防治黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌及制剂与应用制造技术

技术编号:18043999 阅读:34 留言:0更新日期:2018-05-26 04:36
本发明专利技术属于微生物农药制备技术领域。具体涉及防治黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌及制剂与应用。分离得到一株对黄曲条跳甲具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)HAN055,由该菌株制成的制剂WP‑HAN055对黄曲条跳甲具有显著的防治效果。所述的苏云金芽孢杆菌HAN055保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2015608。

【技术实现步骤摘要】
防治黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌及制剂与应用
本专利技术属于微生物农药制备
具体涉及防治黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌及制剂与应用。
技术介绍
跳甲(fleabeetle),属于鞘翅目(Coleoptera)叶甲科(Chrysomelidae)跳甲亚科(Alticinae或Halticinae)昆虫,其色暗或具金属光泽,后足膨大健壮,善于跳跃,在世界各地都有广泛的分布。跳甲主要危害十字花科蔬菜,以及茄果类瓜类等,其中,黄曲条跳甲的危害尤为严重。黄曲条跳甲(Phllotretastriolata)是一种重要的地下虫害,主要危害农作物的种子、根、茎等。受其危害最为严重的是十字花科(Brassicaceae)植物,包括甘蓝、油菜、白菜、萝卜等,是世界性的害虫之一(贺华良,2012)。其幼虫和成虫均能够危害农作物,幼虫取食根皮,咬断须根,致使地上部分的植株叶片变黄萎焉而死;成虫则主要取食叶片,咬食叶肉,造成许多细密的小孔,进而影响植株的正常生长而死亡(伍海森,2005)。更重要的是跳甲成虫和幼虫对植株造成的伤口,很容易被其他病原菌利用继而侵染植株,从而引起其他疾病的发生,如软腐病、根肿病等病害的病原菌从跳甲幼虫咬食后的伤痕侵染植株体内,造成病害的发生。目前,跳甲的主要防治措施有:(1)农业防治:及时处理农作物残体落叶;播种前深耕晒土;实行轮作的耕作制度。(2)化学农药防治:化学农药防治是跳甲防治的主要手段,常用的农药有90%晶体敌百虫、50%辛硫磷乳油、21%灭杀毙等。(3)黑光灯诱杀:因为跳甲成虫对黑光灯比较敏感,人们利用它的这一特点进行诱导捕杀,对防治有一定的效果。目前人们防治跳甲的手段和方法主要是应用化学农药。但是化学农药的具有毒性高、降解周期长等缺点,长期使用后对生态环境和食品安全造成严重的问题。在这种背景下,除了继续探索低毒、低残留、低污染的化学农药外,生物农药作为一种“绿色农药”,其对病虫害防治效果高、多种活性成分和药效因子共同发挥作用,使得病虫害难以对其产生药物抗性,而且使用后几乎不会对人类和环境造成农药残留问题等负面问题,逐渐成为继化学农药之后一个新的研究和关注的热门。目前,在黄曲条跳甲的生物防治中,首先利用昆虫病原线虫防治跳甲虫害;其次,利用生物学技术手段对作物进行基因改造,获得具有抗跳甲虫害的新性状也是防治跳甲的一种重要方式;另外,新一代的调控型“农药”植物次生物质作为也被用来防治跳甲。然而,在微生物防治跳甲领域,除了利用抗生素农药(如1.8%阿维菌素乳油等被应用外,还有报道一些虫生真菌能够对跳甲具有一定的防效。但是目前商业化的生物农药的产品种类和数量仍然很少。苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)简称B.t,属于革兰氏阳性菌,在生长后期能够形成内生芽孢的细菌,自然界土壤中广泛的分布。在《伯杰细菌鉴定手册》第九版中,苏云金芽孢杆菌归为第二类、第十八群,属于形成于内生芽孢的杆菌和球菌部,芽孢杆菌科,芽孢杆菌属的一个种(关雄1997)。苏云金芽孢杆菌区别于蜡状芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌的最显著的特征是,在芽孢形成的同时,会在菌体的一端或两端形成一种杀虫晶体蛋白(InsecticidalCrystalProtein,ICPs),是一种碱性蛋白。这种杀虫晶体蛋白由一个或多个多肽组成,其晶体的形状、大小因菌株的不同而异,形状有菱形、圆形、方形、米粒型或其他一些不规则形状等。杀虫晶体蛋白对敏感昆虫有特异性的毒杀作用,如鞘翅目、鳞翅目、双翅目、膜翅目等昆虫,由于其作用的专一性,只对特异的靶标生物具有生物活性,而不会对人、畜等的健康造成危害,因而苏云金芽孢杆菌制剂被广泛的应用于农业害虫的防治(Carlbergetal1995)。苏云金芽孢杆菌具有非常广的杀虫活性谱,靶标对象有节肢动物门、原生动物门、变形动物们、线形动物门等有害生物。