一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法技术

本发明专利技术公开一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其采用高效液相色谱检测样品中的盐酸氨基葡萄糖的含量和/或硫酸软骨素的含量；先取戊烷磺酸钠0.87g，加乙腈‑水溶液500mL溶解即得流动相；在检测波长为190‑192nm；流动相流速0.15～0.25ml/min；流动相比例为乙腈‑戊烷磺酸钠溶液5：95检测；本发明专利技术通过摸索高效液相的色谱条件能够高效、准确、重现性好的检测出制剂中含有的盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量，使二者的分离度均大于1.5，两者与邻近的杂质分离度均大于2.0。该方法具有通用性，操作简便，专属性强，灵敏度、准确度和精密度良好等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法
本专利技术涉及保健食品中主要成分的检测方法，特别涉及以盐酸氨基葡萄糖、硫酸软骨素钠、乳矿物盐、透明质酸钠、酪蛋白磷酸肽为主要成分的保健食品中，用于盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量检测的方法。
技术介绍
据不完全统计，我国60岁以上的老年人骨质疏松症发病率约为59.89％，增加骨密度、有效治疗骨质疏松症已经成为人们广泛关注的重要课题。骨质疏松是一种“静悄悄”的疾病，是以单位体积内骨组织量减少、骨皮质变薄、海绵骨骨小梁数目及大小均减少、髓腔增宽、骨荷载功能减弱等为特征的疾病，通常要等到骨折发生才能被觉察到。临床上主要依据反映骨量的主要指标即骨密度来诊断。骨质疏松的信号包括身高缩短、圆肩、驼背以及检验诊断出的骨质流失，还有可能有脖子痛和肩痛等症状。骨质疏松的患者骨头松脆、导致骨折风险增加，尤其是髋关节、脊柱和腕部非常容易骨折。骨关节炎是关节的一种慢性疾病，承重的关节尤其容易产生这疾病。据流行病学统计，目前全球关节炎患者有3.55亿人，在中国的患者人数超过1亿，并且还在增加，50岁以上的人群中70-80％患着不同程度的各种关节炎症。骨关节炎的发生通常是渐进性的，最常被累及的有髋关节、膝关节、手指和脊柱，其他关节也可能受影响，疼痛是最主要的症状，在运动时加重，休息之后可得到缓解。随着关节炎的恶化，关节的运动能力逐渐丧失，并且出现压痛，还可能有刺痛的感觉。脊柱部位的骨关节炎还可能造成手臂和腿部出现刺痛。作为世界头号致残性疾病，严重的骨关节炎可导致人体全部活动能力丧失。现氨糖类保健食品种类较多，复配维生素D、酪蛋白磷酸肽、透明质酸钠、钙剂等等，达到增加骨密度的保健功能，本专利技术的目的是排除透明质酸钠在保健食品中盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量测定。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术针对市场上的增加骨密度保健食品，专利技术一种用于检测产品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素含量的方法，其具体的技术方案为：采用高效液相色谱检测样品中的盐酸氨基葡萄糖的含量和/或硫酸软骨素的含量；按照下述比例制备样品溶液：取25-30mg样品加至5-10ml乙腈中，振荡使其分散均匀，再加入水用超声波使溶解，超声10-20min；再补加水定容至100ml；按照下述比例制备乙腈-戊烷磺酸钠溶液，作为流动相：取戊烷磺酸钠0.87g，加乙腈-水溶液500mL溶解即得；检测波长为190-192nm；流动相流速0.15～0.25ml/min；流动相比例为乙腈-戊烷磺酸钠溶液(4.75～5.25)：(95.25～94.75)；其中，优选的体积比为5：95。精密量取样品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述流动相流速为0.16ml/min、0.20ml/min或0.24ml/min。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述乙腈-水溶液按照体积比为5-10：95-90的比例配制。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述乙腈-水溶液按照体积比为5：95的比例配制。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述色谱图的出峰顺序依次为硫酸软骨素、氨基葡萄糖，硫酸软骨素与氨基葡萄糖的分离度均大于1.5，两者与邻近的杂质分离度均大于2.0。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述硫酸软骨素钠进样浓度在9.008μg/mL～90.08μg/mL范围内呈良好的线性关系，盐酸氨基葡萄糖进样浓度在11.87μg/mL～118.7μg/mL内呈良好的线性关系。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，所述硫酸软骨素钠的最低检测限为1.61ng，即本品中含有0.13％的硫酸软骨素钠即可检出；盐酸氨基葡萄糖的最低检测限为4.84ng，即本品中含有0.39％的盐酸氨基葡萄糖即可检出。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，求得硫酸软骨素钠的最小定量限为5.63ng，即本品中含有0.45％的硫酸软骨素钠即可定量；盐酸氨基葡萄糖的最小定量限为14.51ng，即本品中含有1.16％的盐酸氨基葡萄糖即可定量。