防治苹果果实轮纹病的生防菌季也蒙毕赤酵母Y‑1及其生防制剂制造技术

本发明专利技术涉及一株防治苹果果实轮纹病的生防菌株Y‑1及其在苹果果实轮纹病防治中的应用，属于植物病害生物防治技术领域。该菌株为季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y‑1，菌种保藏号为CCTCC NO:M2015814。利用上述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y‑1制备用于防治苹果果实轮纹病的生防制剂，对多种致病真菌具有显著的防治效果。本发明专利技术所提供的生防制剂活性成分季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y‑1具有防治效果稳定，持效性长和防病谱广，对环境友好等特点。本发明专利技术生防菌株Y‑1繁殖速度快，培养条件简单，易于保存和工业生产，具有良好的开发和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
防治苹果果实轮纹病的生防菌季也蒙毕赤酵母Y-1及其生防制剂
本专利技术涉及植物病害生物防治
，特别涉及一种防治苹果果实轮纹病的生防菌季也蒙毕赤酵母Y-1及其生防制剂。
技术介绍
苹果含有丰富的碳水化合物、维生素和无机盐等物质，是人们重要的营养来源和物质基础。在我国苹果作为重要的经济作物和出口水果，栽培面积和产量均居世界首位，然而，苹果出口率不足总产量的3％，在国际上的市场占有率与我国苹果生产大国的地位极不相称，储藏期病害是造成该现象的一个重要因素，苹果采后环节因真菌感染而造成的病害给人们带来了巨大的损失。由葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea引起的苹果果实轮纹病是目前危害最大的果实病害之一，该病菌在5月份即可侵入苹果幼果，近成熟期大量发生，由于病菌潜伏期长，在苹果储藏和运输过程中造成烂果，也是重要的储藏期病害。目前，我国主栽的富士、红星、乔纳金等苹果品种均对轮纹病菌非常敏感。一般年份烂果率为5％～20％，大发生年份烂果率达80％以上。2013年，山东部分苹果产区，套袋栽培苹果轮纹烂果率为20％～30％，重病果园烂果率高达70％以上。有效控制果实轮纹病对于提高苹果果品质量及采后贮藏保鲜具有重要意义。目前，生产上防治果实苹果轮纹病以套袋保护为主，由于苹果套袋成本逐年上涨，苹果的无袋栽培已成为必然趋势，但是果实轮纹病是苹果无袋栽培首先要解决的关键问题。苹果采后果实轮纹病的防治主要依靠化学药剂浸泡果实的方法，但是化学杀菌剂的药剂残留、病原菌易对其产生抗性和环境污染严重等问题已日趋严重，多种杀菌剂已被限制或禁止使用。因此，寻求可替代化学杀菌剂的安全有效防治措施已成为苹果轮纹病生产和采后贮藏中亟待解决的问题。大量研究表明，生物防治因其高效和无污染的特点，是解决农业可持续发展的有效途径，有的生防制剂已在生产中得到应用。酵母因其具有生长繁殖能力强、遗传稳定、广谱抗菌、与化学杀菌剂兼容，且不产生有毒物质，对人体没有危害，对生长环境要求不苟刻等优点，而成为生防微生物中最最受关注的生防菌。以有效生防微生物取代化学杀菌剂，用于苹果果实轮纹病及苹果采后病害的防治已显示出巨大的应用前景。
技术实现思路
本专利技术针对目前农业生产中苹果生产和储藏期主要病害果实轮纹病防治难度大，成本高，化学农药抗性日益突出，农药残留高等问题，筛选出一株高效生防菌株并制备生防制剂，对苹果果实轮纹病进行有效防治。以此减少化学药剂的使用次数和使用量，消弱其对环境的破坏以及对人类身体健康的影响，并可延迟苹果轮纹病菌抗、耐药菌株的出现，以实现苹果产业向着安全、高效、可持续的方向发展。本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术从葡萄果实表面分离、筛选获得一株用于苹果果实轮纹病生物防治的酵母菌株Y-1，经形态学观察、生理生化特性及ITS序列分析鉴定为季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)，该菌株已于2015年12月31日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏号：CCTCCNO:M2015814，经检验存活。利用上述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1制备用于防治苹果果实轮纹病的生防制剂。在上述方案的基础上，使用时将季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1制备成菌悬液。在上述方案的基础上，所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1菌悬液通过喷施或浸润的方式施用于苹果。在上述方案的基础上，所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1菌悬液浓度为103～108cfu·mL-1，最优浓度为107cfu·mL-1。