用于口服递送大分子的含有细胞穿透肽和四醚脂质的脂质体制造技术

本发明专利技术涉及脂质体组合物，其包含含有四醚脂质(TEL)和细胞穿透肽(CPP)的脂质体，其中所述CPP被连接至作为脂质体的脂质双层的一部分的化合物。本发明专利技术还涉及其用于口服递送治疗剂和/或诊断剂的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于口服递送大分子的含有细胞穿透肽和四醚脂质的脂质体本专利技术涉及脂质体组合物，其包含含有四醚脂质(TEL)和细胞穿透肽(CPP)的脂质体，其中所述CPP被连接至作为脂质体的脂质双层的一部分的化合物。本专利技术还涉及其用于口服递送治疗剂和/或诊断剂的用途。口服药物递送被认为是最有利的应用方式，特别是用于治疗需要长期和反复药物施用的慢性疾病。口服途径提供高的药物安全性并且由于其便利性而在患者中被广泛接受。此外，口服药物形式的非-无菌性降低了生产、储存和配送成本，这可能有助于第三世界国家的卫生保健改善。据估计，所有销售药物制剂中的90％是用于口服使用的。然而，许多药物，特别是肽和其它大分子药物，显示出在口服施用后在胃内的酸性条件下非常差的稳定性，并且还有穿过胃肠屏障的差的吸收(图1)。为了克服这个问题，过去几年中已经测试了用以改善生物利用度的不同方法，其包括固体脂质纳米颗粒、纳米乳剂或者微米乳剂或者脂质体。然而，由于它们在胃肠道(GIT)中的不稳定性，常规的脂质体制剂并不十分令人信服。脂质体的显著改善可以通过常规磷脂(PL)和所谓的四醚脂质的组合而进行，所述四醚脂质是来源于古生菌(例如，极端古菌嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobusacidocaldarius))的特定脂质。最近的研究显示，这些TEL可以改善GIT中的脂质体稳定性并且还可以介导粘膜渗透。嗜酸热硫化叶菌(S.acidocaldarius)主要在酸性条件下生长于50至100℃之间的温度下，使得稳定细胞膜是必然的。古细菌膜脂质主要包含C20-C40类异戊二烯-亚基主链，其通过醚键与丙三醇和/或诺尼醇(nonitol)桥基团连接。桥基团是未被取代的或被多种极性或非极性头部基团中的一种取代。古细菌细胞膜中的这些部分的数量随生长条件而不同，并且随着环境温度而增加。可以从嗜酸热硫化叶菌中分离出具有平均数目为4至6个的环戊基环的TELglycerylcaldityltetraether(GCTE)和二甘油基四醚(DGTE)。然而，即使当使用TEL时，在许多情况下，所述脂质体的粘膜渗透仍不令人满意。因此，仍然需要改善脂质体的粘膜渗透。鉴于以上所述，本专利技术所解决的技术问题是提供通过口服途径递送药物的方法，其具有增强的粘膜渗透。上述技术问题的解决方案通过权利要求中所表征的实施方案来实现。具体地，在第一方面，本专利技术涉及包含脂质体的脂质体组合物，所述脂质体包含(a)四醚脂质(TEL)，和(b)细胞穿透肽(CPP)，其中所述CPP被连接至作为所述脂质体的脂质双层的一部分的化合物。如本文所用，术语“脂质体组合物”涉及包含脂质体的组合物。如本文所用的术语“脂质体”是指由脂质双层组成的人工制备的囊泡。由于其在疏水膜内包封水溶液区域的独特性质，可以将脂质体用于递送试剂。溶解的亲水性溶质不能轻易地通过脂质双层。可以将疏水性化合物溶解在脂质双层中，并且以这种方式，脂质体可以运载疏水性和亲水性化合物。为了将分子递送到作用部位，脂质双层可以与其它双层(诸如细胞膜)融合，从而递送脂质体内容物。通过在试剂的溶液中制备脂质体，可将其递送至脂质体的内腔。可以用于形成脂质体的TEL没有被特别地限定并且是本领域已知的。在具体的实施方案中，所述TEL来源于硫化叶菌属的古细菌物种，例如冰岛硫化叶菌(S.islandicus)或嗜酸热硫化叶菌，其中后者是特别优选的。在优选的实施方案中，TEL选自glycerylcaldityltetraether(GCTE)、二甘油基四醚(DGTE)及它们的组合。优选地，本专利技术组合物中使用的脂质体包含总脂质的量的1至25mol-％，优选1至10mol-％，更优选3至7mol-％，更优选4至6mol-％的量的所述TEL。在具体的实施方案中，所述脂质体包含总脂质的量的约5mol-％的量的所述TEL。除了如上所述的TEL的存在之外，在根据本专利技术的组合物中使用的脂质体没有被特别地限定于特定的脂质。特别地，用于产生所述脂质体的脂质可以是本领域已知的任何合适的脂质。这些脂质包括但不限于胆固醇或其衍生物、磷脂、溶血磷脂或其它四醚脂质。因此，在优选的实施方案中，所述脂质体包含选自以下的一种或多种脂质：胆固醇及其衍生物、磷脂、溶血磷脂和四醚脂质。在本专利技术的上下文中，优选的胆固醇衍生物是类固醇和具有碱性类固醇分子结构的化合物。优选地，所述脂质体包含磷脂，其中所述磷脂可以是合成的、半合成的或天然的磷脂。