一种高效液相色谱固定相的制备方法技术

本发明专利技术属于高分子化合物的制备技术领域，公开了一种高效液相色谱固定相的制备方法，该液相色谱固定相为白藜芦醇分子印迹聚合物，所述白藜芦醇分子印迹聚合物的制备步骤如下：1)、按照摩尔比为1:6～1:2的量取白藜芦醇、丙烯酰胺溶解于乙腈中，乙腈的质量按照白藜芦醇质量的0.2～0.3倍称取；2)、向步骤1)得到的溶液中加入摩尔比为80:1～100:1的二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，采用可逆加成‑断裂链转移自由基聚合法在55～65℃的水浴中聚合反应23～26h，得到块状聚合物；3)、将所述块状聚合物研磨、烘干、去杂，得到白藜芦醇分子印迹聚合物。本发明专利技术制备的固定相对白藜芦醇成分的分离效果好。

A preparation method of high performance liquid chromatography fixed phase

The invention belongs to the technical field of polymer preparation, and discloses a preparation method of high performance liquid chromatography fixed phase. The liquid chromatographic stationary phase is a resveratrol molecularly imprinted polymer. The preparation steps of the resveratrol molecular imprinted polymer are as follows: 1) resveratrol according to the molar ratio of 1:6 to 1:2, The quality of acetonitrile in acetonitrile was dissolved in acetonitrile, the quality of acetonitrile was obtained by 0.2 to 0.3 times the mass of resveratrol; 2), and to step 1, the molar ratio of 80:1 to 100:1 was added to the diol two methacrylate and azo two isobutanonitrile, and the reversible addition of free radical polymerization was used to polymerized in a water bath at 55~65 C. The reaction was 23 to 26h, and the bulk polymer was obtained; 3) the bulk polymer was grind, dried and mixed to obtain resveratrol molecularly imprinted polymer. The immobilized relative resveratrol component has good separation effect.

