制备治疗用蛋白质制剂的方法和由这种方法生产的抗体制剂技术

本发明专利技术涉及制备包含治疗用蛋白质的蛋白质制剂的方法，所述方法包括步骤：提供包含所述蛋白质的溶液；由第一超滤步骤浓缩所述溶液中的所述蛋白质；用包含至少一种第一赋形剂的渗滤缓冲液渗滤所述溶液，由此获得包含所述蛋白质和所述第一赋形剂的保留物；由第二超滤步骤进一步浓缩保留物中的所述蛋白质；和添加至少一种最终赋形剂，由此获得具有所需蛋白质浓度的蛋白质制剂。根据本发明专利技术，所述方法进一步包括在第二超滤步骤之前，将第二赋形剂添加到从渗滤步骤获得的保留物中。本发明专利技术还涉及通过前述方法生产的抗体制剂。

Method for preparing therapeutic protein preparation and antibody preparation produced by this method

The present invention relates to a method for preparing a protein preparation containing a therapeutic protein. The method comprises the steps of providing a solution containing the protein, concentrating the protein in the solution by the first ultrafiltration step, and percolating the solution with the percolation buffer containing at least one first excipient, thereby obtaining the inclusion of the contained solution. The protein and the reservation of the first excipient; further concentrating the protein in the reservation by the second ultrafiltration process; and adding at least one final excipient, thereby obtaining a protein preparation with the required protein concentration. According to the invention, the method further includes adding second excipients to the retention obtained from the infiltration step before the second ultrafiltration step. The invention also relates to an antibody preparation produced by the aforementioned method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备治疗用蛋白质制剂的方法和由这种方法生产的抗体制剂
本专利技术涉及制备包含赋形剂和至少一种治疗用蛋白质的蛋白质制剂的方法。本专利技术在准备用作治疗用途的抗体制剂领域中特别重要，并且也涉及由所述方法生产的抗体制剂。专利技术背景本专利技术更具体地涉及按次序包括以下的方法：•提供包含所述蛋白质的溶液；•由第一超滤步骤浓缩所述溶液中的所述蛋白质；•用包含至少一种第一赋形剂的渗滤缓冲液渗滤如此获得的溶液，由此获得包含所述蛋白质和所述第一赋形剂的保留物（retentate）；•由在超滤设备中的第二超滤步骤进一步浓缩保留物中的所述蛋白质；•添加至少一种最终赋形剂，由此获得具有所需蛋白质浓度并包含所述第一和最终赋形剂的蛋白质制剂。通常，用于治疗用抗体的最终蛋白质制剂至少包含在渗滤步骤期间添加的氨基酸，例如组氨酸，和充当稳定剂的糖，例如海藻糖。海藻糖通常在最终添加步骤中与其他赋形剂一起添加。在应用于治疗用抗体的常规方法中，上述步骤用在由许多纯化步骤纯化的情况下的蛋白质溶液进行，所述许多纯化步骤通常包括病毒保留过滤作为最后的纯化步骤。