与结直肠癌相关的分子标记物、抑制剂、试剂盒和药剂制造技术

本发明专利技术公开了与结直肠癌相关的分子标记物、抑制剂、试剂盒和药剂，所述的分子标记物是SOX1基因或其表达的蛋白，所述SOX1基因在结直肠癌中表达上调。所述抑制剂选自SOX1基因的反义链中的siRNA，可以用在制备抑制结直肠癌发生和/或发展的药物中。所述试剂盒包括能够定量检测SOX1基因的表达量的试剂。所述药剂中含有抑制SOX1基因表达的试剂。本发明专利技术发现SOX1基因在结直肠癌病人中高表达，与病人的生存率低显著相关。本发明专利技术提供了一种新的靶向治疗结直肠癌以及结直肠癌耐药的新途径。

【技术实现步骤摘要】
与结直肠癌相关的分子标记物、抑制剂、试剂盒和药剂
本专利技术涉及肿瘤治疗
，具体涉及与结直肠癌相关的分子标记物、抑制剂、试剂盒和药剂。
技术介绍
结直肠癌(ColorectalCarcinoma，CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤。在世界范围内结直肠癌的发病率排名第三位，仅次于肺癌和乳腺癌，每年全球有约120万名患者被确诊为结直肠癌，超过60万名患者直接或间接死于结直肠癌，在恶性肿瘤死亡原因中位居第二位。在中国近多年来由于生活方式和饮食习惯的变化，结直肠癌发病率上升趋势十分明显，每年发病率的平均增幅是4.2％，远高于欧美发达国家2％的发病率，因而日益引起人们对结直肠癌防治工作的关注。对于一般的中晚期结直肠癌患者来说，目前化疗是减缓疾病进展、延长生存期的重要治疗手段，但临床上经常遇到的问题是大部分患者开始对化疗药物治疗有效，而随着病程的进展会对一种或多种化疗药物产生耐药，最终导致化疗失败以及疾病复发。目前，肿瘤细胞对多种化疗药物治疗产生抵抗即肿瘤多药耐药，是结直肠癌治疗的一大难题。新的化疗药物和治疗方案不断被推出，然而至今仍未能解决肿瘤耐药这一难题。在临床实践中，许多肿瘤的初次化疗一般可取得较好的结果，然而此后却难免要复发，且复发后的治疗效果往往更差，其主要原因就是残存的肿瘤细胞包括干细胞已经对化疗药物产生了耐药性，即对治疗的敏感性降低。因此对肿瘤耐药机制和新型治疗方法的研究，对于克服抗癌治疗面临的困境是极为重要的，本领域有必要不断探索克服肿瘤耐药性的新途径，来改善临床上肿瘤治疗效果。肿瘤对化疗药物的耐受性是肿瘤治疗的主要障碍，也是临床效果不佳甚至最终走向失败的根本原因。肿瘤干细胞与肿瘤多种耐药密切相关。近年来的研究指出，肿瘤中的干细胞样的细胞群体对维持肿瘤异质性以及化疗耐药发挥了重要作用。肿瘤干细胞(CancerStemCell，CSC)是具有干细胞性质的癌细胞，具有强大的自我更新以及具有多细胞分化等能力；虽然在肿瘤中这群干细胞样性质的癌细胞数量十分稀少，但是却具有非常强大的成瘤能力，对传统化疗和放疗均高度耐受。由于肿瘤干细胞的特性通常并非只针对单种化疗药物耐药，而是产生多种耐药。因此肿瘤干细胞是结直肠癌多种耐药治疗过程中的重要靶点之一，由此开展结直肠癌肿瘤干细胞和耐药机制的相关研究将有助于个体肿瘤药物敏感性的预测，对结直肠癌的个体化治疗具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种与结直肠癌相关的分子标记物、抑制剂、试剂盒和药剂。根据第一方面，一种实施例中提供一种与结直肠癌相关的分子标记物，该分子标记物是SOX1基因或其表达的蛋白，上述SOX1基因在结直肠癌中表达上调。进一步地，上述分子标记物是SOX1基因的mRNA。进一步地，上述分子标记物是SOX1基因表达的蛋白。根据第二方面，一种实施例中提供一种SOX1基因的表达抑制剂在制备抑制结直肠癌发生和/或发展的药物中的应用。进一步地，上述SOX1基因的表达抑制剂选自SOX1基因的反义链中siRNA。进一步地，上述siRNA的序列如下：GCATGATGATGGAGACCGA(SEQIDNO：3)。根据第三方面，一种实施例中提供一种结直肠癌的检测试剂盒，该试剂盒包括能够定量检测SOX1基因的表达量的试剂。进一步地，上述试剂至少包括实时荧光定量检测SOX1基因的引物序列；上述引物序列如下：正向引物：5'-CACAACTCGGAGATCAGCAA-3'(SEQIDNO：1)；反向引物：5'-GTAATCCGGGTGTTCCTTCA-3'(SEQIDNO：2)。根据第四方面，一种实施例中提供一种治疗结直肠癌的药剂，该药剂中含有抑制SOX1基因表达的试剂。进一步地，上述试剂包括SOX1基因的反义链siRNA；上述siRNA的序列如下：GCATGATGATGGAGACCGA(SEQIDNO：3)。本专利技术在结直肠癌的肿瘤细胞中发现了SOX1基因高表达，这提示SOX1基因具有成为肿瘤辅助诊断标记物的潜能。