一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法。在不同溶剂的条件下，利用回流法提取茄子不同部位中的黄酮类化合物，利用荧光光谱法进行分析，在pH=7.40接近人体生理环境条件下，研究了茄子提取物与牛血清白蛋白的相互作用，探讨了不同部位的茄子提取物和溶剂种类这两个因素对荧光强度的影响。实验结果显示：甲醇作为溶剂时，茄子梗、茄子皮和茄子肉的提取物均使BSA的荧光强度产生猝灭，且其最大荧光发射波长无明显红移；乙醇作为溶剂时，茄子梗、茄子皮和茄子肉的提取物均使BSA的荧光产生猝灭，且其最大荧光发射波长明显红移。并且随着提取液浓度的增加，茄子甲醇提取液和茄子乙醇提取液与BSA相互作用的荧光值均呈下降趋势，但下降的方式和程度不同。

【技术实现步骤摘要】
一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法
本专利技术属于荧光光谱
，具体涉及一种荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法。
技术介绍
茄子是茄科植物结的果实，它是一种草本植物。原产自热带，后引入中国。人们种植茄子的历史可追溯到2000多年前。在我国各地种植茄子的现象非常普遍，它是人们最喜爱的常见食物之一，不仅能预防和治疗多种疾病，而且其自身具有很高的药用价值，是一种便宜实惠的蔬菜。茄子内含有丰富的蛋白质、维生素P、维生素C、微量元素、糖类及生物碱等，茄子属于寒凉性质的食物，夏天使用作用较好，具有祛风通络、消肿止痛的功效，适用于肠风入血、清热解暑等症状。茄子中含有丰富的黄酮类化合物，主要的类黄酮成分是芸香和皂苷，在每百克茄子中就含有700毫克的类黄酮，具有强大的抗氧化功能，常使用茄子，可防止细胞癌变，可以使血液中的胆固醇水平降低，从而预防血管动脉硬化。它也能够增强人体细胞的粘着力和毛细血管的弹性，降低毛细血管的脆性和渗透性，防止血管出血，帮助改善血管的微循环，使血小板保持正常功能，从而具有活血、通脉的功能，因此对延缓人体衰老和保健具有必不可少的作用。牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin)，简称BSA。它是牛血清中的一种球蛋白，主要组成有蛋白质、多肽、激素以及其它成分。它不仅具有廉价易得的优点，而且还有与人血清白蛋白相似的特点，具有重要的运载和存储功能，可以与许多小分子物质发生相互作用，其分子量约为66000。其是有580个氨基酸残基组成的单链蛋白质，其中包括能够发出内源性荧光的色氨酸残基、络氨酸残基、苯丙氨酸残基等。各种药物进入人体后首先与牛血清白蛋白结合，经过血浆的存储和运输，到达受体部位产生药理作用。通过研究药物分子与血清白蛋白之间的相互作用，有助于在分子水平上理解药物在体内的运输和代谢过程，因此对于说明药物的作用机制以及生物大分子与药物小分子相互作用的化学本质都具有重要的意义。目前，人们对于各类天然产物与牛血清白蛋白的相互作用已经有了较多的研究，对于猝灭方式、结合位点、相互作用力等有了更为深入的讨论，但人们对于用不同溶剂提取茄子不同部位的黄酮类化合物，从而探讨不同部位提取物和相同部位不同溶剂提取物与BSA相互作用的荧光光谱的变化情况的研究比较少，因此更好地了解化学、生命科学、药物学、医学以及一些边沿性、前沿性学科的研究和进展，对保持人体的健康也具有重要的作用。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法。基于上述目的，本专利技术采取了如下技术方案：采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法，包括以下步骤：1)配置0.1mol/LpH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液；2)配置1×10-5mol·L-1BSA溶液；3)制备茄子提取物：新鲜的茄子清洗干净，晾干表面水分，用洁净的剪刀将茄子的梗、皮和肉分离切碎，在分析天平上分别称取30g茄子梗、茄子皮、茄子肉，分别加入约90mL无水乙醇、甲醇进行水浴回流，回流提取时间为2h，提取温度为85℃，分别得到茄子梗乙醇提取液、茄子皮乙醇提取液、茄子肉乙醇提取液、茄子梗甲醇提取液、茄子皮甲醇提取液、茄子肉甲醇提取液，分别把提取液移至100mL容量瓶中，并分别用乙醇、甲醇定容至刻度；4)利用荧光光谱法研究茄子提取物与BSA的相互作用：在编号为1-6的比色管中均移取4mLBSA溶液于10mL比色管中，再用移液枪依次加入0-4mL茄子提取物，最后用Tris缓冲溶液定容至10mL；混合均匀后放置5min，激发波长设为280nm，激发狭缝和发射狭缝均设为5nm，发射波长扫描范围设为282-500nm，测其荧光发射光谱。配置0.1mol/LpH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液的具体步骤为：准确称取3.0285g三(羟甲基)氨基甲烷固体Tris于250mL容量瓶中，用水溶解并定容于250mL，配制成0.1mol/LTris溶液；用量筒量取4.2mL浓盐酸，定容于250mL容量瓶中，配制成0.1mol/LHCl溶液；将250mL的0.1mol/LTris溶液与一定量的0.1mol/LHCl溶液混合后，利用pH计，调节其pH值为7.4。