【技术实现步骤摘要】
一种兰瑞肽的固相合成方法
本专利技术属于多肽药物制备方法
,特别涉及一种兰瑞肽的固相合成方法。
技术介绍
兰瑞肽,英文名称为Lanreotide,商品名称为索马杜林,是由法国益普生集团开发的一种长效、缓释的生长抑素八肽类似物,对生长激素、促甲状腺激素、胰岛素以及胰高血糖素素产生抑制作用。兰瑞肽对外周生长抑素受体具有很好的亲和力,其活性强于天然生长抑素,而且作用时间久,是一种长效注射剂药物,每月只需注射两次。早期主要用于对手术或放疗无效的肢端肥大症和生长激素型垂体瘤患者的治疗,随后被FDA批准用于无法切除、中高度分化或转移性胃肠胰神经内分泌肿瘤的治疗。兰瑞肽是由8个氨基酸残基组成、C端酰胺化的多肽,第2位和第7位的半胱氨酸巯基形成1对二硫键,CAS号为108736-35-2,分子式为C54H69N11O10S2,分子量为1096.32g/mol,其结构如下:专利CN104497130A公开了一种采用2+6片段固相合成技术合成兰瑞肽的制备方法。首先采用液相合成方法合成兰瑞肽N端的二肽片段、采用固相合成方法合成兰瑞肽C端6个氨基酸的肽树脂,随后将二肽片段与肽树脂缩合得到兰瑞肽肽树脂,最后将肽树脂裂解得到粗肽,并在液相完成二硫键的氧化。然而该方法操作步骤繁琐,N端二肽片段的液相合成方法反应步骤多、反应时间长;同时在液相中进行二硫键的氧化,需要将粗肽配置成极低的浓度(2~3mg/ml),需要使用大量溶剂,导致后续分离纯化的难度增加,同时产生大量废液。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术的不足,依据兰瑞肽自身结构特点,提供一种反应步骤简单、反应时 ...
【技术保护点】
一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,包括步骤如下:1)缩合反应:在缩合体系中,以Fmoc氨基树脂为固相合成的载体,树脂经溶胀、脱去Fmoc保护基和洗涤后,依次从C端至N端缩合连接8个经活化的、含有侧链保护基的Fmoc‑氨基酸,得N端氨基含有Fmoc保护基的全保护线性肽树脂Fmoc‑D‑2‑Nal‑Cys(Trt)‑Tyr(tBu)‑D‑Trp(Boc)‑Lys(Boc)‑Val‑Cys(Trt)‑Thr(OtBu)‑氨基树脂;所述依次缩合的保护氨基酸顺序为:Fmoc‑Thr(OtBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑D‑Trp(Boc)‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑D‑2‑Nal‑OH;2)对步骤1)制得的全保护线性肽树脂进行环化,得环肽树脂;3)脱除步骤2)制得的环肽树脂N端D‑2‑Nal氨基上的Fmoc保护基,得N端氨基裸露的环肽树脂;4)脱除步骤3)制得的N端氨基裸露的环肽树脂的侧链保护基,并切割树脂,得兰瑞肽粗肽;5)对步骤4)制得的兰瑞肽粗肽 ...
【技术特征摘要】
1.一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,包括步骤如下:1)缩合反应:在缩合体系中,以Fmoc氨基树脂为固相合成的载体,树脂经溶胀、脱去Fmoc保护基和洗涤后,依次从C端至N端缩合连接8个经活化的、含有侧链保护基的Fmoc-氨基酸,得N端氨基含有Fmoc保护基的全保护线性肽树脂Fmoc-D-2-Nal-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Val-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-氨基树脂;所述依次缩合的保护氨基酸顺序为:Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-2-Nal-OH;2)对步骤1)制得的全保护线性肽树脂进行环化,得环肽树脂;3)脱除步骤2)制得的环肽树脂N端D-2-Nal氨基上的Fmoc保护基,得N端氨基裸露的环肽树脂;4)脱除步骤3)制得的N端氨基裸露的环肽树脂的侧链保护基,并切割树脂,得兰瑞肽粗肽;5)对步骤4)制得的兰瑞肽粗肽进行纯化、冻干,得兰瑞肽纯品。2.根据权利要求1所述的一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,步骤1)中所述氨基树脂为:RinkAmideAM树脂、RinkAmide树脂、RinkAmideMBHA树脂或Sieber树脂其中任何一种;所述树脂替代度为0.2~1.4mmol/g。3.根据权利要求1所述的一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,步骤1)中,所述缩合体系为:A+D或A+B+C,其中A为HOBT或HOAT,B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种,C为DIEA或TMP,D为DIC。4.根据权利要求1所述的一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,步骤2)中,所述环化方法为:加入I2含量为8eq的1,4-二氧六环溶液,在10~30℃条件下反应1~5h后,分别用四氯化碳和DMF洗涤树脂。5.根据权利要求1所述的一种兰瑞肽的固相合成方法,其特征在于,步骤3)中脱Fmoc的方法为:加入体积分数为20%PIP-DMF溶液,在10~30℃条件下进行两次脱Fmoc保护:第一次脱Fmoc保护和第二次脱Fmoc...
【专利技术属性】
技术研发人员:姬胜利,殷金岗,王广胜,陈明鲁,
申请(专利权)人:润辉生物技术威海有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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