还发现SOX1基因高表达与结直肠癌患者年总生存率及无病生存率显著负相关，SOX1基因高表达明确指示较差的生存预后，这提示SOX1基因具有成为结直肠癌患者生存预后指标的潜能。体内和体外的功能性研究分析表明，SOX1基因能够促进结直肠癌细胞的恶性发展。此外，抑制SOX1基因的表达能够抑制肿瘤干细胞特性和增强其对化疗药物的敏感性。并且，抑制SOX1基因的表达可抑制肿瘤干细胞相关生物标志物的表达。附图说明图1为本专利技术试验例中结直肠癌耐药基因的筛选结果，其中A示出了TCGA结直肠癌耐药与非耐药病人组织基因表达谱差异基因火山图；B示出了SOX1的mRNA在结直肠癌耐药的患者中显著高表达；图2为本专利技术试验例中SOX1在结直肠癌组织中表达显著性升高的结果图；图3为本专利技术试验例中SOX1的表达水平与患者的生存预后负相关的结果图；图4为本专利技术试验例中在体内SOX1增强细胞对药物的抵抗的结果图；图5为本专利技术试验例中SOX1的细胞生物学功能试验结果图，其中A示出了高表达SOX1增强药物的耐药性；B示出了SOX1高表达的细胞形成的球囊体积较大数目较多；C示出了SOX1高表达的细胞中侧群细胞的比例较高。具体实施方式下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本专利技术能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本专利技术相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本专利技术的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。本专利技术提出了一种用于检测并治疗结直肠癌的分子技术，尤其是高灵敏度地检测肿瘤中基因耐药SOX1的表达及其在监控结直肠癌患者对化疗药物抗耐药性等。通过对结直肠癌组织样本中的基因的表达量与正常结直肠癌组织中的基因的表达量进行对比，当样本中基因的表达量高于正常基因的表达量时，提示该样本为结直肠癌样本。也可以通过对样本结直肠癌组织进行免疫组化测定，当样本结直肠癌组织的染色指数过高时，表明该样本结直肠癌组织中高表达。本专利技术包括如下方面的研究方案：(1)SOX1在体外系统影响肿瘤耐药的生物学验证利用TCGA结直肠癌高通量基因测序表达谱(mRNAHigh-throughputSequencing)，结合相应患者多种临床药物有效性的资料分析，筛选出与耐药相关的差异表达基因。利用大型癌症公共数据库中高通量测序基因表达谱芯片，进行统计分析，发现SOX1在耐药的病人中显著高表达，并在动物模型验证了过表达SOX1能够增强肿瘤在体内耐药的能力。同时前期的体外实验发现过表达SOX1能增强肿瘤干细胞的特性，进而增强肿瘤细胞的抗凋亡能力，引起细胞耐药。为深入了解SOX1结直肠癌中的生物学功能，在SOX1高表达的细胞模型中，需要通过实时荧光定量PCR，流式细胞术和蛋白免疫印迹检测肿瘤干细胞标志物的mRNA和蛋白表达水平。(2)在动物体内，SOX1对肿瘤细胞的成瘤能力的影响前期的体外实验表明SOX1使细胞自我更新能力增强，进一步研究其在动物体内的成瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与结直肠癌相关的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物是SOX1基因或其表达的蛋白，所述SOX1基因在结直肠癌中表达上调。

【技术特征摘要】
1.一种与结直肠癌相关的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物是SOX1基因或其表达的蛋白，所述SOX1基因在结直肠癌中表达上调。2.根据权利要求1所述的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物是SOX1基因的mRNA。3.根据权利要求1所述的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物是SOX1基因表达的蛋白。4.一种SOX1基因的表达抑制剂在制备抑制结直肠癌发生和/或发展的药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述SOX1基因的表达抑制剂选自SOX1基因的反义链中的siRNA。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述siRNA的序列如下：GCATGATGATGGAGACCGA（SEQIDNO：3）。7.一种结...

【专利技术属性】
技术研发人员：方丽珊，吕兆洁，吴姗姗，李荣，李亚杰，刘曙光，龚慧，
申请(专利权)人：中山大学附属第八医院深圳福田，
类型：发明
国别省市：广东,44