一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法技术

本发明专利技术涉及一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法。本方法建立在对布鲁氏菌IgG和IgM抗体亚型检测方法的基础上，构建易感动物模型，获得我国常用布鲁氏菌弱毒疫苗(猪种S2株和牛种A19株)疫苗免疫及标准强毒株(牛种2308株)作为自然感染的抗体消长规律。并根据自然感染组与疫苗免疫组的特点，确定5种状态，建立了区分自然感染与疫苗免疫的方法；并对本方法进行验证，确认其可靠性。本法只需对一个样本同时检测其IgG和IgM就可对自然感染和疫苗免疫进行区分，方法简单方便、准确性高、操作时间短和价格低廉，适用于各类实验室操作，满足规模检测的要求，本方法填补了国内外在此领域的技术空白，为布病防控提供了技术支撑。

A method to distinguish vaccine and natural infection of Brucella abortus vaccine

The invention relates to a method for distinguishing the immunity and natural infection state of Brucella vaccine. Based on the detection of IgG and IgM antibody subtypes of Brucella, this method builds a susceptible animal model, and obtains the immunization of the common Brucella vaccine (S2 and A19 strain) and the standard virulent strain (2308 strains of cattle) as the anti body growth law of natural infection. According to the characteristics of the natural infection group and the vaccine immunization group, the 5 states were determined, and the methods to distinguish the natural infection and the vaccine immunization were established, and the method was verified and the reliability was confirmed. This method can be used to distinguish natural infection and vaccine immune from a sample of IgG and IgM at the same time. The method is simple, convenient, high accuracy, short operation time and low price. It is suitable for all kinds of laboratory operations and meets the requirements of scale detection. This method fills the technical gap between domestic and abroad in this field. The prevention and control of disease provides technical support.