通过第一超滤步骤从约5至20g/l的浓度至约40至100g/l的浓度（取决于蛋白质）浓缩蛋白质溶液（或“产物”）。然后将浓缩产物在渗滤缓冲液例如组氨酸中渗滤。在一些情况下，渗滤缓冲液可以是另一种标准缓冲液，如乙酸盐、三羟甲基氨基甲烷或磷酸盐。基于最终蛋白质制剂以及由于唐南（Donnan）效应而需要的任何补偿来选择渗滤缓冲液。唐南效应在浓缩产物时发生并导致排除某些带电荷的缓冲种类，例如，组氨酸。因此通常将渗滤缓冲液调整至比对于蛋白质制剂规定的更高的缓冲液浓度和更低的pH。一旦渗滤完成，产物就通过第二超滤步骤浓缩至高于最终蛋白质制剂所需蛋白质浓度的约50％。然后将产物从超滤系统中取出并漂洗系统以回收额外的产物。如果最终浓度比蛋白质制剂中的所需浓度高不止50％，那么可在不过度稀释产物的情况下将所有漂洗液（rinse）加回到产物中以使回收达到最大。然后以浓缩溶液的形式添加赋形剂（糖、表面活性剂、螯合剂等），通常稀释比为约4，这意味着将1单位体积的浓缩赋形剂溶液添加到3个单位体积的产物中。稀释比4基于赋形剂溶液中糖组分的最大溶解度，其通常是限制因素。如有必要，那么然后将产物用制剂缓冲液（formulationbuffer）进一步稀释以调整至最终所需浓度。因此，当期望在最终制剂中获得高度浓缩的蛋白质时，这种常规方法可能不适用，并且当蛋白质具有特别高的粘度时甚至更不适用。例如，在治疗用抗体制剂具有150g/l的所需最终浓度的情况下，分子的粘度阻碍浓缩至比所需最终浓度高50％的目标值。本专利技术的目的是提供一种制备蛋白质制剂的方法，其可以应用于高粘性和高度浓缩的蛋白质。本专利技术的另一个目的是该方法可以在不消极影响制造方法的总得率并且不由于某些赋形剂的过量浪费而招致额外成本的情况下在制造规模上实施。特别地，目的是将糖组分的使用保持在与常规方法类似的水平，所述糖组分是特别昂贵的。保持蛋白质在该方法的所有步骤中的稳定性并保护蛋白质免于聚集是更进一步的目的。概述根据本专利技术的第一方面，提供了上述类型的方法，其进一步包括在第二超滤步骤之前，将第二赋形剂添加到由渗滤步骤获得的保留物中。通过将第二赋形剂，特别是海藻糖（或更一般的糖）的添加移动到渗滤后，剩余的赋形剂可以在后来的步骤中以更高的浓度添加，从而产生产物的更低稀释度。这本身又意味着与常规方法的约50％的值相比，可以使最大所需浓度仅仅为高于最终所需浓度的约10％（在一些情况下在5至15％之间）。即使在分子粘度更高的情况下，用标准超滤设备也可获得这个10％的值。这也允许从漂洗液回收产物，并从而允许获得超滤/渗滤方法的90％得率。同样，在最终浓缩前添加第二赋形剂（糖）保护蛋白质免于聚集。根据本专利技术的优选实施方案：-所述方法在步骤（e）之后且在步骤（f）之前进一步包括用漂洗缓冲液漂洗超滤设备，由此增强蛋白质的回收；-所述漂洗缓冲液包含浓度基本上分别等于蛋白质制剂中第一和第二赋形剂浓度的第一和第二赋形剂；-所述第一赋形剂是氨基酸，优选组氨酸；-所述蛋白质制剂中的第一赋形剂具有16-24mM，优选17-23mM，最优选约20mM的浓度；-所述第二赋形剂是糖，优选二糖；-所述最终赋形剂包括表面活性剂，优选聚山梨醇酯80；-所述最终赋形剂包括螯合剂，优选EDTA；-所述蛋白质制剂具有110-165g/l的蛋白质浓度；-所述蛋白质是抗体。在第一优选实施方案中：-所述抗体是抗-PCSK9（蛋白质原转变酶枯草杆菌蛋白酶Kexin9型（ProproteinConvertaseSubtilisinKexintype9））抗体；-所述抗-PCSK9抗体选自：博科昔单抗（bococizumab）、依伏库单抗（evolocumab）（REPATHATM）、阿利库单抗（alirocumab）（PRALUENTTM）、REGN728、31H4、11F1、12H11、8A1、8A3、3C4、300N、1D05、LGT209、RG7652和LY3015014；-所述抗-PCSK9抗体包含重链可变区（VH），所述重链可变区（VH）包含SEQIDNO：1中所示氨基酸序列的互补性决定区一CDR1、CDR2和CDR3；和轻链可变区（VL），所述轻链可变区（VL）包含SEQIDNO：2中所示氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；或者，所述抗-PCSK9抗体包含具有SEQIDNO：3、4或5中