一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，包括以下步骤：S1:标准溶液的制备；S2:样品提取；S3:样品净化；S4:加入衍生试剂；S5:气相色谱/质谱联用法分析结果；本水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法采用气相色谱串联质谱法同时检测7种胆固醇氧化物，具有高效快速、高通量、灵敏度高，最低检出限达到ppb级水平。该检测技术弥补了现有检测方法不能同时高通量检测7种胆固醇氧化物的缺点，使用加速溶剂萃取仪和凝胶渗透色谱仪，大大缩短了检测方法周期(缩短达80％)，减少有毒溶剂的使用量，提高了分析方法的稳定性和重复性，具有快速、高效、环保、高通量等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法
本专利技术涉及水产加工品品检测领域，尤其是涉及一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法。
技术介绍
食品安全与人们的健康与安全直接相关，与社会稳定和国家经济发展息息相关。如今，人们从对食品是否安全的关注逐渐转变为到食品营养价值、食品口味等高层次的需求。作为家庭的食物的重要成员，水产品以其味道鲜美，营养丰富等成为消费者的家居的首选食品。国家统计局做过一次调查，越来越多的中国人开始对营养的需求作为食品消费的第一需要，水产加工品已经处于副食品消费的核心地位，在我国，居民人均水产加工品消费水平已经超过禽蛋，仅少于猪肉。同时水产加工品出口贸易额处于我国大宗农产品出口贸易额的首位，为国家出口创汇贡献了不可磨灭的力量。因此，水产加工品质量安全对于保障人民身体健康和生命安全、促进水产加工品具有十分重要的意义。胆固醇是脊椎生物细胞的极为重要的组成部分，广泛分布在所有的生物器官，含量尤其丰富，特别是在神经组织和肾上腺。在大脑中的胆固醇含量为约1350～2200mg/100g，占大脑的固体物质的10％以上，人体内发现的胆石，几乎完全是胆固醇所组成。人体的其他器官，例如肾、肝、心、肺等内脏，其胆固醇含量也非常高，大致在260～430mg/100g。在光照、加热等环境因素影响时，氧化反应就在胆固醇内部快速进行，例如脱氢等反应，会造成多种胆固醇氧化产物的产生。胆固醇氧化物在人体内可造成DNA的损坏、细胞毒性增强以及致癌性和致突变性危害，胆固醇氧化物的聚集，也会造成血管内膜损伤，神经衰弱和诱发动脉粥样硬化等慢性疾病，对人体的健康产生有很大的潜在威胁。因此，通过研究水产加工品中胆固醇氧化物的检测方法，通过此方法来找出生产工艺上的漏洞，应该能够有效降低水产加工品加工过程中胆固醇氧化物生成量，将有望解决出口贸易技术壁垒，提高水产加工企业的国际竞争能力。
技术实现思路
本专利技术为克服上述情况不足，旨在提供一种能解决上述问题的技术方案。一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，包括以下步骤：S1:标准溶液制备：称取7种胆固醇氧化物标准品，使用色谱纯的正己烷定容，超声混合均匀，然后把标准品母液通过逐级稀释法配置标准品的使用液；S2:样品提取：称取粉碎的水产加工品样品与硅藻土置于碾磨钵中，碾磨均匀，将混合样品移入萃取缸中，放入ASE350加速溶剂萃取仪样品盘中提取；S3:样品净化：转移萃取完的提取液置于进样棕色瓶中，然后放入凝胶渗透色谱仪中净化处理；S4:加入衍生试剂：在净化完成之后，加入三氟乙酰胺BSTFA进行衍生；S5:通过气相色谱/质谱联用法分析结果。作为本专利技术进一步的方案：在步骤S1中，使用超声混合均匀，配制完成胆固醇氧化物混合标准品的储备液的浓度为5.0mg/mL；然后把标准品母液通过逐级稀释法配置标准品的使用液，使用液的浓度梯度为：10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL、100ng/mL；放置于棕色瓶中，4℃避光保存；作为本专利技术再进一步的方案：在步骤S2中，准确称取5.0g粉碎的水产加工品样品与5.0g硅藻土置于碾磨钵中，充分碾磨均匀，将混合样品移入33mL萃取缸中，放入ASE350加速溶剂萃取仪样品盘中提取，ASE350加速溶剂使用体积比为1：1的丙酮:石油醚，然后在10.34MPa压力，90℃条件下，加热5min，静态萃取7min，萃取循环3次，然后用60％的体积比为1：1的丙酮:石油醚反复冲洗萃取缸，氮气吹扫120s，最后收集流出液，溶剂使用量为30-40mL；作为本专利技术再进一步的方案：在S3步骤中，凝胶渗透色谱仪净化条件为：流动相为环己烷：乙酸乙酯，体积比为1:1；流速为5.0mL/min；废弃液弃去时间为1300s；收集液收集时间为3400s；淋洗凝胶色谱柱时间为350s；第一浓缩压力为160mbar；第二浓缩压力为180mbar；浓缩温度为40℃；作为本专利技术再进一步的方案：在步骤S4中，衍生试剂为50μLN2O-双三氟乙酰胺BSTFA，N2O-双三氟乙酰胺BSTFA含有1％三甲基氯硅烷和50μL吡啶，然后在60℃下，衍生1小时；衍生结束之后，使用微氮气流吹至近干，然后用1.0mL正己烷溶解定容，最后取1μL进样；作为本专利技术再进一步的方案：在S5步骤中，使用DB-5ms作为试验色谱柱；作为本专利技术再进一步的方案：在S5步骤中，柱温箱升温程序为：初始柱温箱温度先为70℃，保持2min，然后以10℃/min升温速度升温至120℃，保持1min，然后以15℃/min升温速度升温至180℃，保持1min，最后以20℃/min升温速度升温至260℃，保持5min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法采用气相色谱串联质谱法同时检测7种胆固醇氧化物，具有高效快速、高通量、灵敏度高，最低检出限达到ppb级水平。