共价连接的抗原-抗体缀合物制造技术

本文中报道了一种包含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体的缀合物，其中共价键在抗原和抗体的CDR2中的氨基酸残基之间形成；报道了一种包含在重链CDR2中的氨基酸位置53处(根据Kabat)是半胱氨酸残基的抗体；及其用途。

Covalent binding antigen antibody conjugate

This article reports a conjugate of an antibody containing antigen and specific binding to the antigen, in which the covalent bond is formed between the amino acid residues in the antigen and the CDR2 of the antibody; an antibody against the amino acid position of the amino acid at 53 (according to Kabat) in the heavy chain CDR2 and its use are reported.

【技术实现步骤摘要】
共价连接的抗原-抗体缀合物本申请是中国专利申请201380034794.7的分案申请，原申请的申请日是2013年7月4日，专利技术名称是“共价连接的抗原-抗体缀合物”。本文中报道了包含抗原和抗体的复合物，其中该复合物的组分通过单键彼此共价连接。还报道了用于产生该共价复合物的方法及其用途。专利技术背景多肽治疗性应用的主要瓶颈是它们的溶解度、体内稳定性有限、血清半寿期短和从血流快速清除。报道了不同方案以解决这些缺点。然而，这些技术均未提供在不遭遇免疫原性风险或生物学活性潜在丧失的情况下能够调节药物代谢动力学(PK)的稳健和通用平台。一个改善治疗性多肽的PK/稳定性和生物物理特性的方法是使它们与使多肽稳定化、使其维持溶解状态并延长其半寿期的实体融合。这类实体的例子是人血清白蛋白或人免疫球蛋白Fc区。这种方法适用于由天然存在的氨基酸残基组成并且在不丧失其生物学活性的情况下在其C端或N端耐受修饰的许多线形多肽。呈环状、U型、含有非天然氨基酸残基或额外修饰的多肽不能作为融合多肽重组产生。然而，这类多肽可能是治疗性应用所需的选择，因为在蛋白酶稳定性、活性和特异性方面而言，它们经常优于‘正规的’线形肽。一个改善治疗性多肽的PK/稳定性和生物物理特性的方法(其也可以适用于呈环状、U型或含有非天然结构物的那些多肽)是与聚合物化学或酶促缀合，例如通过PEG化或HES化(hesylation)。但是，这类修饰经常导致多肽的生物学活性显著降低并且在某些情况下可能是安全问题或毒性问题的原因。用于稳定治疗性多肽或调节其PK的大多数现有化学偶联技术的主要缺点是它们的复杂性。除了化学偶联步骤外，这些方法还在许多情况下产生多肽衍生物的混合物，所述多肽衍生物以不确定的化学计量和/或在不确定的位置与调节PK的实体连接。另外，目前使用的多肽修饰技术经常导致治疗性多肽的生物学活性剧烈降低或甚至完全丧失。此外，难以预测化学缀合物的药理学特性和/或可能的降解途径。US5,804,371报告了半抗原标记的肽及其在免疫检测方法中的用途。洋地黄毒苷标记的肽(缓激肽)及其对发炎组织中缓激肽的化学发光酶免疫测定法的适用性由DecarieA.等人(Peptides15(1994)511-518)报道。在WO2004/065569中报道了多功能抗体。专利技术概述已经发现通过将半抗原化的化合物共价偶联至抗半抗原抗体，可以实现该化合物的稳定化和PK性能改善。如本文中报道的一个方面是一种含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体的缀合物，其特征在于该抗原和该抗体的CDR2中的氨基酸残基之间的共价键，其中根据Kabat确定CDR2。已经发现一旦用包含用于该抗原和该抗体的CDR2中的氨基酸残基之间形成共价键的功能残基的通用接头衍生化，则任何抗原可以用于如本文中报道的缀合物和方法中。官能团在通用接头中的位置具有下述优点：不必需再工程化在抗体的CDR2中的官能团的合成及其位置。如本文中报道的一个方面是一种含半抗原化化合物和与所述半抗原化化合物的半抗原特异性结合的抗体(抗半抗原抗体)的缀合物，其特征在于该半抗原化化合物和该抗体的CDR2中的氨基酸残基之间的共价键，其中根据Kabat确定CDR2。在全部方面的一个实施方案中，CDR2是重链CDR2。在全部方面的一个实施方案中，半抗原化化合物包含半抗原、任选的接头和有效载荷。在全部方面的一个实施方案中，共价键在半抗原化化合物的接头和抗体的CDR2中的氨基酸残基之间。在全部方面的一个实施方案中，共价键在半抗原化化合物中的官能团和抗体的CDR2中的氨基酸残基之间。在一个实施方案中，官能团处于半抗原化化合物的接头中。在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，共价键在抗体的重链CDR2中的半胱氨酸残基和抗原中的官能团或半抗原化化合物中的官能团之间。在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链CDR2中的半胱氨酸残基在第52位置、或第52a位置、或第52b位置、或第52c位置或第52d位置或第53位置处。在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链CDR2中的半胱氨酸残基在第52a位置、或第52b位置、或第52c位置或第53位置处。在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链CDR2中的半胱氨酸残基在第52b位置或在第53位置处。在全部方面的一个实施方案中，共价键是二硫键。在全部方面的一个实施方案中，该抗体是包含针对第一抗原或第一半抗原的第一结合特异性和针对第二抗原或第二半抗原的第二结合特异性的双特异性抗体，其中第一抗原/半抗原与第二抗原/半抗原不同。在一个实施方案中，该抗体包含针对第一半抗原的第一结合特异性和针对第二半抗原的第二结合特异性。在一个实施方案中，抗体包含针对半抗原的第一结合特异性和针对(非半抗原的)抗原的第二结合特异性。在一个实施方案中，该(非半抗原的)抗原是细胞表面抗原。在一个实施方案中，细胞表面抗原是肿瘤相关抗原。在一个实施方案中，双特异性抗体是全长抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体的一条重链包含穴突变(holemutation)并且相应的另一条链包含隆突突变(knobmutation)。在全部方面的一个实施方案中，有效载荷选自结合部分、标记部分和生物学活性部分。在全部方面的一个实施方案中，该抗体是全长抗体。在全部方面的一个实施方案中，该抗体是人源化或人抗体。在一个实施方案中，该抗体的恒定区是IgG1亚类或IgG4亚类。在一个实施方案中，抗体具有IgG1亚类的恒定区，其中根据Kabat的EU索引编号，所述恒定区在第234和235位置处具有丙氨酸并且在第329位置处具有甘氨酸。在一个实施方案中，抗体具有IgG4类的恒定区，其中根据Kabat的EU索引编号，所述恒定区具有在第228位置处的脯氨酸、在第235位置处的谷氨酸和在第329位置处的甘氨酸。在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，该抗体是抗体的片段。在一个实施方案中，片段是Fab或(Fab)2。在全部方面的一个实施方案中，缀合物确切地包含一个共价键/重链CDR2。在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，该抗原或半抗原化化合物包含反应基团，所述反应基团可以与抗体的CDR2中的半胱氨酸残基的巯基形成共价键。在一个实施方案中，反应基团是巯基、或马来酰亚胺或卤代乙酰基。在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，共价键是二硫键并且且它在不添加氧化还原活性剂的情况下形成。在全部方面的一个实施方案中，缀合物包含治疗部分或可检测部分。在一个实施方案中，治疗部分或可检测部分共价缀合至抗原或半抗原。在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至由5至60个氨基酸残基组成的多肽。在一个实施方案中，该多肽包含10至50个氨基酸残基。在一个实施方案中，该多肽包含12至40个氨基酸残基。在一个实施方案中，该多肽包含12至30个氨基酸残基。在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至可检测标记物。在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至多肽，或缀合至可检测标记物，或经接头缀合至有效载荷。在一个实施方案中，接头是非肽接头。如本文中报道的一个方面是在轻链和/或重链具有在CDR2中的半胱氨酸残基的抗体，其中根据Kabat确定CDR。在一个实施方案中，半胱氨酸残基处于重链CD本文档来自技高网...

