The invention relates to a method of HSCCC DPPH combined with on-line active analysis and separation of Ophiopogon high isoflavone, which includes the following steps: 1) sample preparation; 2) preparation of HSCCC flow phase and fixed phase; 3) DPPH liquid phase solution preparation; 4) HSCCC DPPH system equilibrium and connection; 5) sample analysis and separation. A method of on-line activity analysis and separation of high isoflavones from Ophiopogon japonicus with HSCCC DPPH was designed. Through this method, the on-line detection analysis and separation of the high isoflavones in Ophiopogon japonicus (including different plant parts, including root, fibrous root and other plant parts) were realized.
【技术实现步骤摘要】
一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法
本专利技术涉及天然药物
,具体涉及一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法。
技术介绍
麦冬来源于百合科沿阶草属多年生常绿草本植物Ophiopogonjaponicus,其干燥块根为传统常用中药之一,应用已有上千年的历史;具有养阴生津,润肺清心的功效;主治肺燥干咳、阴虚痨咳、喉痹咽痛、津伤口渴、内热消渴、心烦失眠、肠燥便秘等。目前,已经从麦冬植物包括块根、须根等不同部分中鉴定了多种高异黄酮、甾体皂苷以及多糖成分。其中麦冬高异黄酮是一类重要的小分子活性成分,它们大都有清除DPPH(2,2-联苯基-1-苦基肼基)自由基、超氧阴离子、H2O2及·OH等抗氧化活性,同时具有抗肿瘤、抗炎、抑制磷酸化、抗雌激素、抗诱变、镇咳、抗真菌、诱导血管舒张和肝细胞保护等多方面的生物活性和作用。传统的抗氧化活性成分筛选方法,一般需要先采用硅胶柱层析、凝胶层析以及制备液相色谱等方法从粗提物获得单体化合物,然后再通过抗氧化活性试验鉴定活性成分。以上方法实验方案复杂、耗时长,操作繁琐、费时费力,同时容易造成漏筛等问题。此外,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法为代表的活性检测技术多在离线情况下进行,效率较低,优势未能充分发挥。高速逆流色谱(HSCCC)一种基于液-液分配机理的新型色谱分离纯化技术。它不用任何固态的支撑物或载体,而是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡。其中一相作为固定相,另一相作为流动相,在连续洗脱的过程中能保留大量固定 ...
【技术保护点】
一种HSCCC‑DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法,其特征在于包括以下步骤:1)样品准备取麦冬的粗提物或乙酸乙酯萃取物或经初步分离的化学部位,用旋转蒸发仪蒸干除去溶剂,得到浓缩后的样品,备用;2)HSCCC流动相与固定相准备选择合适HSCCC两相溶剂体系,按体积比及先后顺序将溶剂加入分液漏斗,振摇,使溶剂混匀,静置过夜上相为流动相,下相为固定相,超声脱气20min,静置至室温,备用;3)DPPH流动相溶液准备精密称取DPPH,用色谱甲醇定容于容量瓶,摇匀溶解,用微孔滤膜过滤,滤液装入棕色瓶,超声脱气15min,静置至室温,备用;4)HSCCC‑DPPH系统的平衡与连接以10~20mL/min 的流速往HSCCC仪中泵入固定相,待管路完全充满固定相后以600~1000rpm转动主机,同时以1~3mL/min 的速度泵入流动相,至HSCCC系统平衡;应用输液泵入DPPH溶液至检测器基线平衡;用连接管连接HSCCC和输液泵,HSCCC流动相经检测器1流出后,与输液泵入DPPH溶液在线混合,再进入检测器2分析,直至HSCCC和DPPH各自所对应的检测器基线平衡,所用设备为的高速逆 ...
【技术特征摘要】
1.一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法,其特征在于包括以下步骤:1)样品准备取麦冬的粗提物或乙酸乙酯萃取物或经初步分离的化学部位,用旋转蒸发仪蒸干除去溶剂,得到浓缩后的样品,备用;2)HSCCC流动相与固定相准备选择合适HSCCC两相溶剂体系,按体积比及先后顺序将溶剂加入分液漏斗,振摇,使溶剂混匀,静置过夜上相为流动相,下相为固定相,超声脱气20min,静置至室温,备用;3)DPPH流动相溶液准备精密称取DPPH,用色谱甲醇定容于容量瓶,摇匀溶解,用微孔滤膜过滤,滤液装入棕色瓶,超声脱气15min,静置至室温,备用;4)HSCCC-DPPH系统的平衡与连接以10~20mL/min的流速往HSCCC仪中泵入固定相,待管路完全充满固定相后以600~1000rpm转动主机,同时以1~3mL/min的速度泵入流动相,至HSCCC系统平衡;应用输液泵入DPPH溶液至检测器基线平衡;用连接管连接HSCCC和输液泵,HSCCC流动相经检测器1流出后,与输液泵入DPPH溶液在线混合,再进入检测器2分析,直至HSCCC和DPPH各自所对应的检测器基线平衡,所用设备为的高速逆流色谱仪、输液泵和2台紫外-可见光谱分析检测系统的联用设备;5)样品的分析及分离将样品用高速逆流色谱选用溶剂系统溶解,滤膜过滤,通过HSCCC主机进样系统进样,通过2台检测器监测可以实现对麦冬活性成分的在线分析;如果需要分离获得相对应的活性成分,则断开HSCCC-DPPH...
【专利技术属性】
技术研发人员:周一峰,王丽玲,吕炬烽,葛青,毛建卫,
申请(专利权)人:浙江科技学院,浙江省林业科学研究院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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