一种枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用，属于水产微生物技术领域。所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NC108，于2017年4月10日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:14010，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为青岛农业大学。本发明专利技术所述枯草芽孢杆菌NC108，可以迅速降低水体中氨态氮、亚硝酸盐含量，降解藻类，并且对刺参腐皮综合征具有一定的拮抗性；可以减少化学农药的用量及其在水体中的累积，防止环境污染，有利于提高水产动物的质量和产量，经济效益和社会效益十分显著。

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
本专利技术属于水产微生物
，具体涉及一种枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。
技术介绍
随着水产养殖模式的逐渐转变，高密度、集约化的养殖加剧了水体恶化进程，养殖业对周边环境及海区的污染不断加重。养殖中的污染主要来源于过量投喂的饵料，水产动物的排泄物和生物遗骸溶出或分解产生的N、P营养盐和有机质，以及在养殖过程中所投放的化学或抗生素类药物残留等；因此，底泥净化成为保持水质优良的重要措施，对实现水产养殖的高产优质具有重要意义。净化分物理、化学和生物方法，其中，功能微生物具有效率高、针对性强和环境友好等特点，具有广阔的发展前途。
技术实现思路
针对现有水产养殖模式中水体恶化的问题，本专利技术的目的在于提供一种可有效迅速净化水体，并具有杀藻、防治水产病原微生物的枯草芽孢杆菌。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：枯草芽孢杆菌，为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NC108，于2017年4月10日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO:14010，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为青岛农业大学。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌16SrRNA的序列如SEQIDNO:3所示。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌gyrB基因的序列如SEQIDNO:6所示。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌分离于刺参养殖池底污泥。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌菌落圆形，边缘不整齐，不透明，污白色；单个细胞0.7～0.8×2.2～2.8微米，革兰氏阳性，芽孢形成后菌体不膨大，芽孢0.6～0.8×1.0～1.5微米，位于菌体中央或稍偏，柱状。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌具有如下特性：能清除水体中的氨态氮和亚硝态氮；具有杀藻作用；对灿烂弧菌和假交替单胞菌具有抑制作用。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌在水质调控中的应用。在上述方案的基础上，具体的应用是枯草芽孢杆菌NC108用于降低水体中氨态氮(NH4-N)、亚硝态氮(NO2-N)含量和增加水体溶解氧、透明度。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌在溶藻中的应用。在上述方案的基础上，所述的枯草芽孢杆菌在防治病原菌引起的水产动物病害中的应用。在上述方案的基础上，所述病原菌包括灿烂弧菌和假交替单胞菌。枯草芽孢杆菌菌剂，由保藏编号为CGMCCNO:14010的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NC108制成。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌菌剂在水质调控中的应用，具体的应用是枯草芽孢杆菌NC108用于降低水体中氨态氮(NH4-N)、亚硝态氮(NO2-N)含量和增加水体溶解氧、透明度。在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌菌剂在溶藻中的应用。在上述方案的基础上，所述的枯草芽孢杆菌菌剂在防治病原菌引起的水产动物病害中的应用，所述病原菌包括灿烂弧菌和假交替单胞菌。本专利技术的有益效果：本专利技术所述枯草芽孢杆菌NC108分离自刺参养殖池底泥。使用本专利技术所述枯草芽孢杆菌NC108，可以迅速降低水体中氨态氮、亚硝酸盐含量，对小球藻具有杀伤作用，并且对水产动物病原菌灿烂弧菌和假交替单胞菌具有显著的抑制作用，可用于防治刺参腐皮综合征。本专利技术的枯草芽孢杆菌NC108不仅能够净化水体、去除杂藻，还可以减少化学农药的用量及其在水体中的累积，防止环境污染，有利于提高水产动物的质量和产量，经济效益和社会效益十分显著。