一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用，所述拮抗菌FJ17‑4分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（

【技术实现步骤摘要】
一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用
本专利技术涉及微生物种质资源的开发与利用领域，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用。
技术介绍
由瓜疫霉菌（Phytophthoramelonis）侵染引起的黄瓜疫病（CucumberPhytophthorablight）黄瓜生产上的一种毁灭性土传病害，在黄瓜的整个生育期均可发病，为害植株的叶、茎、根和果实。该病害具有传播速速快、侵染力强等特点，若刚发病时疏于防治，一旦流行则很难控制，可造成黄瓜大面积死亡，造成的直接经济损失十分严重，轻者减产30%-50%，严重时全田绝收。近年来，随着我国黄瓜设施栽培技术的迅速发展，设施条件为黄瓜生长提供了适宜的温、湿度，但适宜黄瓜生长的温、湿度条件也适宜黄瓜疫病的发生与流行，因此黄瓜疫病发生呈逐年严重趋势，在全国各地均有不同程度的发生，受害较重的地区为南方地区的春黄瓜和北方地区的秋黄瓜，该病已成为制约黄瓜产量的重要因素之一。目前，黄瓜疫病的防治仍以化学防治为主，化学农药的大量、反复使用，不仅造成了病原菌抗药性的产生，致使化学药剂的防治效果越来越差，而且化学药剂对环境存在一定的危害，可污染水体、大气和土壤，并残留在农产品中，危害人类健康。因此，植物病害的绿色防治技术的开发与利用是现代农业可持续发展所迫切需求的，利用有益微生物防治植物土传病害是植物病害绿色防治关键技术之一，并取得了一定的成果，一些生物农药也相继问世。本专利技术从健康黄瓜根部土壤中分离到一株对黄瓜疫病菌具有较高拮抗能力的细菌，经微生物分类学鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis）。本专利技术为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株，同时对对促进黄瓜产为的健康生产发展、增加瓜农收入、保障消费者健康、减少环境污染和维持农业可持续发展具有重大的理论和生产意义。
技术实现思路
本专利技术目的在于针对黄瓜疫病防治中化学农药大量使用造成了病原菌抗药性产生、污染环境和农产品农药残留等一系列问题，提供了一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用。本专利技术目的通过以下技术方案来实现：从福建福州、福安、霞浦及三明等黄瓜种植地采集健康黄瓜根部土样，采用平板稀释法对所采集土样中的细菌进行分离，所使的培养基为LB（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂15g，水1000mL，pH7.2）。根据不同菌落形态，对所分离细菌进行纯化，共分离纯化得到326株细菌。然后以黄瓜疫病菌为目标病原菌，采用平板对峙培养法对所纯化细菌对黄瓜疫病菌的拮抗能力进行测定，得到对黄瓜疫病菌具有拮抗作用初筛细菌18株。通过室内盆栽试验，进一步对初筛菌株的防病能力进行评估，最终得到具拮抗作用又有盆栽防治作用的菌株6株。综合拮抗和盆栽防病能力，选取FJ17-4拮抗菌为代表，通过形态学、生理生化及分子生物学16srDNA鉴定，所分离菌株FJ17-4为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis），已于2017年9月18日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14642。上述贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在防治黄瓜疫病方面的应用。所述黄瓜拮抗菌FJ17-4发酵液对黄瓜疫病具有较好的防治效果，黄瓜拮抗菌FJ17-4发酵液制备：将FJ17-4菌株接种种到LB培养液（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2）中，于振荡摇床中28℃，180rmp条件下培养至培养液OD600为0.5～0.8，获得种子液，测定过程中以未接菌的培养液来调零。将种子菌液以1:100体积比加入发酵培养基中扩大培养，培养条件为28℃，180rmp，培养时间为24小时。培养结束后，采用稀释液涂平板计算细菌菌落数法检测发酵中菌体的数量，并将发酵液中菌体浓度调到1×109～1010CFU/mL，获得所述生防菌剂。发酵培养基为玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉2.0%，黄豆粉2.0%，NaCl0.5%，MnSO4·H2O0.8%，其余为水，pH7.2。本专利技术的有益效果：与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对黄瓜疫病菌具有较低好的拮抗作用，可用于黄瓜疫病的生物防治，对减少化学杀菌剂的使用、降低农药污染和避免病原菌抗性产生及减轻农业面源污染具有重要的作用。附图说明图1为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的菌落形态。图2为拮抗菌FJ17-4菌体的扫描电镜观察图。图3为菌株FJ17-4基于16SrRNA基因序列比对结果以AlicyclobacillusacidocaldariusDSM446(AJ496806)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树。图4为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对黄瓜疫病菌的平板拮抗效果。图5为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌悬浮液对黄瓜疫病的室内盆栽防治效果。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但不用来限制本专利技术的范围。以下实施例均按照常规实验条件，或已发表相关文献中所述的操作技术规程，或按照厂商所建议的实验条件。实施例1拮抗菌FJ17-4获得及鉴定从福建福州、福安、霞浦及三明等黄瓜种植地采集健康黄瓜根部土样，采用平板稀释法对所采集土样中的细菌进行分离，所使的培养基为LB（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂15g，水1000mL，pH7.2）。根据不同菌落形态，对所分离细菌进行纯化，共分离纯化得到326株细菌。然后以黄瓜疫病菌为目标病原菌，采用平板对峙培养法（图4）对所纯化细菌对黄瓜疫病菌的拮抗能力进行测定，得到对黄瓜疫病菌具有拮抗作用初筛细菌18株。通过室内盆栽试验，进一步对初筛菌株的防病能力进行评估，最终得到具拮抗作用又有盆栽防治作用的菌株6株。综合拮抗和盆栽防病能力，选取FJ17-4拮抗菌为代表，通过形态学、生理生化及分子生物学16srDNA鉴定，所分离菌株FJ17-4为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis）。其形态学特征如图1所示：菌株革兰氏染色呈阳性；在LB培养基平板上，菌落表面扁平，粗糙不透明，乳白色，边缘不整齐，表面干燥有褶皱，菌落中央凹状突起（图1）；扫描电镜观察其菌体呈短杆状（图2），最适生长温度为28℃；其生理生化特征如表1-表3所示，其16srDNA序列如SEQIDNo.1所示，基于16SrRNA基因序列比对结果系统发育树如图3所示。表1菌株FJ17-4生理生化特性-酶活、碳源氧化+：阳性反应；-：阴性反应；W：弱阳性反应表2菌株FJ17-4生理生化特性-利用碳源产酸+：阳性，-：阴性，w：弱阳性表3菌株FJ17-4生理生化特性-碳源利用+：阳性，-：阴性，w：弱阳性实施例2：FJ17-4菌株对黄瓜疫病菌的拮抗活性用对峙培养法，将保存于4℃中的黄瓜疫病菌接种到PDA平板上活化，待真菌长满平板后用灭菌的打孔器从菌落外边缘均匀的打成直径为5mm的圆形菌块。将菌丝块接种在改良的NB培养基平板（蛋白胨5g，葡萄糖10g，肉汁浸膏3g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH=7.2）中央，在其四周距中心约25mm处分别接种FJ17-4，试验以清水为对照组。25℃培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用。

【技术特征摘要】
1.一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusve...

【专利技术属性】
技术研发人员：游泳，兰成忠，阮宏椿，
申请(专利权)人：福建省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35