胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法技术

本发明专利技术提供了一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，涉及病理鉴别技术领域，本发明专利技术通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，本发明专利技术将两种胶原分析方式结合在一起，能快速、简便、精确的对胃浆膜表面胶原进行分析，有助于临床工作者了解患者胃癌浆膜表面胶原情况，在评估胃癌患者的肿瘤恶性程度、转移及复发的可能性大小方面具有重要参考价值。本发明专利技术设计合理，技术成熟，简便易行，具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。

【技术实现步骤摘要】
胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法
本专利技术涉及病理鉴别
，尤其是涉及一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法。
技术介绍
我国最新的癌症统计数据显示，胃癌是我国发病率第二、肿瘤致死率第二的恶性肿瘤，是威胁我国居民健康的主要癌症之一。在胃癌进展过程中，肿瘤细胞从粘膜层向粘膜下层、肌层逐层突破，最终浸润浆膜层，脱落到腹腔形成种植转移。浆膜层是肿瘤细胞进入腹腔的最后一道屏障，因此了解胃浆膜面在胃癌中的改变对于研究胃癌腹腔种植转移具有重要意义。细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)是肿瘤微环境中的主要成分，在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。一方面，肿瘤细胞分泌大量细胞因子作用于EMC，使其成分及构象改变，为肿瘤细胞的逃逸创造条件。另一方面，ECM在肿瘤的整个发生发展过程中，随肿瘤病程的进展产生相应的改变，并通过刺激产生生物化学信号和生物物理信号，影响细胞的黏着和迁移，二者相互作用，共同影响肿瘤的浸润、转移进程。胶原作为ECM中的主要成分，也是ECM功能的主要发挥者。在乳腺癌胶原的研究中发现，胶原纤维直接参与了肿瘤细胞的迁移过程、胶原密度增加可以直接促进乳腺上皮细胞的增殖和分化，并显著增加了乳腺癌肺部转移的风险；在胃癌胶原的研究中发现，肿瘤浸润的胃浆膜表面胶原与正常胃浆膜表面胶原具有显著差异，胃浆膜表面胶原的变化与胃癌的预后密切相关。由此可知，胶原是研究胃癌的发生发展以及帮助临床判断胃癌预后的重要指标，观察、分析胶原的宏观及微观结构无论对于科研还是临床都具有重要意义。而目前尚无针对胃浆膜表面胶原进行直观评价的方法，一般使用的胶原分析方法——胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析，操作繁锁耗时且精确程度有限，既不便于分析又不足以提供充分的胶原信息。因此，研究开发出一种对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，进而直观、准确、丰富的获取胃浆膜表面胶原信息，帮助临床工作者了解胃浆膜表面胶原变化，其结果在评估胃癌患者的肿瘤恶性程度、转移及复发的可能性大小等方面均具有十分重要的意义。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，上述方法通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，有助于临床工作者直观、准确、丰富的获取胃浆膜表面胶原信息，进而了解胃浆膜表面胶原变化的情况。本专利技术提供的一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，所述方法包括以下步骤：(a)样本制备：从胃癌切除标本上分离胃浆膜组织后制备胃浆膜表面组织蜡块，随后，沿蜡块的胃浆膜表面水平切取组织切片，制得待测多光子成像切片；(b)多光子胶原成像：对步骤(a)待测多光子成像切片进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；(c)切片染色：将步骤(b)多光子胶原成像后的切片进行Masson染色，然后用切片扫描仪对Masson染色切片进行扫描，获得Masson染色图像；(d)成像分析：将步骤(b)得到的多光子成像图和步骤(c)得到的Masson染色图进行对比，并标记出多光子图像中的胶原部位，随后对多光子成像图的胶原部位进行直观图像分析和/或导入图像分析系统，进行胶原层面分析。进一步的，所述步骤(a)胃浆膜表面组织蜡块制备时，把胃浆膜下层朝下进行包埋。进一步的，所述步骤(a)中组织切片的厚度为3～8μm。进一步的，所述步骤(b)进行二次谐波成像前在多光子成像切片上滴少量无荧光镜油。进一步的，所述步骤(b)二次谐波成像为利用单通道探测器进行成像。更进一步的，所述步骤(b)单通道探测器的输出功率为1.5W～1.8W。更进一步的，所述步骤(b)利用单通道探测器进行成像的成像波长为800～820nm，接收波长为390～410nm。进一步的，所述步骤(b)二次谐波成像的成像倍数为10倍。进一步的，所述步骤(c)中Masson染色切片的成像倍数为20倍，分辨率为0.50μm/像。