所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQIDNO：6或7中所示氨基酸序列的VHCDR2，VHCDR3具有SEQIDNO：8中所示氨基酸序列的VHCDR3，具有SEQIDNO：9中所示氨基酸序列的VLCDR1，具有SEQIDNO：10中所示氨基酸序列的VLCDR2和具有SEQIDNO：11中所示氨基酸序列的VLCDR3；-所述蛋白质制剂具有135-165g/l，优选142-158g/l，最优选约150g/l的蛋白质浓度；-所述蛋白质制剂中的第二赋形剂是浓度为67.2-100.8g/l，优选71.4-96.6g/l，最优选约84g/l的海藻糖；-所述最终赋形剂包括聚山梨醇酯80，其在蛋白质制剂中的浓度为0.16-0.24g/l，优选为0.17-0.23g/l，最优选为约0.2g/l；-所述最终赋形剂包括EDTA，其在蛋白质制剂中的浓度为0.04至0.06g/l，优选0.0425至0.0575g/l，最优选约0.05g/l；-所述蛋白质制剂具有5.2-5.8，优选约5.5的pH；-所述步骤（a）中提供的溶液具有5-20g/l的蛋白质浓度；-通过第一超滤步骤将所述蛋白质浓缩至80-120g/l，优选至90-110g/l，且最优选至约100g/l；-通过第二超滤步骤将所述蛋白质浓缩至143-173g/l，优选至150-166g/l，且最优选至约158g/l；-所述渗滤缓冲液中的第一赋形剂的浓度高于所述蛋白质制剂中第一赋形剂的浓度，所述渗滤缓冲液中第一赋形剂的浓度优选为29.75-40.25mM，最优选约35mM；-所述渗滤缓冲液具有5.1-5.5，优选约5.3的pH；-将所述第二赋形剂添加到从渗滤步骤获得的保留物中是通过将第一添加剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备包含赋形剂和至少一种治疗用蛋白质的蛋白质制剂的方法，所述方法包括按次序的步骤：（a）提供包含所述蛋白质的溶液；（b）由第一超滤步骤浓缩所述溶液中的所述蛋白质；（c）用包含至少一种第一赋形剂的渗滤缓冲液渗滤如此获得的溶液，由此获得包含所述蛋白质和所述第一赋形剂的保留物；（d）将第二赋形剂添加到由渗滤步骤获得的保留物中；（e）由在超滤设备中的第二超滤步骤进一步浓缩保留物中的所述蛋白质；和（f）添加至少一种最终赋形剂，由此获得具有所需蛋白质浓度并包含所述第一和最终赋形剂的蛋白质制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.22 US 62/2220671.制备包含赋形剂和至少一种治疗用蛋白质的蛋白质制剂的方法，所述方法包括按次序的步骤：（a）提供包含所述蛋白质的溶液；（b）由第一超滤步骤浓缩所述溶液中的所述蛋白质；（c）用包含至少一种第一赋形剂的渗滤缓冲液渗滤如此获得的溶液，由此获得包含所述蛋白质和所述第一赋形剂的保留物；（d）将第二赋形剂添加到由渗滤步骤获得的保留物中；（e）由在超滤设备中的第二超滤步骤进一步浓缩保留物中的所述蛋白质；和（f）添加至少一种最终赋形剂，由此获得具有所需蛋白质浓度并包含所述第一和最终赋形剂的蛋白质制剂。2.权利要求1的方法，其在步骤（e）之后且在步骤（f）之前进一步包括用漂洗缓冲液漂洗超滤设备，由此增强蛋白质的回收。3.权利要求2的方法，其中所述漂洗缓冲液包含浓度基本上分别等于蛋白质制剂中第一和第二赋形剂浓度的第一和第二赋形剂。4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述第一赋形剂是氨基酸，优选组氨酸。5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述蛋白质制剂中的第一赋形剂具有16-24mM，优选17-23mM，最优选约20mM的浓度。6.权利要求1-5任一项的方法，其中所述第二赋形剂是糖，优选二糖。7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述最终赋形剂包括表面活性剂，优选聚山梨醇酯80。8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述最终赋形剂包括螯合剂，优选EDTA。