裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种裙带菜提取物在制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂中的应用，研究表明，裙带菜提取物对α‑葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用，其酶抑制类型为混合I型抑制，裙带菜提取物作为α‑葡萄糖苷酶抑制剂开发具有可行性。

【技术实现步骤摘要】
裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用
本专利技术涉及医药制剂
，具体涉及的是一种裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
技术介绍
糖尿病是一种常见的以慢性血糖水平增高为特征的代谢病群，长期的血糖增高，易使血管受损并危及心、脑、肾、眼等器官，严重影响人体生命安全。为此，人们致力于研究抑制血糖升高的药物。目前，α-葡萄糖苷酶抑制剂如阿卡波糖等，由于具有抑制淀粉类分解为葡萄糖的速率，减缓肠道对碳水化合物的吸取等效用，被认为是首选的口服降糖药物。但临床用药也发现阿卡波糖片等新型口服降糖药，可能会造成胀气、腹泻、腹痛等副作用。因此，从可食用、药用植物中寻找更为安全高效的新型α-葡萄糖苷酶抑制剂一直受到广泛学者的青睐。裙带菜是一种广为食用的大型褐藻，兼有降血压、降血脂、提高免疫力与抗细胞癌变等药理作用，具有重要的营养价值和潜在的保健功能。而裙带菜提取物对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的相关研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。为了达成上述目的，本专利技术的解决方案是：裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。所述裙带菜提取物是由下列方法制备的：(1)取去杂的新鲜裙带菜洗净沥干后，剪碎，真空冷冻干燥，粉碎成裙带菜粉末；(2)取粉碎后的裙带菜粉末，按照裙带菜粉末:水＝3g:100mL的比例混匀，40℃下、40KHz超声波辅助提取30min，取滤液用旋转蒸发器旋蒸浓缩，得到裙带菜浓缩液；(3)将所述裙带菜浓缩液与无水乙醇按体积比为1:3的比例混合，4℃静置24h后离心，分离沉淀和上清液，取上清液真空旋蒸成粘稠状，经真空冷冻干燥得裙带菜水提醇沉上清部分；(4)将所述裙带菜水提醇沉上清部分用去离子水配成浓度为15～25mg/mL的溶液，与AB-8大孔吸附树脂静态吸附后上柱，依序用去离子水、体积分数为25％、50％、75％、100％的乙醇梯度洗脱，控制每秒1～3滴的流速洗脱，记录洗脱体积，收集各洗脱液真空旋蒸浓缩，得到的浓缩液经真空冷冻干燥，即得由相应的洗脱液洗脱的裙带菜提取物。步骤(1)中，所述真空冷冻干燥的温度为－80℃。步骤(2)中，所述旋蒸浓缩在55℃、－0.1MPa的条件下进行。步骤(3)中，所述离心的转速为4000r/min，所述离心的时间为10min，所述真空冷冻干燥的温度为－80℃。步骤(4)中，所述AB-8大孔吸附树脂需要进行预处理，所述真空冷冻干燥的温度为－80℃。采用上述技术方案后，本专利技术裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用，研究表明，裙带菜提取物对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用，裙带菜提取物作为α-葡萄糖苷酶抑制剂开发具有可行性。附图说明图1为本专利技术中阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用图；图2为本专利技术中50％乙醇洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用图；图3为本专利技术中50％乙醇洗脱组分对α-葡萄糖苷酶的动力学分析图，其中图3a为50％乙醇洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用的Lineweaver-Burk双倒数图，图3b是以Lineweaver-Burk双倒数图的斜率对样液浓度二次作图得到，图3c是以Lineweaver-Burk双倒数图的截距对样液浓度二次作图得到。具体实施方式为了进一步解释本专利技术的技术方案，下面通过具体实施例来对本专利技术进行详细阐述。实施例1、仪器与试剂酶标仪(TECANF50)。AB-8大孔吸附树脂(山西博晖生化科技有限公司)，阿卡波糖(拜耳医药保健有限公司，国药准字H19990205，6924147651014号)，α-葡萄糖苷酶、4-硝基苯-α-D-吡喃葡糖苷均购自Sigma公司。新鲜裙带菜产自中国山东威海市。