本发明专利技术提供了一种基于光学方法测试血液样本活化部分凝血活酶时间(APTT)的装置和方法。该装置由支架和化学试剂等部分组成。其中支架由加样区、反应区、进样控制区三部分组成。化学试剂具体包括：激活剂、磷脂、CaCl2等主要成分。本发明专利技术提供了实现对指尖血或未经凝处理血样的活化部分凝血活酶时间(APTT)检测，具有方便快捷、操作简单等优点，并且制备方法简单、对设备和操作人员技术要求低、可操作性强，在临床检验等领域具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种测试活化部分凝血活酶时间的装置和方法
本专利技术涉及一种血液样本测试的装置和方法，特别涉及一种测试活化部分凝血活酶时间(APTT)的装置和方法。
技术介绍
凝血功能检测是一项重要的临床检测项目，对于临床各科疾病诊断具有重要意义。通常测定凝血功能的测定包括4项检查内容，即凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)。其中，活化部分凝血活酶时间(APTT)可用于判断内源性凝血活性状态，是临床上主要的凝血性能测试指标之一。完成包括APTT在内的凝血功能检查一般是术前必查项目，旨在降低术中、术后风险。APTT可用于证实凝血因子VIII、IX、XI的缺陷或是否存在它们相应的抑制物。由于肝素的主要作用途径在于内源性凝血途径，所以APTT常成为监测普通肝素的首选指标。APTT延长常见于凝血因子VIII、IX、XI减低，如甲、乙血友病、血管性假血友病；严重的凝血酶原、凝血因子V、因子X和纤维蛋白原缺乏，如肝脏疾病，阻塞性黄疸，新生儿出血症，肠道灭菌综合征等。APTT缩短常见于高凝状态，如DIC的高凝血期，以及血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变，糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊高症和肾病综合症等。此外，APTT和其他凝血指标相互佐证，可以作为某些临床疾病的确诊依据。活化部分凝血活酶时间测定试剂的主要组份为激活剂、磷脂和钙源。在37℃下，激活剂活化因子激活因子XII和XI，以磷脂代替血小板提供凝血的催化表面，在Ca2+的参与下，观察血液或血浆凝固时间。具体地，在APTT测试中，将自钙源的添加至纤维蛋白的析出所经历的时间为活化部分凝血活酶时间。目前APTT测试方法以液体或粉末试剂为主，配套全自动或半自动血凝仪使用，需要对血液进行离心处理，提取血浆，操作繁琐；用血浆测定APTT时，需要对血浆进行一段时间的活化，再向活化的血样加入APTT试剂，分步完成，耗时、费力。而实现快速、简便检测APTT的方法并不多，因此POCT检测APTT具有重要的研究价值。POCT检测APTT，能够为急诊手术患者大大节省时间，有重要的临床意义。本专利技术的创新之处在于制备了一种能够实现APTT快速检测的装置，所制备的装置为卡片形式，与小型设备配套使用，即可完成对APTT的临床即时检测。该装置特征在于，无需与大型设备配套使用，大大降低的测试成本；将活化与测试过程结合到同一装置上，操作简单，对操作者的技术水平要求也比较低；所制备的卡片可直接取用，无需复杂处理。因此，本专利技术制备的检测卡有望应用于POCT领域，尤其是APTT检验的临床实验，具有重要的研究和实践价值。此外，该检测卡制备方法简单、准确度高、易于接受，具有很高的的市场价值。
技术实现思路
根据活化部分凝血活酶时间(APTT)检测方面的相关研究进展及成果，本专利技术的创新之处在于提供了具有独特孔道结构，能够有序、分步反应的，基于光学方法的APTT检测装置，解决在APTT检测在POCT领域的技术不足，能够简单快捷的完成对患者APTT检测。本专利技术制备的装置可以分为加样区、反应区和加样控制区三部分组成。整体结构主要由基板、双面胶和亲水上盖组成。基板位于装置最底端，起支撑作用，其特定位置附着有相关参与反应的化学试剂。双面胶上具有独特的孔状结构，位于基板和亲水上盖之间。在一些示例中，未经凝血处理的新鲜指尖血或静脉血被滴加到特定区域，在毛细作用、亲水上盖的亲水作用以及加样控制区的调节下，血样依次流经各个反应区，与反应区的试剂发生反应。在反应区上方配有光源和相应检测器，反应区内发生凝血过程中检测器会检测到信号变化，最终，可以通过监控反应区内血样与试剂反应后光学信号的变化，分析计算测定APTT。具体步骤包括：(1)50mMHEPES缓冲溶液中制备终浓度为：50ug/mL鞣花酸，100ug/mL磷脂酰丝氨酸，80ug/mL磷脂酰乙醇胺，350ug/mL氯化钠，150ug/mLPEG6000，20ug/mL硫柳汞，配制溶液，标定pH7.0，作为反应区1溶液备用；(2)200ug/mLCaCl2溶液，作为反应区3溶液备用；(3)将步骤(1)得到的溶液中加入重组凝血因子VIIa，作为反应区2溶液备用；(4)将具有经设计的特定通道结构的双面胶贴合在基板上；(5)分别将步骤(1)、(2)和(3)制备的溶液以涂覆或滴加的方式加入在基板的特定区域内，烘干成膜；(6)在双面胶上层贴合一层亲水上盖，制备得到APTT测试装置。