附图说明图1菌株NC108的菌落形态；图2不同添加量枯草芽孢杆菌NC108的杀藻性；图3不同作用时间枯草芽孢杆菌NC108的杀藻性；图4不同pH下枯草芽孢杆菌NC108的杀藻性；图5枯草芽孢杆菌NC108对刺参病原菌-假交替单胞菌的抑制作用；图6枯草芽孢杆菌NC108对刺参病原菌-灿烂弧菌的抑制作用。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1菌株的分离采用10倍系列梯度稀释分离法在2216E营养平板上对2014年5月采集自山东省青岛市红岛刺参养殖池的底泥进行微生物分离，通过分区划线法纯化。所用2216E培养基：蛋白胨5g，酵母提取物1g，磷酸高铁0.01克g，氯化钠30g，琼脂粉18g，调节pH至7.6，加热使其溶解，最后定容到1000mL，121℃灭菌20min。在2216E平板上，纯化的菌株采用滤纸片法，分别与常见水产动物病原菌进行平板拮抗试验，最终筛选得到对常见水产动物病原菌具有强烈抑制作用的菌株NC108。实施例2菌株NC108的鉴定1、形态学鉴定和生理生化特性检测将分离到的菌株接种到2216E平板上，25℃恒温培养48h，观察菌落生长情况，挑取菌体制备涂片，进行革兰氏染色，显微观察菌体形态和芽孢形成情况，进行形态学鉴定。采用常规方法进行生理生化特性检测(东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册，第一版.北京,科学出版社,2001)。结果表明：菌株菌落形态如附图1所示：菌落圆形，边缘不整齐，不透明，污白色；单个细胞0.7～0.8×2.2～2.8微米，革兰氏阳性，芽孢形成后菌体不膨大，芽孢0.6～0.8×1.0～1.5微米，位于菌体中央或稍偏，柱状。该菌株硝酸盐还原、接触酶、淀粉水解、L-阿拉伯糖产酸、D-木糖产酸、D-甘露醇产酸实验、柠檬酸盐利用、酪朊水解实验反应均为阳性。2、分子生物学鉴定挑取菌株单菌落接种于2216E液体培养基中28℃、200rpm振荡培养18h，采用DNA提取试剂盒(购自北京百泰克生物技术有限公司)提取细菌基因组。2.116SrRNA基因序列的测定利用细菌16SrRNA基因通用引物，进行16SrRNA基因的PCR扩增，引物序列如下：27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′(SEQIDNO:1)1492R：5′-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′(SEQIDNO:2)PCR反应体系(50μL)：PCR反应条件：94℃预变性4min；94℃变性0.5min、51℃退火0.5min、72℃延伸1.5min，共35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶中进行电泳鉴定，切胶回收目的条带，与pMD18-Tvector连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，菌落PCR鉴定筛选阳性克隆测序，测序由上海生工生物工程有限公司完成。获得菌株NC108的16SrRNA基因序列(1514bp)如SEQIDNO:3所示：SEQIDNO:3：该序列与枯草芽孢杆菌DSM10菌株的16SrRNA(BacillussubtilisstrainDSM1016SribosomalRNAgene，GenBank：AJ276351.1)序列相似性为99.60％。2.2gyrB基因序列的测定促旋酶亚基B基因(gyrasesubunitBgene，gyrB)扩增引物为：gyrB1F：5'-CAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3'(SEQIDNO:4)gyrB2R：5'-CCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3'(SEQID本文档来自技高网...

【技术保护点】
枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NC108，保藏编号为CGMCC NO:14010。

【技术特征摘要】
1.枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NC108，保藏编号为CGMCCNO:14010。2.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在水质调控中的应用。3.根据权利要求2的应用，其特征在于：具体的应用是枯草芽孢杆菌NC108用于降低水体中氨态氮(NH4-N)、亚硝态氮(NO2-N)含量和增加水体溶解氧、透明度。4.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在溶藻中的应用。5.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在防治病原菌引起的水产动物病害中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雅华，咸洪泉，李树文，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37