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱固定相的制备方法
本专利技术属于高分子化合物的制备
，特别涉及一种高效液相色谱固定相的制备方法。
技术介绍
色谱固定相即为在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。目前，在色谱分析中，通常将分子印迹聚合物做为色谱固定相，因为分子印迹聚合物可模拟仿真生物学中酶和底物之间或者抗体和抗原之间的特异亲和作用而建立起一种特异性的分子识别。在利用分子印迹聚合物进行分子识别的技术中，当印迹分子与聚合物单体接触时会形成多重相互作用的空间位点，这种相互作用包括氢键作用、共价键作用等。这些空穴的尺寸大小与模板分子空间构型相匹配，借助于空穴中各功能位点的多重相互作用就可以用于对特定目标物及其类似物进行选择性识别与富集。George等1993年在《Nature》上发表了茶碱和安定的分子印迹技术，该研究鉴定了分子印迹识别技术的研究基础，极大地促进了该项分离、分析新技术的迅速发展和应用。目前，分子印迹识别技术已经在生物学研究、食品分析、环境分析、天然产物和医学等方面均存在一定的应用，如对葡萄皮或其他物质中白藜芦醇成分的分离提取，即利用白藜芦醇分子印迹聚合物来分离葡萄皮或其他物质中的白藜芦醇成分。然而，现有制备白藜芦醇分子印迹聚合物的方法制备的白藜芦醇分子印迹聚合物相对分子质量分布宽，相对分子质量和结构不可控，并造成一定程度的错配而使聚合物的选择性降低，导致对白藜芦醇的分离效率低，分离效果不理想。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种液相色谱固定相的制备方法，该方法制备出的固定相对白藜芦醇成分的分离效果好。为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种高效液相色谱固定相的制备方法，该液相色谱固定相为白藜芦醇分子印迹聚合物，其特征在于，所述白藜芦醇分子印迹聚合物的制备步骤如下：1)、按照摩尔比为1:6～1:2的量取白藜芦醇、丙烯酰胺溶解于乙腈中，乙腈的质量按照白藜芦醇质量的0.2～0.3倍称取；2)、向步骤1)得到的溶液中加入摩尔比为80:1～100:1的二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，采用可逆加成-断裂链转移自由基聚合法在55～65℃的水浴中聚合反应23～26h，得到块状聚合物；3)、将所述块状聚合物研磨、烘干、去杂，得到白藜芦醇分子印迹聚合物。本专利技术的技术原理及技术效果在于：通过实验及相应分析，专利技术人发现现有白藜芦醇分子印迹聚合物的缺陷是制备过程中自由基聚合的不可控性而导致的，从而导致聚合反应慢引发、快增长、速终止，进而导致了生成的聚合产物相对分子质量分布宽，相对分子质量和结构不可控，并造成一定程度的错配。专利技术人经过研究分析并通过多次实验，发现在特殊的条件参数下，采用可逆加成-断裂链转移自由基聚合法可以解决上述问题。本专利技术的制备方法中，反应速率可以得到控制，使反应更加温和可控，从实验可以看出，本专利技术制备的白藜芦醇分子印迹聚合物，相较于现有技术而言，其表面发生了较大的变化，出现了丰富的孔隙和通道，有着较为致密的形貌和更为均匀膨松的结构，能够提供的结合位点更多，对目标分子的富集量更大。因此，相较于现有技术而言，本专利技术制备出的白藜芦醇分子印迹聚合物做为液相色谱固定相时，对白藜芦醇成分的分离效果更好。进一步，所述步骤3)中的去杂步骤中，先用摩尔比为9:1的甲醇和乙酸的混合液进行索式提取，再用甲醇洗脱。甲醇和乙酸的混合液可去除模板分子及未反应的物质，甲醇洗脱可去除乙酸。进一步，所述可逆加成-断裂链转移自由基聚合法中加入的试剂为二苄基三硫代碳酸酯。专利技术人经过研究合成了二苄基三硫代碳酸酯，并通过实验证明其可以解决本专利技术的技术问题。进一步，所述步骤2)中可逆加成-断裂链转移自由基聚合法的具体操作步骤如下：加入所述二苄基三硫代碳酸酯，使用超声混合均匀，并通氮气后真空密封，再置于55～65℃的水浴中聚合反应23～26h。本方案是基础方案较为优选的方案，其制备出的白藜芦醇分子印迹聚合物对白藜芦醇成分的分离效果好。进一步，所述步骤2)采用如下加料装置进行加料，所述加料装置包括密封盖板，密封盖板上设有排气孔，密封盖板上还贯穿有多根倾斜设置的加料管，多根加料管交汇于一点，并于交汇处连通，每根加料管包括位于交汇处上方的进料段和位于交汇处下方的出料段，所述进料段内设有带有网孔的拦板，所述出料段呈大端面朝外的锥形状，出料段内设有与出料段匹配的锥形塞，出料段内位于锥形塞内侧设有可使锥形塞将出料段密封的拉簧；基于所述加料装置，所述步骤2)的具体操作如下：A、将所述加料装置放入至步骤1)得到的溶液上方，将盛放溶液的反应器上端密封，且使各个出料段的下端浸没于溶液中；B、将待加入的二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈和二苄基三硫代碳酸酯分散地放于各个进料段内；C、轮流地向各个进料段内鼓入高压氮气，直至将所有物料加入至溶液中，并保证鼓入高压氮气的时间总和在10min以上，将排气孔和各个进料段的上端密封；D、将步骤C的溶液混合物超声震荡3～5min后，再置于55～65℃的水浴中聚合反应23～26h。在进行聚合反应之前，需要先将加入的二苄基三硫代碳酸酯以及其他原料搅拌均匀，如此才有利于二苄基三硫代碳酸酯发挥作用，使得聚合效果好。然而，目前聚合加料的方式都是直接将待加入的物料投入进去，所有的物料都聚集在一处，难以分散。为了使物料混合均匀，需要较长时间的超声波处理。但是，超声波混合的过程中，溶液局部会产生高温高压，而偶氮二异丁腈在高温高压下会急剧分解，容易引起燃烧、爆炸，因此，长时间的超声波混合会有明显的安全隐患存在。本方案中，各物料会分散地置于各个进料段内，向其中一个进料段鼓入高压氮气时，在气流的震动下，物料会穿过拦板上的网孔，并随着气流沿直线进入至出料段中。气流进入至出料段内后，对锥形塞形成一个向外的冲击，锥形塞向外移动，出料段打开，物料随着气流进入至溶液中，此时由于出料段内气压较大，溶液不会过多地进入至出料段内。当停止向该加料管内鼓入高压氮气时，锥形塞会在拉簧的作用下回复，将出料段重新密封。本方案中，设置拦板，可避免物料快速地向下滑入至出料段，将多根加料管的交汇处封堵，有了拦板，即使有网孔的存在，物料也不会快速地向下滑动，只有在震动下才会大量地穿过网孔，向下滑动，而氮气的进入正好实现了这一点。本方案的技术效果在于：1)、物料在氮气的带动下进入至溶液中，氮气可以对物料形成搅拌的作用，有利于物料的混合均匀；2)、多根倾斜设置的加料管交汇于一点，可以将物料从最原始就分散至溶液的不同部位处，有利于物料的混合均匀；3)、轮流地向各个加料管中鼓入氮气，可以避免同时向各个加料管中鼓入氮气而造成的不同加料管之间气流的相互影响，导致物料难以顺利地进入，影响效率。4)、原本在聚合之前就需要充氮气排氧，以在真空条件下聚合。本方案利用氮气将物料加入至溶液中，并对物料进行搅拌，同时还可以实现排氧，节约了后续充氮气的时间，一举两得，整体效率高。值得注意的是，对于液态的二醇二甲基丙烯酸酯而言，虽然拦板不能将其拦截，其会汇集于各个出料段内以及所述交汇处，但由于其流动性好，不会将交汇处封堵，且各个加料管轮流地鼓入氮气，能使得二醇二甲基丙烯酸酯从不同的出料段进入至溶液中，即进入至溶液的不同部位处，同样能达到分散、混合的效果，而且通入氮气也能对其起到搅拌的作用。本方案在前期就将物料分散本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效液相色谱固定相的制备方法，该液相色谱固定相为白藜芦醇分子印迹聚合物，其特征在于，所述白藜芦醇分子印迹聚合物的制备步骤如下：1)、按照摩尔比为1:6～1:2的量取白藜芦醇、丙烯酰胺溶解于乙腈中，乙腈的质量按照白藜芦醇质量的0.2～0.3倍称取；2)、向步骤1)得到的溶液中加入摩尔比为80:1～100:1的二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，采用可逆加成‑断裂链转移自由基聚合法在55～65℃的水浴中聚合反应23～26h，得到块状聚合物；3)、将所述块状聚合物研磨、烘干、去杂，得到白藜芦醇分子印迹聚合物。