2、裙带菜提取物的制备2.1裙带菜水提醇沉上清部分的制备取去杂的鲜裙带菜洗净沥干后，剪碎，－80℃真空冷冻干燥，粉碎成裙带菜粉末，粉末的粒径约为0.15μm；取粉碎后的裙带菜粉末，按照裙带菜粉末:水＝3g:100mL的比例混匀，40℃下、40KHz超声波(功率600W)辅助提取30min，取滤液用旋转蒸发器在55℃、－0.1MPa的条件下进行旋蒸浓缩，得到裙带菜浓缩液；将裙带菜浓缩液与无水乙醇按体积比为1:3的比例混合，4℃静置24h后，在4000r/min的转速下离心10min，分离沉淀和上清液，取上清液真空旋蒸成粘稠状，经－80℃真空冷冻干燥，得裙带菜水提醇沉上清部分。2.2裙带菜水提醇沉上清部分的梯度洗脱2.2.1AB-8大孔吸附树脂的预处理新购的AB-8大孔吸附树脂按以下步骤进行预处理：将1kgAB-8大孔吸附树脂放入大烧杯中，用无水乙醇浸泡8h以上，水洗至中性且无乙醇味，依次用质量分数各为5％的盐酸和氢氧化钠溶液浸泡超过8h，浸泡期间需将树脂水洗至中性后再进行下一步浸泡。2.2.2裙带菜提取物的洗脱将裙带菜水提醇沉上清部分用去离子水配成浓度为20mg/mL的溶液，与AB-8大孔吸附树脂静态吸附后上柱，依序用去离子水、体积分数为25％、50％、75％、100％的乙醇梯度洗脱，控制每秒1～3滴的流速洗脱，记录洗脱体积，收集各洗脱液真空旋蒸浓缩，得到的浓缩液经真空冷冻干燥，即得由相应的洗脱液洗脱的裙带菜提取物，依次记为水洗脱组分、25％乙醇洗脱组分、50％乙醇洗脱组分、75％乙醇洗脱组分、100％乙醇洗脱组分。3、裙带菜水提醇沉上清部分及其洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响3.1测定方法目前，筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂最常用的经典方法是PNPG法，该实验方法的底物(PNPG)可被α-葡萄糖苷酶催化分解为有色的对硝基苯酚(PNP)，当加入酶抑制剂后，反应体系颜色越浅、吸光值越低说明该抑制剂的酶抑制活性越强[黄晓冬,蔡琼瑶,王远花,等.海藻铁钉菜抑制α-葡萄糖苷酶活性部位的筛选及其反应动力学研究[J].中国医院药学杂志,2016,36(1):16-20.]，因此，本实验采用PNPG法的微孔板筛选模型比较分析裙带菜水提醇沉上清部分及去离子水、25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、100％乙醇等洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响。具体操作为：裙带菜水提醇沉上清部分及各洗脱组分均以0.1mol/L磷酸盐缓冲液PBS(pH＝6.8)为溶媒，配制成不同质量体积浓度的样液，参照黄晓冬等[黄晓冬,蔡琼瑶,王远花,等.海藻铁钉菜抑制α-葡萄糖苷酶活性部位的筛选及其反应动力学研究[J].中国医院药学杂志,2016,36(1):16-20.]的方法测定各样液对α-葡萄糖苷酶活性的影响，以阿卡波糖为阳性对照。3.2结果与分析3.2.1裙带菜水提醇沉上清部分及各洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用裙带菜水提醇沉上清部分及各洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响如表1所示。由表1可知，裙带菜水提醇沉上清部分及其各洗脱组分，在质量体积浓度分别为2mg/mL和4mg/mL时，并没有显现出α-葡萄糖苷酶抑制活性。计算发现，水洗脱组分占水提醇沉上清部分所有洗脱组分的99.57％，是上清部分的主体，这使得低浓度的水提醇沉上清部分与水洗脱组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响表现出较明显的作用一致性，并且较高比例的水洗脱组分可能对上清部分中的α-葡萄糖苷酶抑制活性组分产生拮抗作用。实验发现，当去除水洗脱组分后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
裙带菜提取物在制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的裙带菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用，其特征在于：所述裙带菜提取物是由下列方法制备的：(1)取去杂的新鲜裙带菜洗净沥干后，剪碎，真空冷冻干燥，粉碎成裙带菜粉末；(2)取粉碎后的裙带菜粉末，按照裙带菜粉末:水＝3g:100mL的比例混匀，40℃下、40KHz超声波辅助提取30min，取滤液用旋转蒸发器旋蒸浓缩，得到裙带菜浓缩液；(3)将所述裙带菜浓缩液与无水乙醇按体积比为1:3的比例混合，4℃静置24h后离心，分离沉淀和上清液，取上清液真空旋蒸成粘稠状，经真空冷冻干燥得裙带菜水提醇沉上清部分；(4)将所述裙带菜水提醇沉上清部分用去离子水配成浓度为15～25mg/mL的溶液，与AB-8大孔吸附树脂静态吸附后上柱，依序用去离子水、体积分数为25％、50％、75％、100％的乙醇梯度洗脱，控...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴聪杰，黄晓冬，黄世英，高蓉，韦兰妮，
申请(专利权)人：泉州师范学院，
类型：发明
国别省市：福建,35