The invention discloses a new animal liver nucleic acid extraction kit and extraction method, which is characterized by PAMAM and ceramic particles, including LB, magnetic bead suspension, washing liquid and eluent. The most significant feature of the invention is to add the fatty polyamines and ceramic particles at the same time, effectively improve the removal of impurities, such as protein and fat, and use the kit to extract the genome of animal liver tissue with high nucleic acid recovery, high purity, complete fragment and no PCR suppressing substance. The whole process of nucleic acid extraction from lysis, purification and collection can be completed by instrument, high automation, high efficiency and safety of the reagents used, and the maximum degree of avoiding the harm to the human body.
【技术实现步骤摘要】
一种新型动物肝脏核酸提取试剂盒及提取方法
本专利技术属于分子生物学
,涉及一种以脂肪多胺型树形分子为特征的新型动物肝脏核酸提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
核酸即(NucleicAcids)是遗传信息的载体,人们对基因进行重组、改造、进化分析、疾病诊断和基因治疗等都必须进行核酸的提取和纯化。因此核酸样品的提取和分离纯化是分子生物学各类实验不可缺少的一个环节。核酸的提取方法对检测过程和检测效果有很大影响。核酸提取是分子生物学的基本方法,也是核酸诊断中最关健的方法,它是下游诊断、分析和制备的前提。随着分子检测技术的广泛应用,核酸提取技术获得长足发展。第一代化学法,如异硫氰酸胍-酚-氯仿提取法、Trizol提取法等操作繁琐、耗时、易污染,对人员技术水平要求较高;第二代为吸附柱提取法操作较简单、提取效率高、提取质量稳定。近年发展起来的第三代磁珠提取法提取效率更高,且可进行仪器自动化批量提取,在有批量提取要求的实验室中广受推崇以核酸为研究对象的生物技术,包括对核酸的提取、克隆、扩增、检测、测序等一系列技术,近年来飞速发展,这些技术目前不仅在研究单位使用,而且在社会生活中多个职能部门已经广泛应用。然而,由于磁珠对蛋白质及脂肪也具有一定的吸附性,导致核酸提取液的纯度不佳,蛋白质和脂肪含量偏高。说明磁珠法核酸提取方法仍然有进一步增强其核酸提取效率的必要性。树形分子是一类三维、高度有序的齐聚物,由三个结构部分组成:中心核,内层支化单元和端基支化单元。树形分子具有像树一样的外表结构,在结构上具有高度的几何对称性,精确的分子结构和大量的官能团,分子内存在空腔且分子质量具有 ...
【技术保护点】
一种新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其特征在于,包括裂解液LB、磁珠悬液、洗涤液、洗脱液;所述裂解液LB包括:盐浓度≥4M的高浓度盐,10~30mg/ml脂肪多胺型树形分子,10~30mg/ml陶瓷颗粒,1~2%Triton X‑100,20~60mM的pH为6.0~8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑Cl),40~80mM乙二胺四乙(EDTA),所述高浓度盐选自下组中的任意一种:盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钾,所述裂解液LB的最终PH为6‑8;所述洗涤液包括:盐浓度≥10mM的盐,10~30mM的pH6.0~8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑Cl),75%乙醇,所述盐选自下组中的任意一种:氯化钾、氯化钠;所述磁珠悬液按每0.3~0.7mg磁珠分散于100μl 20%~80%异丙醇的比例配制。
【技术特征摘要】
1.一种新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其特征在于,包括裂解液LB、磁珠悬液、洗涤液、洗脱液;所述裂解液LB包括:盐浓度≥4M的高浓度盐,10~30mg/ml脂肪多胺型树形分子,10~30mg/ml陶瓷颗粒,1~2%TritonX-100,20~60mM的pH为6.0~8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-Cl),40~80mM乙二胺四乙(EDTA),所述高浓度盐选自下组中的任意一种:盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钾,所述裂解液LB的最终PH为6-8;所述洗涤液包括:盐浓度≥10mM的盐,10~30mM的pH6.0~8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-Cl),75%乙醇,所述盐选自下组中的任意一种:氯化钾、氯化钠;所述磁珠悬液按每0.3~0.7mg磁珠分散于100μl20%~80%异丙醇的比例配制。2.根据权利要求1所述的新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其中洗脱液为:DEPC处理水。3.根据权利要求1所述的新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其中脂肪多胺型树形分子为SG-TETA2。4.根据权利要求1所述的新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其中陶瓷颗粒直径在50-100微米之间。5.根据权利要求1所述的新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其中试剂盒包含:(1)裂解液LB:4.5M异硫氰酸胍,15mg/ml脂肪多胺型树形分子,15mg/ml陶瓷颗粒,1.5%TritonX-100,30mM的pH为6.4的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-Cl),50mM乙二胺四乙酸(EDTA),裂解液LB的最终终PH=6.4;(2)磁珠悬液:0.5mg磁珠分散于100μl20%异丙醇;(3)洗涤液:15mM氯化钠,20mM的pH6.4的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-Cl),75%乙醇;(4)洗脱液:DEPC处理水。6.根据权利要求1所述的新型动物肝脏核酸提取试剂盒,其中所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠,磁珠直径在100-1000nm之间,具有核壳结构,即超顺磁性核心及氧化硅外壳。7.一种高效的提取高纯度动物肝脏组织核酸的方法,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:王科媛,
申请(专利权)人:宁波卡尔新材料科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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