一种阿尔茨海默的诊疗基因靶点及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种阿尔茨海默的诊疗基因靶点及其应用，具体的涉及ARHGAP11A基因及其在诊断和治疗阿尔茨海默疾病中的应用。发明专利技术人基于高通量测序结果采用生物信息学方法分析进行基因筛选，挑选出候选基因ARHGAP11A，进一步，通过RT‑PCR方法证实ARHGAP11A基因与阿尔茨海默病具有很好的相关性，可用于制备阿尔茨海默病辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种阿尔茨海默的诊疗基因靶点及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种阿尔茨海默诊疗基因靶点及其应用，更具体的涉及ARHGAP11A基因及其在诊断和治疗阿尔茨海默疾病中的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(AD)是一种致死性的神经退行性疾病，主要影响人的认知和短时记忆功能，随着疾病发展的进行，病人的日常生活能力会逐渐受到影响，最后丧失生活自理能力。阿尔茨海默病病随着年龄的增加发病几率会成倍增加。由于我国人口老龄化问题的显现，老年人口数量的增多使得该种疾病成为影响我国老年人群生活质量提高的重要因素之一，而阿尔茨海默病病仍然没有有效的治疗方法，提早诊断和治疗有助于延缓疾病进程，因此，寻找阿尔茨海默病病诊断和预测相关的生物标记成显得非常重要。现在已有的疾病进程诊断方法包括基于问卷的MMSE打分测试，以及针对Aβ淀粉样蛋白的神经元成像检测，还有一些有创方法比如通过分析脑脊液(CSF)中的相关生物分子(Aβ分子，tau蛋白等)来帮助进行AD的诊断，已有研究认为，通过脑脊液中AD生物标识物进行AD的诊断准确率较好，但是存在2个明显的缺点：费用过高，相比外周血相关的生物组织获取过程较难；获取脑脊液对病人造成的痛苦较大，还有可能留下后遗症。相比之下，外周血是一种比较容易获取的生物组织，研究外周血中AD相关的生物学变化就很具有现实意义，现有的专利中已经揭示部分和阿尔茨海默病相关的分子标志物，如ZL2015104636167揭示的YAP1基因，ZL2015104635287揭示的EAPP基因，CN2016104739651揭示的10个与阿尔茨海默病相关的致病基因，但是，上述基因还有待进一步验证。为解决目前阿尔茨海默分子标记物稀缺的问题，专利技术人对阿尔茨海默患者及健康人对照外周血样本进行高通量测序，采用生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选基因ARHGAP11A。进一步，本专利技术进行了RT-PCR方法证实了ARHGAP11A与阿尔茨海默病具有很好的相关性，可用于制备阿尔茨海默辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测ARHGAP11A基因和/或蛋白的试剂在制备阿尔茨海默诊断制剂中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因ARHGAP11A，进一步通过分子细胞生物学方法验证了ARHGAP11A与阿尔茨海默的关系：ARHGAP11A与阿尔茨海默具有很好的相关性，可用于制备治疗阿尔茨海默制剂和/或阿尔茨海默诊断制剂，具有重要的临床应用价值。进一步，所述的阿尔茨海默的诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法、测序方法检测阿尔茨海默外周血中ARHGAP11A基因的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。高通量测序(High-throughputsequencing)又称下一代测序技术(nextgenerationsequencing)是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，极大提高了测序效率。这类大规模测序技术极大的提高了多个物种遗传信息的解读速度，为获取所有mRNA的序列信息，解密mRNA图谱提供了保证。同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序。高通量测序平台的代表是罗氏公司(Roche)的454测序仪(RochGSFLXsequencer)，Illumina公司的Solexa基因组分析仪(IlluminaGenomeAnalyzer)和ABI的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer)。所述的用于荧光定量PCR方法检测阿尔茨海默中ARHGAP11A基因的产品含有一对特异性扩增ARHGAP11A基因的引物；所述的基因芯片包括与ARHGAP11A基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述的阿尔茨海默的诊断制剂包括用免疫方法检测ARHGAP11A蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测阿尔茨海默中ARHGAP11A蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或外周血切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或外周血超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。进一步，所述检测ARHGAP11A蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的ARHGAP11A单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被ARHGAP11A单克隆抗体的固相载体，酶标二抗，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，所述检测ARHGAP11A蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的ARHGAP11A单克隆抗体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测ARHGAP11A基因和/或蛋白的试剂在制备阿尔茨海默诊断制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种检测ARHGAP11A基因和/或蛋白的试剂在制备阿尔茨海默诊断制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，阿尔茨海默诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法、测序方法检测ARHGAP11A基因的表达。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，用于荧光定量PCR方法检测ARHGAP11A基因的产品含有一对特异性扩增ARHGAP11A基因的引物；基因芯片包括与ARHGAP11A基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，阿尔茨海默诊断制剂包括用免疫方法检测ARHGAP11A蛋白的表达。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，免疫方法检测ARHGAP11A蛋白表达的为ELISA检测试剂盒和/胶体金检测试剂盒。6.一种检测阿尔茨海默的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测基因ARHGAP11A，采用特异的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.1，下游引物序列为SEQIDNO.2。7.ARHGAP11A基因和/或蛋白的促进剂在制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖枫，汪冰怡，唐美兰，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11