一种解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用，属于水产微生物技术领域，本发明专利技术的解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillu samyloliquefaciens)NC58，于2017年4月10日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:14009，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为青岛农业大学。本发明专利技术的解淀粉芽孢杆菌NC58可有效防治多种水产动物病害，减少抗生素及消毒剂的用量及其在水体中的累积，防止环境污染，有利于提高水产品的质量和产量，经济效益和社会效益十分显著。

【技术实现步骤摘要】
一种解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
本专利技术属于水产微生物
，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。
技术介绍
刺参被称为“海产八珍”之首，具有很高的营养价值和药用价值，目前已成为我国北方地区最重要的名贵水产养殖品种之一。近年来由于对刺参的需求增加，养殖面积不断加大，刺参病害加重、产量下降。由灿烂弧菌和假交替单胞菌引起的刺参“腐皮综合症”，是危害刺参严重的病害之一，越冬保苗期幼参和养成期刺参一旦引起感染，死亡率高达到90％以上，给养殖户带来了严重的经济损失，制约着刺参养殖业的健康发展。目前，养殖户在养殖过程中主要是采用抗生素、水体消毒方法进行防治。但是抗生素及消毒剂的长期使用，不仅对环境造成污染，使病原菌产生耐药性、防病效果下降，同时影响刺参生长和刺参抗生素残留超标。因此生产中急需一种有效、安全、环保的控制刺参等水产养殖病害新技术。应用微生物制剂控制刺参病害是一种新途径，它主要是利用具有拮抗作用的益生菌与刺参病原微生物之间的拮抗作用，抑制引起刺参病害的病原菌生长，有效防治刺参病害。
技术实现思路
针对现有技术中化学防治存在的环境污染和食品安全等问题，本专利技术的目的是提供一种可有效防治多种水产动物病害的解淀粉芽孢杆菌NC58及其在水产养殖中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案予以实现：解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58，于2017年4月10日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14009，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为青岛农业大学。在上述方案的基础上，所述的解淀粉芽孢杆菌在防治水产动物病原菌中的应用。在上述方案的基础上，所述水产动物为刺参、虾和鱼。在上述方案的基础上，所述病原菌为刺参腐皮综合征病原菌、虾病原弧菌、鱼腐病病原菌。解淀粉芽孢杆菌菌剂，由保藏编号为CGMCCNo.14009的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58制成。在上述方案的基础上，所述解淀粉芽孢杆菌菌剂为液体菌剂、固体菌剂或者粉体菌剂。在上述方案的基础上，所述的解淀粉芽孢杆菌菌剂在防治水产动物病原菌中的应用。在上述方案的基础上，所述水产动物为刺参、虾和鱼。在上述方案的基础上，所述病原菌为刺参腐皮综合征病原菌、虾病原弧菌、鱼腐病病原菌。防治水产动物病原菌的方法，将保藏编号为CGMCCNo.14009的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58或其菌剂添加到水体中。本专利技术的有益效果：本专利技术的解淀粉芽孢杆菌NC58能有效抑制刺参腐皮综合征病原菌灿烂弧菌和假交替单胞菌、虾腐病病原菌假单胞菌与鱼腐病病原菌哈维氏弧菌的生长，本专利技术的解淀粉芽孢杆菌NC58制成的菌剂可有效预防刺参腐皮综合征病害；NC58可以产生多种酶，改善水质。使用本专利技术所述NC58预防水产动物病害，可以减少抗生素及消毒剂的用量及其在水体中的累积，防止环境污染，有利于提高水产品的质量和产量，经济效益和社会效益十分显著。附图说明图1菌株NC58的菌落形态；图2解淀粉芽孢杆菌NC58对刺参病原菌-灿烂弧菌的抑制作用；图3解淀粉芽孢杆菌NC58对刺参病原菌-假交替单胞菌的抑制作用；图4解淀粉芽孢杆菌NC58对鱼腐病原菌-哈维氏弧菌的抑制作用；图5解淀粉芽孢杆菌NC58对虾腐病原菌-假单胞菌的抑制作用；图6NC58对刺参腐皮综合征的防治效果分析；图7解淀粉芽孢杆菌NC58产酶鉴定。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1菌株的分离试验所用2216E培养基：蛋白胨5g，酵母提取物1g，磷酸高铁0.01克g，氯化钠30g，琼脂粉18g，调节pH至7.6，加热使其溶解，最后定容到1000mL，121℃灭菌20min。