一种山萮菜药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种山萮菜药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法，其步骤包括，分别制备供试品溶液和3‑丁烯基异硫氰酸酯对照品、5‑甲硫戊基‑异硫氰酸酯对照品、6‑甲硫己基‑异硫氰酸酯对照品制备得到的对照品溶液后，注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。本发明专利技术方法采用山嵛菜药材以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，通过构建嵛菜药材的指纹图谱，真实反映出山嵛菜药材所含特征物质，分析测定山嵛菜药材中异硫氰酸酯类化合物，同时可作为山嵛菜药材的质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法
本专利技术是一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，具体涉及对山萮菜药材进行的HPLC-DAD指纹图谱质量评价方法，属于中药质量控制领域。
技术介绍
山嵛菜(EutremawasabiMaxim)，又称山葵，是十字花科山嵛菜属多年生宿根草本植物。山嵛菜含有丰富的芥子油，以具独特的香、辛、甘粘的特性而居各种香辛调味之首，此外，还具有助消化、消除毒、抗活性氧自由基及拮抗多种人体疾病病菌的作用，具有较高的食用保健价值。其中的主要辛辣成分异硫氰酸酯(Isothiocyanate)更具有抗菌、抗癌、抗氧化等多种药理作用。山嵛菜中的辛辣成分异硫氰酸酯是植物细胞遭破坏时在一定的外界条件下由内源酶催化母体硫葡糖苷而产生，它的结构决定了它的化学活泼性及易挥发性，在保存过程中易降解。在已有的文献报道中，人们对其提取工艺、种植技术、芥末酱研制、营养成分等的研究较多，例如，李建颖、卜路霞等人发表的“自菜粕中提取芥子油甙的最佳工艺研究”（《食品研究与开发》2010年11月第31卷第11期）中提到，菜籽粕的提取芥子油甙的最佳溶剂选择为甲醇，特别是用40%甲醇提取所测得的芥子油甙含量最高，其次，正交试验对最佳工艺条件进行了验证，其结果表明，影响芥子油甙提取的主要因素依次是甲醇浓度、温度、料液比和时间。除上述研究外，现有文献报道中鲜有关于山嵛菜药材的质量控制方面的研究，我们知道，中药质量控制是现代中药发展的瓶颈之一，目前我国在现有标准中，中药材、中成药的质量标准大量限于鉴别外观、性状检查，很少对其中有效成分进行检查，即使在建立成分测定的标准中，所测成分大部分仅为1～2个指标成分，而不是直接与疗效相关的有效成分。对于山萮菜药材而言，整个药材市场缺乏对药材准确的，科学的质量评价。现有技术中，色谱指纹图谱分析是一种十分可行的质量控制模式，它可为中药材和中成药提供综合的、宏观的和可量化的质量评价。为此，本专利技术提出了一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，该测定方法采用山嵛菜药材以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，通过构建嵛菜药材的指纹图谱，真实反映出山嵛菜药材所含特征物质，分析测定山嵛菜药材中异硫氰酸酯类化合物，同时可作为山嵛菜药材的质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。本专利技术通过下述技术方案实现：一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，包括以下步骤：（A）供试品溶液的制备：取山嵛菜药材溶置于甲醇中，经超声处理后，再放冷过滤，取续滤液作为供试品溶液，待用；（B）对照品溶液的制备：取3-丁烯基异硫氰酸酯对照品，5-甲硫戊基-异硫氰酸酯对照品，6-甲硫己基-异硫氰酸酯对照品，溶解于甲醇中，配制成对照品溶液，待用；（C）测定：分别吸取供试品溶液与对照品溶液注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。所述步骤（A）中，取山嵛菜药材粉末0.5～2.0g，置于20～80ml甲醇中，经超声处理0.5～1h后，放冷至10～30℃后摇匀，再用0.22um的微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。所述步骤（B）中，控制每1ml对照品溶液中含有80μg3-丁烯基异硫氰酸酯、80μg5-甲硫戊基-异硫氰酸酯和80μg6-甲硫己基-异硫氰酸酯。所述步骤（C）中，高效液相色谱仪的测定条件满足：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度脱洗，色谱柱温度：20～40℃，流速：0.5～1.5ml/min，检测波长：205～400nm。所述梯度脱洗如下：0～10min：5～15%流动相A、95～85%流动相B，10～25min：15～35%流动相A、85～65%流动相B，25～45min：35～70%流动相A、65～30%流动相B，45～60min：70～90%流动相A、30～10%流动相B。根据山萮菜药材的指纹图谱，山嵛菜药材共有9个共有指纹峰，参照物峰S为3-丁烯基异硫氰酸酯色谱峰，9个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.372±0.037、2号峰0.511±0.051、3号峰0.553±0.055、4号峰0.567±0.057、5号峰0.730±0.073、6号峰0.886±0.089、7号峰（S峰）1.000±0.000、8号峰1.253±0.125、9号峰1.391±0.139；各色谱峰的相对保留时间应在规定值的±10%之内。