9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述蛋白质制剂具有110-165g/l的蛋白质浓度。10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述蛋白质是抗体。11.权利要求10的方法，其中所述抗体是抗-PCSK9（蛋白质原转变酶枯草杆菌蛋白酶Kexin9型）抗体。12.权利要求11的方法，其中所述抗-PCSK9抗体选自：博科昔单抗、依伏库单抗（REPATHATM）、阿利库单抗（PRALUENTTM）、REGN728、31H4、11F1、12H11、8A1、8A3、3C4、300N、1D05、LGT209、RG7652和LY3015014。13.权利要求11或12的方法，其中所述抗-PCSK9抗体包含重链可变区（VH），所述重链可变区（VH）包含SEQIDNO：1中所示氨基酸序列的互补性决定区一CDR1、CDR2和CDR3；和轻链可变区（VL），所述轻链可变区（VL）包含SEQIDNO：2中所示氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。14.权利要求11或12的方法，其中所述抗-PCSK9抗体包含具有SEQIDNO：3、4或5中所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQIDNO：6或7中所示氨基酸序列的VHCDR2，VHCDR3具有SEQIDNO：8中所示氨基酸序列的VHCDR3，具有SEQIDNO：9中所示氨基酸序列的VLCDR1，具有SEQIDNO：10中所示氨基酸序列的VLCDR2和具有SEQIDNO：11中所示氨基酸序列的VLCDR3。15.权利要求11-14任一项的方法，其中所述蛋白质制剂具有135-165g/l，优选142-158g/l，最优选约150g/l的蛋白质浓度。16.权利要求11-15任一项的方法，其中所述蛋白质制剂中的第二赋形剂是浓度为67.2-100.8g/l，优选71.4-96.6g/l，最优选约84g/l的海藻糖。17.权利要求11-16任一项的方法，其中所述最终赋形剂包括聚山梨醇酯80，其在蛋白质制剂中的浓度为0.16-0.24g/l，优选为0.17-0.23g/l，最优选为约0.2g/l。18.权利要求11-17任一项的方法，其中所述最终赋形剂包括EDTA，其在蛋白质制剂中的浓度为0.04至0.06g/l，优选0.0425至0.0575g/l，最优选约0.05g/l。19.权利要求11-18任一项的方法，其中所述蛋白质制剂具有5.2-5.8，优选约5.5的pH。20.权利要求11-19任一项的方法，其中所述步骤（a）中提供的溶液具有5-20g/l的蛋白质浓度。21.权利要求11-20任一项的方法，其中通过第一超滤步骤将所述蛋白质浓缩至80-120g/l，优选至90-110g/l，且最优选至约100g/l。22.权利要求11-21任一项的方法，其中通过第二超滤步骤将所述蛋白质浓缩至143-173g/l，优选至150-166g/l，且最优选至约158g/l。23.权利要求11-22任一项的方法，其中所述渗滤缓冲液中的第一赋形剂的浓度高于所述蛋白质制剂中第一赋形剂的浓度，所述渗滤缓冲液中第一赋形剂的浓度优选为29.75-40.25mM，最优选约35mM。24.权利要求11-23任一项的方法，其中所述渗滤缓冲液具有5.1-5.5，优选约5.3的pH。25.权利要求11-24任一项的方法，其中将所述第二赋形剂添加到从渗滤步骤获得的保留物中是通过将第一添加剂溶液添加到保留物中来实现的，所述第一添加剂溶液包含浓度为340-460g/l，优选380-420g/l，最优选约400g/l的第二赋形剂。26.权利要求25的方法，其中所述第一添加剂溶液包含第一赋形剂，其浓度低于所述渗滤缓冲液中第一赋形剂的浓度并高于所述蛋白质制剂中第一赋形剂的浓度，所述第一添加剂溶液中第一赋形剂的浓度为优选25.5-34.5mM，最优选约30mM。27.权利要求25或26的方法，其中所述第一添加剂溶液还包含最终赋形剂。28.权利要求27的方法，其中所述第一添加剂溶液包含约...

【专利技术属性】
技术研发人员：JK格林，BX陈，DP拉卡斯，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：美国,US