【技术实现步骤摘要】
一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法
本专利技术涉及一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法——属生物制品检测
技术背景布鲁氏菌病作为重要人畜共患病之一，严重威胁公共安全和养殖业健康发展。对于家畜来说，布病的主要症状有波状热、体重降低、消瘦、产奶性能下降，对于怀孕母畜则引起流产、死胎、久配不孕等症状，给国际贸易带来严重威胁，也影响相关动物制品的出口，被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病，我国也将其列为二类传染病之一。除少数发达国家外，布病在世界170多个国家均有发生，其中以中亚、中东等流行情况最为严重。我国布病曾在上世纪60～80年代得到有效控制，但近年来，动物布病的发病数量和群体发病率却呈现逐年升高的趋势。作为一种严重影响公共卫生安全和养殖业健康发展的人畜共患病，预防和控制布病显得迫在眉睫。布病已被纳入《国家中长期动物疫病防治规划(2012～2020年)》。在消灭布病的国家或地区，通常采取疫苗免疫和检疫扑杀相结合的措施以达到净化群体的目的。疫苗免疫是在动物上最为有效控制和预防布病的措施之一。牛种布鲁氏菌S19株和猪种布鲁氏菌S2株对于我国布病的防控起到了重要作用，尤其是S2株，其有我国在上世纪60年代开发，对各种布病易感动物均具有良好的保护效果，且毒力较低，免疫后产生的副反应和对公共卫生的安全威胁较低。但是上述两种疫苗均为光滑型菌株，其产生的抗体与自然感染难以区分，给疫苗的使用带来了极大困扰。
技术实现思路
本专利技术的目的在于建立了一种能够区分动物牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染的技术方法，本专利技术通过前期建立的针对牛布鲁氏菌IgG和IgM亚型抗体的间接ELISA方法(CN05067812A和CN06771182A)，分别对皮下接种免疫牛布鲁氏菌活疫苗(A19株)、口服免疫牛布鲁氏菌活疫苗(S2株)，以及注射牛布鲁氏菌2308株强毒活菌人工()感染的成年牛血液中的IgG和IgM亚型进行持续追踪其消长规律，确定不同状态(免疫/感染)临界值，以建立牛布鲁氏菌免疫/自然感染的抗体亚型消长模型，并通过抗体亚型对布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染进行鉴别诊断提供技术方法，满足我国布病流行病学调查的需要。本专利技术的技术方案1.本专利技术所述一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，在于通过分析牛体内针对布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平，确定被检测牛的感染/免疫状态，实现对牛布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染的区分，满足布鲁氏菌病(布病)流行病学调查，本方法为非疾病诊断性的。2.本专利技术所述一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，还在于布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平的检测，是基于特定的牛布鲁氏菌IgG抗体检测试剂盒和牛布鲁氏菌IgM抗体检测试剂盒进行的。3.本专利技术所述的一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，还在于确定被检测牛的感染/免疫状态是通过构建布鲁氏菌疫苗免疫和模拟布鲁氏菌自然感染的牛体内IgG和IgM消长规律，并划分判定范围来实现的，即判断被检动物的感染/免疫状态的指标定为：当血清样本的P％值≥20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阳性，当血清样本的P％值＜20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阴性；当血清样本的P％值≥85％时，为牛布鲁氏菌IgM亚型抗体阳性，当血清样本的P％值＜85％时，为牛布鲁氏菌IgM亚型抗体阴性。4.本专利技术所述的一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，还在于其中判断被检动物的感染/免疫状态的指标是建立是来自以下的试验结果：当检验结果为：IgG，S/P≥60％；IgM，S/P≤85％时，标识为状态1，为自然感染；检验结果为IgG，S/P≥60％；IgM，S/P≥85％，标识为状态2，为自然感染或A19免疫初期；检验结果为IgG，S/P介于20％～60％；IgM，S/P≥85％，标识为状态3，为A19免疫；检验结果为IgG，S/P介于20％～60％；IgM，S/P≤85％，标识为状态4，为A19免疫后期或感染后期；检验结果为：IgG，S/P＜20％；IgM，S/P≥85％，标识为状态5，为S2免疫或急性感染。5.本专利技术所述一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，其中的数据处理适合使用计算机处理完成。本专利技术具体实施方式本专利技术分别用针对IgG和IgM的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒(CN05067812A和CN06771182A)测定抗体效价，其方法见附注1。1.本申请建立了布鲁氏菌病活疫苗(A19株)(以下间称：A19疫苗)免疫牛体内的抗体变化规律，选择布病阴性牛50头以上，按A19株疫苗的使用说明进行注射免疫，并在不同的时间点采集血样，分离血清。分别用针对IgG和IgM的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒(CN05067812A和CN06771182A)测定抗体效价，记录各阶段测定的P值：本专利技术分别用A19疫苗注射免疫92头布鲁氏菌抗体阴性的成年牛，并于免疫后7天、15天、30天、60天、90天、120天和150天分别采集血清样本进行抗体检测，以描绘A19疫苗免疫后，免疫牛体内IgG和IgM的变化规律。研究结果发现(见图1)，A19疫苗免疫后第7天，其体内IgG和IgM抗体就开始出现，并同时在第15天达到高峰，之后开始逐步下降。对于IgG，在免疫15天后，A19疫苗免疫组抗体水平明显下降，到90天时IgG的平均数已接近临界值，其群体内不同时间段阳性率分别为62.64％(第7天)、84.78％(第15天)、78.26％(第30天)、75％(第60天)、36.95％(第90天)、27.17％(第120天)和14.22％(第150天)。不同时间段抗体水平存在着统计学差异，其中第60天与第90天之间差异显著(p<0.01)，说明动物在免疫60天之后，其体内IgG的含量明显下降。与IgG相比，A19疫苗免疫组其IgM的变化更为明显，免疫15天后IgM抗体水平达到高峰，之后快速下降，在第60天时，其平均值已接近临界值，到120天后则完全消失。不同时间段内，IgM的含量变化十分明显，第15天与第30天，第30天与第60天，第90天与第120天之间，抗体效价均有显著性差异(p<0.01)。根据群体在免疫后不同时期抗体水平的算术平均数绘制抗体趋势规律图(见图2)，图中可以发现，A19免疫后15天，其IgG水平高于临界值，之后逐步下降，到90天时基本低于临界值；IgM第15天达到高峰，其后持续下降，60天后，低于临界值。2.本申请建立了布鲁氏菌病活疫苗(S2株)(以下间称：S2疫苗)免疫牛体内的抗体变化规律S2疫苗是我国使用最为广泛的布鲁氏菌活疫苗，研究其不同亚型抗体的变化趋势，寻找区分不同免疫状态的重要标识更为具有意义。选择布病阴性牛50头以上，按S2疫苗的使用说明进行口服免疫，并在不同的时间点采集血样，分离血清。分别用针对IgG和IgM的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒(CN05067812A和CN06771182A)测定抗体效价，记录各阶段测定的P值：与A19相比，S2疫苗对牛的推荐免疫途径为口服，其免疫组动物体内抗体效价整体呈现效价低、下降快的特点(见图3)。具体来说，大部分试验牛体内Ig本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，其特征在于通过分析牛体内针对布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平，确定被检测牛的感染/免疫状态，实现对牛布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染的区分，满足布鲁氏菌病流行病学调查，本方法为非疾病诊断性的。

【技术特征摘要】
1.一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，其特征在于通过分析牛体内针对布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平，确定被检测牛的感染/免疫状态，实现对牛布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染的区分，满足布鲁氏菌病流行病学调查，本方法为非疾病诊断性的。2.权利要求1所述的一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，其特征在于布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平的检测，是基于特定的牛布鲁氏菌IgG抗体检测试剂盒和牛布鲁氏菌IgM抗体检测试剂盒进行的。3.权利要求1所述的一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，其特征在于确定被检测牛的感染/免疫状态是通过构建布鲁氏菌疫苗免疫和模拟布鲁氏菌自然感染的牛体内IgG和IgM消长规律，并划分判定范围来实现的，即判断被检动物的感染/免疫状态的指标定为：当血清样本的P％值≥20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阳性，当血清样本的P％值＜20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阴性；当血清样本的P％值≥8...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁家波，冯宇，蒋卉，朱良全，彭小薇，许冠龙，王芳，范学政，秦玉明，王楠，毛开荣，徐磊，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京,11