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，制备样品溶液前，先将样品研细成粉末，置100-105℃下干燥4-5h。优选的情况下，所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，制备的样品溶液在使用前，用0.2μm的聚四氟乙烯膜(PTFE)滤膜滤过。优选的情况下，所述的乙腈为色谱级；所述的戊烷磺酸钠的纯度≧99.5％：优选的情况下，所述标准品为盐酸氨基葡萄糖SIGMA有限公司；硫酸软骨素钠BSIGMA有限公司，加体积比为5：95的乙腈-水溶液稀释制成硫酸软骨素钠浓度约0.045mg/mL和盐酸氨基葡萄糖浓度约为0.060mg/mL的混合对照品溶液，用0.2μm的聚四氟乙烯膜(PTFE)滤膜滤过备用。本专利技术的创新特征是：本专利技术所述方法主要针对市场上各种具有增加骨密度功能的保健食品的制剂，此类制剂由盐酸氨基葡萄糖、硫酸软骨素钠、乳矿物盐、酪蛋白磷酸肽、透明质酸钠和适宜辅料制备而成。通过摸索高效液相的色谱条件能够高效、准确、重现性好的检测出制剂中含有的盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量，使硫酸软骨素与氨基葡萄糖的分离度均大于1.5，两者与邻近的杂质分离度均大于2.0。该方法具有通用性，操作简便，专属性强，灵敏度、准确度和精密度良好等特点。附图说明图1硫酸软骨素线性范围曲线图；图2氨基葡萄糖线性范围曲线图。具体实施方式下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1氨糖软骨素加钙胶囊：自制，该制剂由盐酸氨基葡萄糖、硫酸软骨素钠、乳矿物盐、酪蛋白磷酸肽、透明质酸钠和适宜辅料制备而成。具体的，本专利技术所使用的三批次胶囊的原料成分和比例如下：批号20141101盐酸氨基葡萄糖(95重量份)、硫酸软骨素钠(72重量份)、乳矿物盐(200重量份)、酪蛋白磷酸肽(17重量份)、透明质酸钠(10重量份)和辅料淀粉((6重量份)批号20141102盐酸氨基葡萄糖(90重量份)、硫酸软骨素钠(77重量份)、乳矿物盐(200重量份)、酪蛋白磷酸肽(17重量份)、透明质酸钠(10重量份)和辅料淀粉(6重量份)批号20141103盐酸氨基葡萄糖(100重量份)、硫酸软骨素钠(67重量份)、乳矿物盐(200重量份)、酪蛋白磷酸肽(17重量份)、透明质酸钠(10重量份)和辅料淀粉((6重量份)实施例21.仪器与试剂、试药1.1仪器与材料安捷伦1100高效液相色谱仪，配紫外检测器KQ5200DB数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司CP225D型10万分之一分析天平：德国SARTORIUSAG公司JD60-4万分之一分析天平：沈阳龙腾电子有限公司滤膜：聚四氟乙烯膜(PTFE)：0.2μm1.2试剂与试药水：GB/T6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱检测样品中的盐酸氨基葡萄糖的含量和/或硫酸软骨素的含量；按照下述比例制备样品溶液：取25‑30mg样品加至5‑10ml乙腈中，振荡使其分散均匀，再加入水用超声波使溶解，超声10‑20min；再补加水定容至100ml；按照下述比例制备乙腈‑戊烷磺酸钠溶液，作为流动相：取戊烷磺酸钠0.87g，加乙腈‑水溶液500mL溶解即得；检测波长为190‑192nm；流动相流速0.15～0.25ml/min；流动相比例为乙腈‑戊烷磺酸钠溶液(4.75～5.25)：(95.25～94.75)。精密量取样品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

【技术特征摘要】
1.一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱检测样品中的盐酸氨基葡萄糖的含量和/或硫酸软骨素的含量；按照下述比例制备样品溶液：取25-30mg样品加至5-10ml乙腈中，振荡使其分散均匀，再加入水用超声波使溶解，超声10-20min；再补加水定容至100ml；按照下述比例制备乙腈-戊烷磺酸钠溶液，作为流动相：取戊烷磺酸钠0.87g，加乙腈-水溶液500mL溶解即得；检测波长为190-192nm；流动相流速0.15～0.25ml/min；流动相比例为乙腈-戊烷磺酸钠溶液(4.75～5.25)：(95.25～94.75)。精密量取样品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。2.根据权利要求1所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于：所述流动相流速为0.16ml/min、0.20ml/min或0.24ml/min。3.根据权利要求1所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于：所述乙腈-水溶液按照体积比为5-10：95-90的比例配制。4.根据权利要求3所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于：所述乙腈-水溶液按照体积比为5：95的比例配制。5.根据权利要求1所述的增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉琦，李海涛，张慧，王添敏，曾峥，
申请(专利权)人：珍奥集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21