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：（1）本专利技术方法采用山嵛菜药材以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，具有操作简单、分离度好、精密度高、重复性好、检测时间合理等优点，填补了山萮菜药材质量评价的空白，可用于山萮菜药材生产过程的质量控制。（2）本专利技术方法提供了一种通过整体指纹图谱信息对山嵛菜药材质量进行评价的方法，避免了在药材质量控制判断的片面性、主观性，使得山嵛菜药材质量控制更加准确、科学、合理。（3）本专利技术方法采用甲醇、超声的方法对山萮菜药材进行提取，可较全面的检测山嵛菜中的多种主要有效成分，从而构建山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱，为山嵛菜药材的整体质量评价提供有效方法。附图说明图1为10批山嵛菜药材得到的高效液相相似度分析图谱。图2为山嵛菜药材3D色谱图。图3为山嵛菜药材的指纹图谱。图3中，峰1—特征峰1，峰2—特征峰2，峰3—5-甲硫戊基-异硫氰酸酯，峰4—特征峰4，峰5—特征峰5，峰6—特征峰6，峰7—3-丁烯基异硫氰酸酯（S峰），峰8—6-甲硫己基-异硫氰酸酯，峰9—特征峰9。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步地详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此。按仪器使用Agilent1260高效液相色谱仪；二极管阵列（DAD）检测器：G4212B；自动进样器：G1329B；四元梯度洗脱泵：G1311C；柱温箱：G1316A；色谱工作站：AgilentChemstation（美国安捷伦科技有限公司）。CPA225D型电子天平（十万分之一，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司）；JE2002电子天平（百分之一，上海浦春计量仪器有限公司）；BK-900B超声波清洗机（济南巴克超声波科技有限公司）；WelchUlimate®XB-C18色谱柱（4.6mm×250mm×5μm，月旭材料科技（上海）有限公司），岛津Inertsil®ODS-3色谱柱（4.6mm×250mm×5μm），资生堂SPOLAR-C18色谱柱（4.6mm×250mm×5μm）。试剂使用乙腈为色谱纯（Fisher），水为超纯水（美国Millipore公司）；其他试剂为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。山萮菜药材均采自高海拔地区，如下表1所示。表110批山嵛菜药材样品来源分别进行以下检测：实施例1：本实施例提出了一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，步骤如下：（A）供试品溶液的制备：取山嵛菜药材0.5g，置于20ml的甲醇中，经超声处理（功率250W，频率45KHz）0.5h后，放冷至10℃后摇匀，用0.22um的微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液，待用；（B）对照品溶液的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山萮菜药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：（A）供试品溶液的制备：取山嵛菜药材置于甲醇中，经超声处理后，再放冷过滤，取续滤液作为供试品溶液，待用；（B）对照品溶液的制备：取3‑丁烯基异硫氰酸酯对照品，5‑甲硫戊基‑异硫氰酸酯对照品，6‑甲硫己基‑异硫氰酸酯对照品，溶解于甲醇中，配制成对照品溶液，待用；（C）测定：分别吸取供试品溶液与对照品溶液注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：（A）供试品溶液的制备：取山嵛菜药材置于甲醇中，经超声处理后，再放冷过滤，取续滤液作为供试品溶液，待用；（B）对照品溶液的制备：取3-丁烯基异硫氰酸酯对照品，5-甲硫戊基-异硫氰酸酯对照品，6-甲硫己基-异硫氰酸酯对照品，溶解于甲醇中，配制成对照品溶液，待用；（C）测定：分别吸取供试品溶液与对照品溶液注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于：所述步骤（A）中，取山嵛菜药材粉末0.5～2.0g，置于于20～80ml甲醇中，经超声处理0.5～1h后，放冷至10～30℃后摇匀，再用0.22um的微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。3.根据权利要求1所述的一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于：所述步骤（B）中，控制每1ml对照品溶液中含有80μg3-丁烯基异硫氰酸酯、80μg5-甲硫戊基-异硫氰酸酯和80μg6-甲硫己基-异硫氰酸酯。4.根据权利要求1所述的一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，其特征在于：所述步骤（C）中，高效...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启发，王晨曦，张巨琼，张佳卉，徐仕银，刘丁，文焕松，夏柯，陈冲，
申请(专利权)人：成都普思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51