配置1×10-5mol·L-1BSA溶液的具体步骤为：将分子量为66000g·mol-1的牛血清白蛋白加蒸馏水使之溶解，然后定容，配制成1×10-5mol·L-1的BSA溶液。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过利用荧光光谱法模拟人体生理条件，研究了茄子提取物中黄酮类化合物与BSA的相互作用，结果发现，茄子甲醇提取物和茄子乙醇提取物均使BSA的荧光产生猝灭，不同部位和不同溶剂使BSA的荧光减小程度不同，而且茄子乙醇提取物使BSA的最大荧光发射波长明显红移，茄子乙醇提取物使BSA的最大荧光发射波长无明显红移。茄子梗、皮、肉乙醇提取液和茄子皮甲醇提取液与BSA相互作用的荧光强度值随提取液体积的增加均呈线性下降趋势，但其荧光下降的程度不同；茄子梗、肉甲醇提取液与BSA相互作用的荧光强度值随其体积的增加呈下降趋势，但不是线性减少趋势，而是呈现平滑下降趋势。这些结论对更深入的了解酮类化合物与人血清白蛋白的作用机理及临床应用具有一定的参考价值。附图说明：图1是茄子梗乙醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子梗乙醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.045、0.06、0.09、0.12；图2是茄子梗甲醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子梗甲醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.045、0.06、0.09、0.12；图3是茄子皮乙醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子皮乙醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.06、0.075、0.09、0.12；图4是茄子皮甲醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子皮甲醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.06、0.075、0.09、0.12；图5是茄子肉乙醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子肉乙醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.06、0.09、0.105、0.12；图6是茄子肉甲醇提取液与BSA的荧光发射光谱；图中从1到6曲线茄子肉甲醇提取液加入的浓度(单位：g/mL)依次为：0、0.03、0.06、0.09、0.105、0.12；图7是茄子梗乙醇提取液与BSA相互作用的荧光强度增值随其浓度的变化图；图8是茄子梗甲醇提取液与BSA相互作用的荧光强度增值随其浓度的变化图；图9是茄子皮提取液与BSA相互作用的荧光强度增值随其浓度的变化图；图10是茄子肉乙醇提取液与BSA相互作用的荧光强度增值随其体积的变化图；图11是茄子肉甲醇提取液与BSA相互作用的荧光强度增值随其浓度的变化图；具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1实验部分1.1实验材料1.1.1仪器和试剂CaryEclipse荧光分光光度计(美国瓦里安公司)；HH-2数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司；电子分析天平(上海越平科学仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）配置0.1mol/L pH=7.4 的Tris‑HCl缓冲溶液；2）配置1×10

【技术特征摘要】
1.采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）配置0.1mol/LpH=7.4的Tris-HCl缓冲溶液；2）配置1×10-5mol·L-1BSA溶液；3）制备茄子提取物：新鲜的茄子清洗干净，晾干表面水分，用洁净的剪刀将茄子的梗、皮和肉分离切碎，在分析天平上分别称取30g茄子梗、茄子皮、茄子肉，分别加入约90mL无水乙醇、甲醇进行水浴回流，回流提取时间为2h，提取温度为85℃，分别得到茄子梗乙醇提取液、茄子皮乙醇提取液、茄子肉乙醇提取液、茄子梗甲醇提取液、茄子皮甲醇提取液、茄子肉甲醇提取液，分别把提取液移至100mL容量瓶中，并分别用乙醇、甲醇定容至刻度；4）利用荧光光谱法研究茄子提取物与BSA的相互作用：在编号为1-6的比色管中均移取4mLBSA溶液于10mL比色管中，再用移液枪依次加入0-4mL茄子提取物，最后用Tris缓冲溶液定容至10mL；混合均匀后放置5min，激发波长设为280nm，激发狭缝...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕艳阳，宋丽冉，
申请(专利权)人：信阳师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41