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一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用制造技术

技术编号:18104980 阅读:69 留言:0更新日期:2018-06-03 04:14
本发明专利技术公开一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用,该标志物为miR‑122‑5p、miR‑125b‑5p、miR‑192‑5p、miR‑193b‑3p、miR‑221‑3p和miR‑27b‑3p中的一种或多种。血浆miRNA作为新型的生物标志物,具有稳定性好、微创易获取、灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能及预测预后能力的胰腺癌血浆miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断胰腺癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域,涉及一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用。
技术介绍
胰腺癌(PC)是目前中国第六大,也是全球第七大癌症死亡的原因。该病的预后差,5年总体生存率(OS)低于5%。全身化疗虽可延长胰腺癌患者的生存期,手术切除仍然是唯一可治愈的治疗方法。然而,只有不到10%的胰腺癌患者被诊断时处于早期阶段,大多数患者由于相对较晚的肿瘤分期而失去手术机会。早期检测和干预是改善胰腺癌患者长期结局的关键策略。因此,许多研究集中在胰腺癌的生物标志物和分子靶标上,希望提高患者的生存。在临床实践中,血清癌抗原19-9(CA19-9)可作为胰腺癌检测和监测肿瘤状态的生物标志物。但CA19-9在胰腺癌诊断中并没有显示足够的敏感性和特异性,特别是早期患者。良性胆道梗阻或慢性胰腺炎存在的假阳性升高也可能限制其在临床中的作用。因此,目前迫切需要更多新颖可靠的生物标志物来检测胰腺癌以利于早期干预,延长病人的生存期。微小RNA(miRNAs)是一类长度在22个左右的核苷酸的小非编码RNA分子,其通过转录后调控广泛参与了各种生命活动过程,包括肿瘤的发生、侵袭及转移等。研究发现,miRNA的表达在肿瘤中有不同程度的上调和下调,为其能够作为一种新兴的肿瘤标志物奠定了基础。2008年,Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA,发现其能够稳定存在于外周血中,并且可以作为诊断肿瘤的无创标志物。现已有研究证实了循环miRNA在胃癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中的潜在诊断价值。但由于研究方法及纳入人群的差异,导致研究结果不完全一致。因此,本研究利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的方法,通过对大样本的胰腺癌血浆的研究,旨在寻找对胰腺癌具有潜在诊断价值的血浆miRNA。并对这些miRNA在胰腺癌组织中以及外周血浆外泌体中的表达进行验证,以进一步明确其与胰腺癌的关系。同时对于这些血浆miRNA在预测患者预后的作用进行进一步研究。若根据这类miRNA设计针对于胰腺癌的诊断试剂盒,将会推动我国胰腺癌的诊治水平,也为将来对胰腺癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述血浆miRNA标志物及其引物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于胰腺癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的另一目的在于提供用于胰腺癌辅助预测预后和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现:一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物,该标志物为miR-122-5p(uggagugugacaaugguguuug),miR-125b-5p(ucccugagacccuaacuuguga),miR-192-5p(cugaccuaugaauugacagcc),miR-193b-3p(aacuggcccucaaagucccgcu)miR-221-3p(agcuacauugucugcuggguuuc)和miR-27b-3p(uucacaguggcuaaguucugc)中的一种或多种。该血浆miRNA标志物优选为miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中两种或两种以上的组合,进一步优选为miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p六种miRNA所组成的组合。上述的血浆miRNA标志物在辅助诊断胰腺癌中的应用。上述的血浆miRNA标志物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒或治疗胰腺癌药物中的应用。一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物,该引物包含miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中的一种或多种miRNA的引物;优选为包含血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中两种或两种以上miRNA的引物;进一步优选为包含血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p六种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断胰腺癌或制备胰腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种胰腺癌辅助诊断试剂盒,该试剂盒中含有血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中的一种或多种miRNA的引物;优选为含有血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中两种或两种以上miRNA的引物;进一步优选为含有血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p六种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂。该试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂,如逆转录酶,缓冲液,dNTPs,MgCl2,DEPC水和Taq酶等;还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与胰腺癌诊断相关的血浆miRNA标志物miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中的每种miRNA的序列均已公开,但是将各miRNA标志物进行组合作为胰腺癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得,本专利技术实施例中使用的血浆miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说,本专利技术解决问题的技术方案包括:(1)建立统一标准的标本库和数据库:以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本,系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血浆miRNA差异表达谱分析:分析胰腺癌和正常对照人群中差异表达的血浆miRNA,并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证,明确这些miRNA诊断胰腺癌的能力。(4)血浆miRNA诊断试剂盒的研制:根据胰腺癌患者与正常人群血浆中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒,实现对胰腺癌患者的无创辅助诊断。(5)分析这些血浆miRNA预测胰腺癌患者预后的能力。(6)分析这些miRNA在胰腺癌组织以及外泌体中的表达情况,揭示这些miRNA与胰腺癌的关系,为将来研制可能与这些miRNA相关的治疗胰腺癌的药物提供依据。本专利技术人以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本,系统收集完整的人口学资料、临床资料,并采用了ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及本文档来自技高网
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一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用

【技术保护点】
一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物,其特征在于该标志物为miR‑122‑5p、miR‑125b‑5p、miR‑192‑5p、miR‑193b‑3p、miR‑221‑3p和miR‑27b‑3p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物,其特征在于该标志物为miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的血浆miRNA标志物,其特征在于该血浆miRNA标志物为miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中两种或两种以上的组合,优选为miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p六种miRNA所组成的组合。3.权利要求1或2所述的血浆miRNA标志物在辅助诊断胰腺癌中的应用。4.权利要求1或2所述的血浆miRNA标志物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒或治疗胰腺癌药物中的应用。5.一种与胰腺癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物,其特征在于该引物包含miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中的一种或多种miRNA的引物;优选为包含血浆miRNA中miR-122-5p、miR-125b-5p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-221-3p和miR-27b-3p中两种或两种以上miRNA的引物;进一步优选为包含血浆m...

【专利技术属性】
技术研发人员:朱伟苗毅周鑫
申请(专利权)人:朱伟
类型:发明
国别省市:江苏,32

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