采用10倍系列梯度稀释分离法在2216E营养平板上对2014年5月采集自山东省青岛市红岛刺参养殖池的底泥进行微生物分离，通过分区划线法纯化。在2216E平板上，纯化的菌株采用滤纸片法，分别与常见水产动物病原菌进行平板拮抗试验，最终筛选得到对常见水产动物病原菌具有强烈抑制作用的菌株NC58。实施例2菌株的鉴定1、形态学鉴定和生理生化特性检测将菌株NC58接种到2216E平板上，25℃恒温培养48h，观察菌落生长情况，挑取菌体制备涂片，进行革兰氏染色，显微观察菌体形态和芽孢形成情况，进行形态学鉴定。采用常规方法进行生理生化特性检测(东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册，第一版.北京,科学出版社,2001)。结果如图1所示：菌株NC58菌落圆形，边缘整齐，不透明；革兰氏反应阳性，菌体杆状，形成芽孢；芽孢中生，芽孢卵圆形，胞囊膨大。该菌株硝酸盐还原、接触酶、淀粉水解、L-阿拉伯糖产酸、D-木糖产酸、D-甘露醇产酸实验反应为阳性，柠檬酸盐利用、酪朊水解实验反应为阴性。2、分子生物学鉴定挑取NC58菌株单菌落接种于2216E液体培养基中28℃、200rpm振荡培养18h，采用DNA提取试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司生产)提取细菌基因组。2.116SrRNA基因序列的测定利用16SrRNA基因通用引物，进行16SrRNA基因的PCR扩增，引物序列如下：27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′(SEQIDNO:1)1492R：5′-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′(SEQIDNO:2)PCR反应体系(50μL)：PCR反应条件：94℃预变性4min；94℃变性0.5min、51℃退火0.5min、72℃延伸1.5min，共35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶中进行电泳鉴定，切胶回收目的条带，与pMD18-Tvector连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，菌落PCR鉴定筛选阳性克隆测序，测序由上海生工生物工程有限公司完成。获得菌株NC58的16SrRNA基因序列(1514bp)如SEQIDNO:3所示：SEQIDNO:3：该序列与解淀粉芽孢杆菌模式菌株NBRC15535的16SrRNA(BacillusamyloliquefaciensstrainNBRC1553516SribosomalRNAgene，GenBank：NR_041455)序列相似性为99.86％。2.2gyrB基因序列的测定促旋酶亚基B基因(gyrasesubunitBgene，gyrB)扩增引物为：gyrB1F：5'-CAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3'(SEQIDNO:4)gyrB2R：5'-CCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3'(SEQIDNO:5)PCR反应体系(50μL)：PCR扩增条件为：95℃4min；94℃30s，48℃0.5min，72℃2min，35个循环；72℃10min。扩增结束后，取5μLPCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶中进行电泳检测，回收目的条带后转化DH5α感受态细胞，挑取阳性克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：为解淀粉芽孢杆菌(Bacillu samyloliquefaciens)NC58，保藏编号为CGMCC NO:14009。

【技术特征摘要】
1.解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58，保藏编号为CGMCCNO:14009。2.解淀粉芽孢杆菌菌剂，其特征在于：由保藏编号为CGMCCNO:14009的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58制成。3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述菌剂为液体菌剂、固体菌剂或者粉体菌剂。4.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在防治水产动物病原菌中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述水产动物为刺参、虾...

【专利技术属性】
技术研发人员：咸洪泉，李雅华，朱伟，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37