剂等度洗脱即得所述5，8-对醌式黄烷类化合物。所述步骤二中浸膏与水的比例为：1Kg浸膏加入5.5L水。所述步骤三的梯度洗脱中，所用洗脱溶剂按洗脱顺序依次为：石油醚、5种石油醚与乙酸乙酯混合液、乙酸乙酯；所述5种石油醚与乙酸乙酯混合液中石油醚与乙酸乙酯的体积比按洗脱顺序依次为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1。所述步骤四的梯度洗脱中，所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1。所述步骤五的梯度洗脱中，所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为30:1、10:1、5:1。所述步骤六的等度洗脱中，所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比1:1。所述5，8-对醌式黄烷类化合物在抑制脂多糖刺激炎症细胞中NO产物形成的应用。所述5，8-对醌式黄烷类化合物在抑制脂多糖刺激炎症细胞中炎症因子IL-1β释放方面的应用。本专利技术的有益效果为：本专利技术所述5，8-对醌式黄烷类化合物化学名称为(2S)-7-甲氧基-3′,4′-二羟基-5,8-对醌黄烷，具有明显的抗炎作用，可用作抗类风湿性关节炎的先导药物，在抑制脂多糖刺激炎症细胞中NO产物形成和抑制脂多糖刺激炎症细胞中炎症因子IL-1β释放方面有很好的应用效果；其提取分离方法，以华中枸骨为原料，来源广泛、无毒、无污染，制备过程简便，成本低廉，适合大规模推广应用。附图说明图1为本专利技术实施例1中最终产物NMR的H谱图。图2为本专利技术实施例1中最终产物NMR的C谱图。图3为本专利技术实施例4中5，8-对醌式黄烷类化合物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症NO产生抑制效果图。图4为本专利技术实施例5中5，8-对醌式黄烷类化合物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子IL-1β释放抑制效果图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步对本专利技术进行详细描述。本专利技术所用华中枸骨叶样品采于湖北省恩施州，由湖北民族学院医学院郜红利教授鉴定为冬青科(Aquifoliaceae)冬青属(Ilex)植物华中枸骨(Ilexcentrochinensis)的干燥叶，标本(编号IC-20150615)存放于湖北大学生命科学学院中药生物技术省重点实验室。实施例1提取分离本专利技术所述的5，8-对醌式黄烷类化合物。步骤一，取华中枸骨干燥叶10Kg，适当粉碎后用体积浓度为95％乙醇浸泡提取，每次浸泡48小时，提取3次，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，得浸膏1136g；步骤二，将步骤一所得浸膏悬浮于5L水中，分批次加入5L的石油醚、乙酸乙酯，正丁醇依次萃取，减压回收溶剂，分别得石油醚萃部位浸膏，乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏；步骤三，取乙酸乙酯部位浸膏干法上样，利用硅藻土柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:100)梯度洗脱。用TLC检测合并类似部分，即分别将在同一高度或近似高度的点合并得到7个流分，根据极性从小到大依次命名为A-F；步骤四，将步骤三得到的流分F通过100～200目的硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇(50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1)梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，即分别将在同一高度或近似高度的点合并得到5个流分，根据极性从小到大依次命名为Fa-Fe；步骤五，将步骤四得到的流分Fe干法上样，通过200～300目的硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(30:1、10:1、5:1)梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，即分别将在同一高度或近似高度的点合并得到2个流分，根据极性从小到大命名为Fe1-Fe2；步骤六，将Fe1流分通过sephdexLH-20凝胶色谱柱，用二氯甲烷-甲醇(1:1)等度洗脱得到最终产物15mg。实施例2提取分离本专利技术所述的5，8-对醌式黄烷类化合物。步骤一，取华中枸骨干燥叶10Kg，适当粉碎后用体积浓度为95％乙醇浸泡提取，每次浸泡72小时，提取3次，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，得浸膏1145g；步骤二，将步骤一所得浸膏悬浮于5L水中，分批次加入5L的石油醚、乙酸乙酯，正丁醇依次萃取，减压回收溶剂，分别得石油醚萃部位浸膏，乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏；步骤三，取乙酸乙酯部位浸膏干法上样，利用硅藻土柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1、0:100)梯度洗脱。用TLC检测合并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种5，8‑对醌式黄烷类化合物，其特征在于，所述化合物化学名称为(2S)‑7‑甲氧

【技术特征摘要】
1.一种5，8-对醌式黄烷类化合物，其特征在于，所述化合物化学名称为(2S)-7-甲氧基-3′,4′-二羟基-5,8-对醌黄烷，所述化合物的结构式如下：2.一种根据权利要求1所述的5，8-对醌式黄烷类化合物的提取分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤一，取华中枸骨干燥叶，粉碎后用体积浓度为95％的乙醇在室温下浸泡3次，每次48-72小时，每次过滤得浸泡液，收集合并所述浸泡液，减压回收溶剂至所述浸泡液中乙醇完全挥发，得浸膏；步骤二，将所述浸膏悬浮于水中，先后加入石油醚、乙酸乙酯，正丁醇依次分别萃取，每次萃取分离得到萃取液，将所述萃取液减压回收溶剂，依次得到石油醚部分浸膏，乙酸乙酯部分浸膏和正丁醇部分浸膏；所述浸膏与水的比例为：1Kg浸膏加入4-6L水；所述石油醚、乙酸乙酯，正丁醇分别与水体积比均为1:1；步骤三，取所述乙酸乙酯部分浸膏干法上样，利用硅藻土柱层析，以石油醚、乙酸乙酯或石油醚与乙酸乙酯混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到7个流分，所述7个流分根据极性从小到大依次命名为A-F；所述石油醚与乙酸乙酯混合液中石油醚与乙酸乙酯的体积比为1:1-30:1；步骤四，将步骤三得到的流分F通过100～200目的硅胶柱色谱，以二氯甲烷与甲醇混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到5个流分，所述5个流分根据极性从小到大依次命名为Fa-Fe；所述二氯甲烷与甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1:1-60:1；步骤五，将步骤四得到的流分Fe干法上样，通过200～300目的硅胶柱层析，以二氯甲烷与甲醇混合液为洗脱溶剂梯度洗脱，用TLC检测得到2个流分，所述2个流分根据极性从...

【专利技术属性】
技术研发人员：李路军，龙慧，李纯诣，胡泽华，陈勇，陈宇，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42