该检测技术弥补了现有检测方法不能同时高通量检测7种胆固醇氧化物的缺点，使用加速溶剂萃取仪和凝胶渗透色谱仪，大大缩短了检测方法周期(缩短达80％)，减少有毒溶剂的使用量，提高了分析方法的稳定性和重复性，具有快速、高效、环保、高通量等优点。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是3种提取法比较图。图2是固相萃取小柱与凝胶渗透色谱仪净化效果比较图。图3是胆固醇氧化物流出时间图。图4是7种胆固醇氧化物标准品衍生物的气相色谱-质谱总离子流图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1～4，本专利技术实施例中，一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，包括以下步骤：S1:标准溶液的制备：使用万分之一天平准确称取7种胆固醇氧化物标准品0.0500g，使用色谱纯的正己烷定容至50.0mL，超声混合均匀，配制完成胆固醇氧化物混合标准品的储备液(标准品母液)，其浓度为5.0mg/mL。通过标准品母液通过逐级稀释法来配置标准品的使用液，用色谱纯的正己烷逐级稀释标准品母液，来配制胆固醇氧化物使用液，使用液的浓度梯度为：10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL、100ng/mL。放置于棕色瓶中，4℃避光保存；S2:样品提取：准确称取5.0g粉碎的水产加工品样品与5.0g硅藻土置于碾磨钵中，充分碾磨均匀，将混合样品移入33mL萃取缸中，放入ASE350加速溶剂萃取仪样品盘中提取，使用丙酮:石油醚(体积比为1：1)为提取溶剂，在10.34MPa(1500psi)压力下，90℃条件下，加热5min，静态萃取7min，萃取循环3次，用60％的丙酮:石油醚(体积比为1：1)反复冲洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1:标准溶液制备：称取7种胆固醇氧化物标准品，使用色谱纯的正己烷定容，超声混合均匀，然后把标准品母液通过逐级稀释法配置标准品的使用液；S2:样品提取：称取粉碎的水产加工品样品与硅藻土置于碾磨钵中，碾磨均匀，将混合样品移入萃取缸中，放入ASE350加速溶剂萃取仪样品盘中提取；S3:样品净化：转移萃取完的提取液置于进样棕色瓶中，然后放入凝胶渗透色谱仪中净化处理；S4:加入衍生试剂：在净化完成之后，加入三氟乙酰胺BSTFA进行衍生；S5:通过气相色谱/质谱联用法分析结果。

【技术特征摘要】
1.一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1:标准溶液制备：称取7种胆固醇氧化物标准品，使用色谱纯的正己烷定容，超声混合均匀，然后把标准品母液通过逐级稀释法配置标准品的使用液；S2:样品提取：称取粉碎的水产加工品样品与硅藻土置于碾磨钵中，碾磨均匀，将混合样品移入萃取缸中，放入ASE350加速溶剂萃取仪样品盘中提取；S3:样品净化：转移萃取完的提取液置于进样棕色瓶中，然后放入凝胶渗透色谱仪中净化处理；S4:加入衍生试剂：在净化完成之后，加入三氟乙酰胺BSTFA进行衍生；S5:通过气相色谱/质谱联用法分析结果。2.根据权利要求1所述的一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，使用超声混合均匀，配制完成胆固醇氧化物混合标准品的储备液的浓度为5.0mg/mL；然后把标准品母液通过逐级稀释法配置标准品的使用液，使用液的浓度梯度为：10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL、100ng/mL。3.根据权利要求1所述的一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，配置好的标准品的使用液放置于棕色瓶中，4℃避光保存。4.根据权利要求1所述的一种水产加工品中胆固醇氧化物含量检测方法，其特征在于，在步骤S2中，准确称取5.0g粉碎的水产加工品样品与5.0g硅藻土置于...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵巧灵，方益，戴意飞，蒋玲波，黄鹂，
申请(专利权)人：舟山市食品药品检验检测研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33