(7)其中，步骤(1)所选择鞣花酸为激活剂，能起到相同作用的激活剂也应视为被保护内容。其中，步骤(1)可选用的缓冲溶液可以为HEPES、TES、PBS等，浓度范围20-300mM且pH范围为5.0-8.0。但优选为HEPES缓冲溶液(pH为7.0-7.5，50mM)。能够在所需pH范围内起到缓冲左右的缓冲体系，也应视为被保护内容。其中，步骤(1)所选择的磷脂为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺，此外，用所选磷脂能够起到相同作用的磷脂也应视为被保护内容。其中，步骤(1)所选择的无机盐为氯化钠。此外，能够与其起到相同作用的无机盐也应视为被保护内容。其中，步骤(1)所选择的聚合物为PEG6000。此外，能够与其起到相同作用的聚合物例如PEG4000、PEG8000等，也应视为被保护内容。其中，步骤(2)所选择的钙源可以为氯化钙、硝酸钙等易溶性钙盐的至少一种。未列举的其他含有Ca2+的相关试剂也应视为被保护内容。其中，步骤(2)所选择的硫柳汞，其他能够起到相似作用的防腐剂或抑菌剂也应视为被保护内容。其中，步骤(5)所选择的将试剂加到基板的反应区的方法可以是吸附法、交联法、粘合剂法等中的至少一种；由于吸附法操作简单，本专利技术选择吸附法，即直接将试剂滴加或涂抹于基板的反应区内，进行烘干。其他将试剂固定在导电基板上的方法也应视为被保护内容。其中，步骤(5)所选择烘干条件为40-80℃，烘干时间为5-30min，优选为70℃条件下，烘干10min。具体条件因所选原料的不同而有所不同，也应视为被保护内容。本专利技术的优势在于：基于光学方法，提供了一种APTT测试装置，能够完成对指尖血和未做抗凝处理新鲜血样的APTT检测；无需大型仪器即可对患者的凝血酶原时间予以检测，操作简单；制备方法简单，便于大规模应用。基于以上优点，该APTT检测装置可应用于POCT领域，在临床检验等方面具有广阔前景。附图说明图1为装置整体外观图图2为装置结构图图3为测试原理图具体实施方式关于本专利的具体实施过程将在以下实施例中详细描述，具体实施过程包括但不限于下述实施例。实施例1反应区1包含试剂可以分为激活剂和APTT测定试剂两部分。当血样流经反应区1后，血样与其充分接触并活化。APTT测定试剂中，主要发挥活性作用的是磷脂和激活剂，其中激活剂起到活化血液的作用，而且磷脂的来源、种类对最终测试结果十分重要。具体地，在本实施例中，向10mL50mMHEPES缓冲溶液中分别加入：0.5mg鞣花酸，1mg磷脂酰丝氨酸，0.8mg磷脂酰乙醇胺，3.5mg氯化钠，1.5mgPEG6000，0.2mg硫柳汞，充分溶解后，标定pH＝7.0，作为反应区1滴加的试剂。反应区2可以作为质控区，只有当质控区的测试结果经本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测试血液样本活化部分凝血活酶时间(APTT)的装置和方法，其特征在于：基于光学方法，实现部分凝血活酶时间的临床检验。
【技术特征摘要】
1.一种测试血液样本活化部分凝血活酶时间(APTT)的装置和方法，其特征在于：基于光学方法，实现部分凝血活酶时间的临床检验。2.依权利要求1所述，该测试装置由加样区、反应区、进样控制区三部分组成。其中加样区与反应区、反应区与进样控制区通过毛细管通道相连接。待测血样在毛细作用、亲水作用和进样控制区的共同作用下，依次通过加样区和反应区，并最终完成测量。3.依照权利要求2所述方法，其特征在于：反应区由反应区1、反应区2和反应区3组成。4.依照权利要求3所述方法，其特征在于：反应区1内包含激活剂试剂和APTT测定试剂，反应区2内包含质控试剂，反应区3包含CaCl2。5.依照权利要求4所述方法，其特征在于：激活剂试剂具体成分包括但不限于鞣花酸，浓度为1-400ug/mL。6.依照权利要求4所述方法，其特征在于：APTT测定试剂由以下原料组成：磷脂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂等部分组成。7.依照权利要求6所述方法，其特征在于：磷脂可...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，胡飞，邱笑违，董飒英，
申请(专利权)人：北京乐普医疗科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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