一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用制造技术

技术编号:17770080 阅读:128 留言:0更新日期:2018-04-21 22:54
本发明专利技术提供了一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌(

【技术实现步骤摘要】
一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及微生物种质资源的开发与利用领域,具体涉及一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
由尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinumOwen)侵染引起的黄瓜枯萎病,是黄瓜生产上一种较难防治的土传系统性病害之一,该病害具发病快、病害重、传播迅速等特点,一旦发生常造成巨大经济损失。此病的初侵染源主要是带菌的土壤、病株残体、种子和粪肥等,病菌从腐烂的寄主组织里散布到土中可营腐生活,存活时间长达5-6年或更长的时间。黄瓜枯萎病菌可借助雨水、灌溉水等进行远距离传播,整个生长期均能发生,以开花结瓜期发病最多。随着农业结构的调整和设施栽培技术的发展,黄瓜种植面积也在不断扩大,加之多年连作,使病菌在土壤中大量累积,导致黄瓜枯萎病大量暴发,并有进一步加重的趋势,发病率一般在15%-35%之间,严重时达80%-90%,甚至绝收,严重影响黄瓜的产量和品质,是限制黄瓜生产发展的关键因素之一。黄瓜枯萎病是一种典型的土传病害,病原菌侵染早期不表现症状,中后期才表现症状,目前该病害防治仍以化学杀菌剂为主,大量化学农药长期、反复使用,严重污染环境、威胁人类身心健康,使病原菌逐渐产生抗性随之变异产生很多生理小种。因此,黄瓜枯萎病防治急需绿色安全无公害且靶标性强的生物农药。本专利技术从健康黄瓜根部土壤中分离到一株对黄瓜枯萎病菌具有较高拮抗能力的细菌,经微生物分类学鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。本专利技术为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株,同时对促进黄瓜产业的健康生产发展、增加瓜农收入、保障消费者健康、减少环境污染和维持农业可持续发展具有重大的理论和生产意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用,该贝莱斯芽孢杆菌对黄瓜枯萎病具有稳定的防治作用。一种贝莱斯芽孢杆菌,分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis),菌株编号:FJ17-4,已于2017年9月18日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.14642。本专利技术还提供了一种含有贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的生防菌剂,该生防菌剂活性成分为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌株,含菌量为1×109~1010CFU/mL。所述生防菌剂的制备方法,包括如下步骤:(1)将低温保存的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在LB平板培养基上活化,在28℃下培养24小时,得到活化的菌株;(2)用灭菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种于100mLLB液体培养基中,于振荡摇床中28℃,180rmp条件下培养至培养液OD600为0.5~0.8,获得种子液;(3)将种子液接种于发酵培养基中扩大培养24小时,调节发酵液中贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的浓度至1×109~1010CFU/mL,获得所述生防菌剂。其中,所述种子液的接种量优选为1~2%。所述LB固体培养基配方为:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,琼脂粉15g,水1000mL,pH7.2;所述LB液体培养基的配方为:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,水1000mL,pH7.2;所述的发酵培养基为玉米粉黄豆粉培养基,其组成成分及其重量百分比为:玉米粉2.0%,黄豆粉2.0%,NaCl0.5%,MnSO4·H2O0.8%,其余为水,pH7.2。本专利技术还提供了所述贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在防治黄瓜枯萎病中的应用,即在黄瓜开花结瓜期或枯萎病发病初期,将贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌悬液浇灌于黄瓜根部,每株150~200mL;所述贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌悬液的浓度为1×109~1010CFU/mL。本专利技术的有益效果:与现有技术相比,本专利技术的有益效果为:本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对黄瓜枯萎病具有较好的防治效果,可用于黄瓜枯萎病的生物防治,对减少化学杀菌剂的使用、降低农药污染和避免病原菌抗性产生等具有重要的意义。附图说明图1为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的菌落形态。图2为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌体的扫描电镜观察图。图3为菌株FJ17-4基于16SrRNA基因序列比对结果以AlicyclobacillusacidocaldariusDSM446(AJ496806)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树。图4为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对黄瓜枯萎病菌的平板拮抗效果。图5为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌悬浮液对黄瓜枯萎病的室内盆栽防治效果。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述,但不用来限制本专利技术的范围。以下实施例均按照常规实验条件,或已发表相关文献中所述的操作技术规程,或按照厂商所建议的实验条件。实施例1含FJ17-4菌株的生防菌剂制备1、FJ17-4菌株的获取及鉴定贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4从福建省福州市闽清县云龙乡健康黄瓜根围土壤中分离获得,采用平板稀释法对所采集土样中的细菌进行分离,所使的培养基为LB(胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,琼脂15g,水1000mL,pH7.2)。根据不同菌落形态,对所分离细菌进行纯化,共分离纯化得到326株细菌。然后以黄瓜疫病菌为目标病原菌,采用平板对峙培养法(图4)对所纯化细菌对黄瓜疫病菌的拮抗能力进行测定,得到对黄瓜疫病菌具有拮抗作用初筛细菌18株。通过室内盆栽试验,进一步对初筛菌株的防病能力进行评估,最终得到具拮抗作用又有盆栽防治作用的菌株6株。综合拮抗和盆栽防病能力,选取FJ17-4拮抗菌为代表,该菌对黄瓜枯萎病菌菌丝生长具有较强的拮抗作用。经形态学、生理生化及分子生物学16srDNA鉴定,所分离菌株FJ17-4为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。其形态学特征如图1、2所示:菌株革兰氏染色呈阳性;在LB培养基平板上,菌落表面扁平,粗糙不透明,乳白色,边缘不整齐,表面干燥有褶皱,菌落中央凹状突起(图);扫描电镜观察其菌体呈短杆状(图),最适生长温度为28℃;其生理生化特征如表1-表3所示,其16srDNA序列如SEQIDNo.1所示,基于16SrRNA基因序列比对结果系统发育树如图2所示。表1菌株FJ17-4生理生化特性-酶活、碳源氧化+:阳性反应;-:阴性反应;W:弱阳性反应表2菌株FJ17-4生理生化特性-利用碳源产酸+:阳性,-:阴性,w:弱阳性表3菌株FJ17-4生理生化特性-碳源利用+:阳性,-:阴性,w:弱阳性2、生防菌剂的制备(1)将低温保存的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在LB平板培养基上活化,在28℃下培养24小时,得到活化的菌株;1)将FJ17-4菌株接种于LB培养液中,于振荡摇床中28℃,180rmp条件下培养至培养液OD600为0.7,获得种子液,测定过程中以未接菌的培养液来调零。LB液体培养基的组成成分及其重量比为:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,水1000mL,pH7.2。2)将种子菌液以1:100体积比加入发酵培养基中扩大培养,培养条件为28℃,180rmp,培养时间为24小时。培养结束后,采用稀释液涂平板计本文档来自技高网
...
一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用

【技术保护点】
一株贝莱斯芽孢杆菌(

【技术特征摘要】
1.一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)FJ17-4,已于2017年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.14642。2.利用权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4制备的生防菌剂。3.如权利要求2所述生防菌剂的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)将低温保存的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在LB平板培养基上活化,在28℃下培养24小时,得到活化的菌株;(2)用灭菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种于100mLLB液体培养基中,于振荡摇床中28℃,180rmp条件下培养至培养液OD6...

【专利技术属性】
技术研发人员:兰成忠游泳杨秀娟阮宏椿
申请(专利权)人:福建省农业科学院植物保护研究所
类型:发明
国别省市:福建,35

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1