通常，合适的脂质可以选自：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(phosphatidylinosites)、磷脂酰丝氨酸、脑磷脂、磷脂酰甘油和溶血磷脂。在本专利技术的具体实施方案中，脂质体包含卵磷脂酰胆碱(E-PC；卵磷脂)和胆固醇，优选为约85mol-％E-PC和约10mol-％胆固醇的量。根据本专利技术的待使用的脂质体可以还包含任何其它合适的试剂，诸如例如酶抑制剂、渗透增强剂或可以被用于稳定脂质体或改变脂质体性质的其它亲脂性或亲水性物质。此类亲脂性或亲水性物质没有被特别地限定，并且是本领域已知的。它们包括例如维生素E、脂肪酸、蜡以及甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。此外，可以加入增强封闭的活性剂的生物利用度的物质，如酶抑制剂、紧密连接调节剂或螯合剂。可以结合本专利技术使用的CPP没有被特别地限定并且是本领域已知的。优选地，CPP是具有正的总电荷的CPP。相应的CPP在本领域中是已知的。更优选地，CPP选自线性或环化的来源于黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)穿透蛋白(SEQIDNO：1；RQIKIWFQNRRMKWKK)、来源于HIV-1的TAT(转录反式激活因子)-肽(SEQIDNO：2；CGRKKKRRQRRRPPQC)、人工肽MAP(模式两亲性肽)(SEQIDNO：3；GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV)、人工肽R9(SEQIDNO：4；RRRRRRRRR)、是来源于鼠血管内皮钙粘蛋白的CPP的pVEC(SEQIDNO：5；LLIILRRRIRKQAHAHSK-酰胺)、来源于人类神经肽甘丙肽的运输蛋白(SEQIDNO：6；GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKISIL-酰胺)和来源于HIV的MPG(SEQIDNO：7；GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV)、它们的组合及它们的二聚体。在本文中，所有上述肽可以以线性或环化的形式存在，其中环化的形式是优选的。此外，本专利技术的CPP可以由L-氨基酸、D-氨基酸或它们的混合物的组成，其中对于线性CPP，D-氨基酸是优选的。根据本专利技术，CPP被连接至作为脂质体的脂质双层的一部分的化合物。在本文中，术语“作为脂质体的脂质双层的一部分”旨在表明所述磷脂被整合到所述脂质双层中的事实。优选地，连接是共价连接。与CPP连接并且是脂质体的脂质双层的一部分的化合物优选为如上限定的合适的脂质，例如，选自以下的脂质：胆固醇及其衍生物、磷脂、溶血磷脂和四醚脂质，其中磷脂是优选的，并且其中所述脂质可以是修饰的和/或活化的脂质。优选地，通过接头将CPP连接至所述化合物。在本文中，可以通过接头将单体CPP共价连接至磷脂(图3)，或通过接头将二聚化CPP(其中同源二聚体和异源二聚体是可能的)共价连接至磷脂(图4)本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含脂质体的脂质体组合物，所述脂质体包含(a)四醚脂质(TEL)，和(b)细胞穿透肽(CPP)，其中所述CPP被连接至作为所述脂质体的脂质双层的一部分的化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.21 EP 15003011.21.包含脂质体的脂质体组合物，所述脂质体包含(a)四醚脂质(TEL)，和(b)细胞穿透肽(CPP)，其中所述CPP被连接至作为所述脂质体的脂质双层的一部分的化合物。2.如权利要求1所述的脂质体组合物，其中所述TEL来源于硫化叶菌(Sulfolobussp.)。3.如权利要求2所述的脂质体组合物，其中所述TEL来源于嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobusacidocaldarius)。4.如权利要求1至3中任一项所述的脂质体组合物，其中所述TEL选自glycerylcaldityltetraether(GCTE)、二甘油基四醚(DGTE)及它们的组合。5.如权利要求1至4中任一项所述的脂质体组合物，其中所述脂质体包含总脂质的量的1至10mol-％的量的所述TEL。6.如权利要求1至5中任一项所述的脂质体组合物，其中所述CPP选自线性或环化的穿透蛋白(SEQIDNO：1)、TAT(转录反式激活因子)-肽(SEQIDNO：2)、MAP(模式两亲性肽)(SEQIDNO：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普·乌尔，马克斯·索特，乌韦·哈伯肯，沃尔特·米尔，哥特·弗里克，
申请(专利权)人：海德堡大学，
类型：发明
国别省市：德国,DE