发挥生物活性的物质除了伴胞晶体蛋白外,还有许多次代谢产物,如抗生素、细菌素等活性物质(Capalbo1995)。苏云金杆菌制剂在农业害虫防治中具有许多优点:(1)对人、畜等安全无毒,不会对环境造成污染;(2)对害虫天敌和有益生物无毒杀作用,有利于维持生态平衡;(3)对农作物无毒副作用,不影响农产品的自身品质;(4)制剂中的有效杀虫成分复杂,相互作用,共同发挥杀虫活性,不利于害虫抗药性的产生;(5)苏云金杆菌制剂的制作工艺和生产设备较为简单,原材料来源广泛,生产成本较低;(6)可以在遗传学水平上通过分子生物学技术对野生菌株加以改造,获得能够满足人们需要的更好的工程菌。目前,苏云金芽孢杆菌制剂是世界上应用最为广泛的微生物农药。
技术实现思路
本专利技术的目的在于分离得到一株对黄曲条跳甲具有高毒力的苏云金芽孢杆菌,并由该菌制备了一种杀黄曲条跳甲的苏云金杆菌制剂,通过田间试验证明其防治黄曲条跳甲的良好效果,最高防效达到了80%以上。本专利技术的技术方案如下所述:申请人从中国甘肃省兰州市分离筛选得到一株对黄曲条跳甲具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)菌株HAN055,申请人将该菌株命名为苏云金芽孢杆菌HAN055,BacillusthuringiensisHAN055,于2015年10月16日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏,保藏编号为CCTCCNO:M2015608。苏云金芽孢杆菌HAN055菌株具有下列明显特征:(1)该菌株对黄曲条跳甲具有高毒力。(2)由本专利技术的菌株苏云金芽孢杆菌HAN055菌株制备的制剂(命名为WP-HAN055)在防治黄曲条跳甲病虫害上取得显著效果。苏云金芽孢杆菌HAN055菌株的菌学特征如下:该菌营养体为短杆状,具周生鞭毛或无鞭毛,大小为1.2-1.8μmx3.0-5.4μm,革兰氏染色呈阳性反应,芽孢为椭圆形,大小约为0.8μmx2.0μm,在芽孢成熟后产生菱形伴胞晶体。在LB培养基上28℃培养,镜检观察,菌落呈乳白色,蜡状,近似圆形,边缘不整齐。最适生长温度为28℃,pH6-8均生长良好,最适生长pH为7.0-7.2。按照常规甘油管保藏方法保藏该菌株。更详细的技术方案参见实施例部分的描述。附图说明序列表SEQIDNO:1是本专利技术分离苏云金芽孢杆菌的16SrRNA基因序列。图1:是本专利技术的苏云金芽孢杆菌HAN055的16SrRNA基因系统发生树,附图标记说明:图示各节点处为不同的蜡状芽孢杆菌群菌株,包括苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。图2:是本专利技术苏云金杆菌HAN055及杀虫蛋白晶体的显微照片。图3:是本专利技术菌株HAN055的杀虫晶体蛋白的SDS-PAGE检测结果。附图标记说明:图中:M为蛋白质maker,P为HAN055的杀虫晶体蛋白。具体实施方案以下叙述是根据本专利技术实施方案的实施例。应该说明的是,本专利技术的实施例对于本专利技术只有说明作用,没有限制作用。本专利技术中所涉及的其他各项实验操作,均为本领域的常规技术,文中没有特别说明的部分,本领域的普通技术人员可以参照本专利技术申请日前的各种常用工具书、科技文献或相关说明书、手册等加以实施。实施例1苏云金芽孢杆菌的分离、鉴定及其杀虫晶体蛋白的活性检测1、苏云金芽孢杆菌的分离土样的采集:申请人2010年8月在中国甘肃省兰州市采集距地表面0-本文档来自技高网
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防治黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌及制剂与应用

【技术保护点】
一株对黄曲条跳甲具有毒杀活性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)HAN055,保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M 2015608。

【技术特征摘要】
1.一株对黄曲条跳甲具有毒杀活性的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)HAN055,保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCCNO:M2015608。2.一种杀黄曲条跳甲的苏云金芽孢杆菌制剂,其特征在于,该制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员:孙明聂相涛张争名彭东海阮丽芳
申请(专利权)人:华中农业大学
类型:发明
国别省市:湖北,42

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