【技术保护点】
产生缀合物的方法，所述缀合物包含半抗原和与所述半抗原特异性结合的抗体(抗半抗原抗体)，其中共价键在半抗原和抗体可变区中的氨基酸残基之间，所述方法包括组合包含第一反应基团的抗体和具有第二反应基团的抗原，其中携带第一反应基团的氨基酸残基的α碳原子与接头同其融合的抗原的原子相距约10至11埃。

【技术特征摘要】
2012.07.04 EP 12174947.71.产生缀合物的方法，所述缀合物包含半抗原和与所述半抗原特异性结合的抗体(抗半抗原抗体)，其中共价键在半抗原和抗体可变区中的氨基酸残基之间，所述方法包括组合包含第一反应基团的抗体和具有第二反应基团的抗原，其中携带第一反应基团的氨基酸残基的α碳原子与接头同其融合的抗原的原子相距约10至11埃。2.产生缀合物的方法，所述缀合物包含半抗原和与所述半抗原特异性结合的抗体(抗半抗原抗体)，其中共价键在半抗原和抗体可变区中的氨基酸残基之间，所述方法包括步骤-在溶液中将特异性结合至半抗原并且在CDR2中的一个氨基酸残基处包含反应基团的抗体与包含反应基团的半抗原化化合物组合，其中半抗原化化合物包含有效载荷，如由5至60个氨基酸组成的肽或可检测标记物，和-从溶液回收缀合物。3.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于可变区中的氨基酸残基是在重链CDR2中。4.根据前述权利要求中任一项所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·本兹，U·布林克曼，S·登勒，S·德兹阿德克，G·乔治斯，M·格罗特，A·哈斯，E·霍夫曼，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH