The invention provides a method to determine whether or not the potato is irradiated by PCR technology. It first extracts unirradiated and DNA samples of the potato to be measured, and uses 4 pairs of discriminant primers to carry out real-time quantitative PCR Livak analysis of DNA samples, obtain the multiplier relationship between DNA fragments, and identify whether the samples are conformed to radiation loss through the two discrimination criteria. Then 2 pairs of primers were used to carry out real-time PCR analysis on the DNA samples with the characteristics of irradiation. The logarithm of the multiple of DNA fragments was obtained, and two criteria were used to determine whether the potato samples were irradiated or not, and the qualitative identification of the potato was finally realized. Compared with \comet DNA method\, it can improve the sensitivity and reliability of the qualitative identification of irradiated food. It has the feasibility and important application value for the quality and safety control of irradiated food production and radiation processing enterprises, the food safety supervision department and the food irradiation identification service of the import and export inspection and quarantine department.
【技术实现步骤摘要】
一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法
本专利技术涉及食品辐照检测
,特别涉及一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法。
技术介绍
关于食品的定性辐照鉴定技术,是指判定食品样本其是否经过辐照处理的多种检测方法。辐照处理可杀灭食品内的有害微生物,抑制其发芽过程,延长食品货架期;另一方面,需辐照食品未经过有效辐照或辐照剂量超出安全质量标准时,会造成食品品质下降,对消费者健康造成威胁。随着全球范围内辐照食品及辐照加工产业的发展,消费者对食品安全需求不断提升,对辐照食品鉴定技术的可靠性要求愈发凸显。目前实际应用中的辐照食品鉴定技术按原理可划分为物理方法、化学方法和生物方法三类。物理方法主要包括电子自旋共振(ESR)法、热释光(TL)法、光释光(PSL)法等;化学方法主要包括挥发性碳氢化合物法、过氧化值法、超临界流体抽取法、LC-MS及GC-MS联用检测技术等;生物方法主要包括了直接表面荧光过滤技术/平板计数(DEFT/APC)法,基于“DNA变异”原理的彗星DNA法等。这种辐照食品鉴定方法多种并存的状况,是因为各种检测技术对测试样本的范围限制严格,尚不存在一种可对所有辐照食品实现定性或定量检测的通用方法。以我国最新颁布(2017年6月)的辐照食品鉴定国标为例:1)GB21926-2016(含脂类辐照食品鉴定2-十二烷基环丁酮的气相色谱-质谱分析法)、2)GB31642-2016(辐照食品鉴定电子自旋共振波谱法)、3)GB31643-2016(含硅酸盐辐照食品的鉴定热释光法)、4)GB23748-2016(辐照食品鉴定筛选法),GB21926-2016针对一 ...
【技术保护点】
一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法,其特征在于:所述方法包括下述步骤:A、提取样本总DNA:取同一批次的未辐照土豆样本、待检土豆样本至少各三个,分别提取未辐照土豆样本总DNA和待检土豆样本总DNA;B、获取未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数:将步骤A中提取的每个未辐照土豆样本总DNA采用至少含2组引物对的引物对组合进行实时定量PCR检测,通过Livak分析,分别得到至少3个未辐照样本土豆总DNA中待检测片段之间的相对倍数的对数,并计算得到未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数;所述含2组引物对的引物对组合如下:P1‑P2引物对组合,其序列为:P1:5’ATTCGGCCTAGCTCTGTGAC 3’,5’TGAGATGCCCAACTGCATGA 3’;P2:5’AACGATGAGTGTTCGCCCTT 3’,5’GGCAATCTTTCCGGATTCGC 3’P3‑P4引物对组合,其序列为:P3:5’AGCACTACCGGTGGAAGGTA 3’,5’TTAGCCAAAGGTCGCTTGGA 3’;P4:5’ ...
【技术特征摘要】
1.一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法,其特征在于:所述方法包括下述步骤:A、提取样本总DNA:取同一批次的未辐照土豆样本、待检土豆样本至少各三个,分别提取未辐照土豆样本总DNA和待检土豆样本总DNA;B、获取未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数:将步骤A中提取的每个未辐照土豆样本总DNA采用至少含2组引物对的引物对组合进行实时定量PCR检测,通过Livak分析,分别得到至少3个未辐照样本土豆总DNA中待检测片段之间的相对倍数的对数,并计算得到未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数;所述含2组引物对的引物对组合如下:P1-P2引物对组合,其序列为:P1:5’ATTCGGCCTAGCTCTGTGAC3’,5’TGAGATGCCCAACTGCATGA3’;P2:5’AACGATGAGTGTTCGCCCTT3’,5’GGCAATCTTTCCGGATTCGC3’P3-P4引物对组合,其序列为:P3:5’AGCACTACCGGTGGAAGGTA3’,5’TTAGCCAAAGGTCGCTTGGA3’;P4:5’ACGGGAAATTGTCCGCGATA3’,5’AAAATCAGGCAACGGTCCCA3’;P5-P6引物对组合,其序列为:P5:5’ATTCGGCCTAGCTCTGTGAC3’,5’TGAGATGCCCAACTGCATGA3’;P6:5’AACGATGAGTGTTCGCCCTT3’,5’GGCAATCTTTCCGGATTCGC3’;C、获取鉴定方法检限;所述鉴定方法检出限为空白标准偏差的3倍;D、按照步骤B操作和引物对组合获取待检土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数;E、判断土豆是否辐照:当采用P1-P2引物对组合、P3-P4引物组合中任意一组或2组获得的待检土豆样本待检...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘绵学,黄敏,伏毅,王艳,瞿攀,
申请(专利权)人:四川省原子能研究院,
类型:发明
国别省市:四川,51
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