进一步的，所述步骤(d)胶原层面分析为将多光子图像导入分析系统，得出胶原排列方向、胶原面积和胶原网状指数。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，其中，Masson病理染色可对胃浆膜表面胶原的大体结构和总体占比进行宏观分析；多光子成像无需外源性染色、光损伤小、分辨率高、对胶原信号敏感，可以对胃浆膜表面胶原进行显微成像并对胶原精细结构进行分析，本专利技术将两种胶原分析方式结合在一起，能快速、简便、精确的对胃浆膜表面胶原进行分析，有助于临床工作者了解患者胃癌浆膜表面胶原情况，在评估胃癌患者的肿瘤恶性程度、转移及复发的可能性大小方面具有重要参考价值。本专利技术设计合理，技术成熟，简便易行，具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法流程图；图2为本专利技术效果例1提供的传统方法测得的胶原含量较多标本的多光子胶原成像图；图3为本专利技术效果例1提供的传统方法测得的胶原含量较少标本的多光子胶原成像图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的一个方面，一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，所述方法包括以下步骤：(a)样本制备：从胃癌切除标本上分离胃浆膜组织后制备胃浆膜表面组织蜡块，随后，沿蜡块的胃浆膜表面水平切取组织切片，制得待测多光子成像切片；(b)多光子胶原成像：对步骤(a)待测多光子成像切片进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；(c)切片染色：将步骤(b)多光子胶原成像后的切片进行Masson染色，然后用切片扫描仪对Masson染色切片进行扫描，获得Masson染色图像；(d)成像分析：将步骤(b)得到的多光子成像图和步骤(c)得到的Masson染色图进行对比，并标记多光子图像中的胶原部位，随后对多光子成像图的胶原部位进行直观图像分析和/或导入图像分析系统，进行胶原层面分析。本专利技术提供的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，其中，Masson病理染色可对胃浆膜表面胶原的大体结构和总体占比进行宏观分析；多光子成像无需外源性染色、光损伤小、分辨率高、对胶原信号敏感，可以对胃浆膜表面胶原进行显微成像并对胶原精细结构进行分析，本专利技术将两种胶原分析方式结合在一起，能快速、简便、精确的对胃浆膜表面胶原进行分析。上述多光子成像是一种基于非线性光学和飞秒激光镭射之上的多光子显微成像技术，通过利用活体组织中细胞自身产生的自体荧光及非中心对称组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)样本制备：从胃癌切除标本上分离胃浆膜组织后制备胃浆膜表面组织蜡块，随后，沿蜡块的胃浆膜表面水平切取组织切片，制得待测多光子成像切片；(b)多光子胶原成像：对步骤(a)待测多光子成像切片进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；(c)切片染色：将步骤(b)多光子胶原成像后的切片进行Masson染色，然后用切片扫描仪对Masson染色切片进行扫描，获得Masson染色图像；(d)成像分析：将步骤(b)得到的多光子成像图和步骤(c)得到的Masson染色图进行对比，并标记多光子图像中的胶原部位，随后对多光子成像图的胶原部位进行直观图像分析和/或导入图像分析系统，进行胶原层面分析。

【技术特征摘要】
1.一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)样本制备：从胃癌切除标本上分离胃浆膜组织后制备胃浆膜表面组织蜡块，随后，沿蜡块的胃浆膜表面水平切取组织切片，制得待测多光子成像切片；(b)多光子胶原成像：对步骤(a)待测多光子成像切片进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；(c)切片染色：将步骤(b)多光子胶原成像后的切片进行Masson染色，然后用切片扫描仪对Masson染色切片进行扫描，获得Masson染色图像；(d)成像分析：将步骤(b)得到的多光子成像图和步骤(c)得到的Masson染色图进行对比，并标记多光子图像中的胶原部位，随后对多光子成像图的胶原部位进行直观图像分析和/或导入图像分析系统，进行胶原层面分析。2.根据权利要求1所述的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，其特征在于，所述步骤(a)胃浆膜表面组织蜡块制备时，把胃浆膜下层朝下进行包埋。3.根据权利要求1所述的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，其特征在于，所述步骤(a)中组织切片的厚度为3～8μm。4.根据权利要求1所述的胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评...

【专利技术属性】
技术研发人员：严俊，刘张苑珠，李国新，徐硕瑀，许春辉，陈德鑫，蒋伟，李凯，陈伟生，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东,44