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱固定相的制备方法，该液相色谱固定相为白藜芦醇分子印迹聚合物，其特征在于，所述白藜芦醇分子印迹聚合物的制备步骤如下：1)、按照摩尔比为1:6～1:2的量取白藜芦醇、丙烯酰胺溶解于乙腈中，乙腈的质量按照白藜芦醇质量的0.2～0.3倍称取；2)、向步骤1)得到的溶液中加入摩尔比为80:1～100:1的二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，采用可逆加成-断裂链转移自由基聚合法在55～65℃的水浴中聚合反应23～26h，得到块状聚合物；3)、将所述块状聚合物研磨、烘干、去杂，得到白藜芦醇分子印迹聚合物。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱固定相的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的去杂步骤中，先用摩尔比为9:1的甲醇和乙酸的混合液进行索式提取，再用甲醇洗脱。3.根据权利要求1或2所述的高效液相色谱固定相的制备方法，其特征在于，所述可逆加成-断裂链转移自由基聚合法中加入的试剂为二苄基三硫代碳酸酯。4.根据权利要求3所述的一种高效液相色谱固定相的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中可逆加成-断裂链转移自由基聚合法的具体操作步骤如下：加入所述二苄基三硫代碳酸酯，使用超声混合均匀，并通氮气后真空密封，再置于55～65℃的水浴中聚合反应23～26h。5.根据权利要求4所述的一种高效液相色谱固定相的制备方法，其特征在于，所述步骤2)采用如下加料装置进行加料，所述加料装置...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖文清，张浦，何明，热沙来提，买买提吐尔逊，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，
类型：发明
国别省市：广东,44