本专利技术有益效果：本专利技术季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1对苹果果实轮纹病有显著的防治效果，实施例的研究表明，本专利技术的生防菌株Y-1可显著抑制轮纹病菌菌丝的生长，且抑菌谱较广，除苹果轮纹病菌外，还对果蔬采后灰霉病菌、果蔬采后青霉病菌、苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、苹果炭疽病菌、苹果霉心病菌、桃褐腐病菌、葡萄白腐病菌、葡萄炭疽病菌等多种果蔬病原真菌具有显著的拮抗作用。其中，所述果蔬采后灰霉病菌为Botrytiscinerea；所述果蔬采后青霉病菌为Penicilliumexpansum；苹果树腐烂病菌为Valsamali；梨树腐烂病菌为Valsapyri；苹果炭疽病菌为Glomerellacingulata；苹果霉心病菌为Trichotheciumroseum或Alternariaalternata或Fusariumspp；桃褐腐病菌为Moniliniafructicola；葡萄白腐病菌为Conielladiplodiella；葡萄炭疽病菌为Colletotrichumgloeosporioides。本专利技术所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1细胞培养液和菌悬液对苹果果实轮纹病的防治效果均在92％以上，且防治效果稳定。本专利技术生防制剂在果树病害的生物防治中具有持续有效、防治效果好、无污染、对人畜安全、无残留、特异性强等优点，且有利于保护环境、保持生态平衡。附图说明图1所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1在YPD琼脂培养基上的菌落形态；图2季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1提取DNA的ITS序列PCR扩增示意图；图中M为核酸MarkerDL2000；1-8均为菌株Y-1基因组DNA的ITS序列扩增结果；图3季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用；图中A为苹果轮纹病菌在不添加菌株Y-1的PDA上培养3d的菌落；图中B-F为苹果轮纹病菌在添加菌株Y-1菌体浓度分别为103，104，105，106和107cfu·mL-1的PDA上培养3d的菌落；图4季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1细胞培养液对苹果轮纹病的防治效果；图中左侧为接种YPD液体培养基后再接种轮纹病菌的对照；图中右侧为菌株Y-1细胞培养液对苹果果实轮纹病的防治效果；图5季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1不同浓度菌悬液对苹果轮纹病的防治效果；图中A为接种PDA培养基再接种轮纹病菌的对照；图中B，C和D分别为Y-1菌悬液106cfu·mL-1，107cfu·mL-1和108cfu·mL-1对苹果轮纹病的防治效果。具体实施方式以下实施例仅用于对本专利技术做进一步的描述，并不是用来限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1的分离与菌株鉴定1.1菌株的分离与筛选从山东烟台商品化葡萄园采集成熟健康葡萄，从葡萄表面分离菌株，采用常规梯度稀释涂布分离法，用PDA培养基(含有硫酸链霉素)和YPD琼脂培养基(含有硫酸链霉素)分别在28℃条件下培养，挑取菌落形态差异明显的菌落，在YPD琼脂培养基上纯化保存，并以苹果轮纹病菌为靶标病原菌进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治苹果果实轮纹病的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y‑1，于2015年12月31日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2015814。

【技术特征摘要】
1.一种防治苹果果实轮纹病的季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1，于2015年12月31日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCCNO:M2015814。2.一种利用权利要求1所述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1制备的生防菌剂。3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于用于防治苹果果实轮纹病。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1菌悬液通过喷施或浸润的方式施用于苹果。5.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y-1菌悬液浓度为103～108cfu·mL-1，最优浓度为107cfu·mL-1。6.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于所述生防菌剂的制备方法如下：1)培养基的制备：酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基：酵母提取物(YeastExtract)10g，蛋白胨(Peptone)20g，溶解于900mL水中，加入20g琼脂粉，121℃高压蒸汽灭菌20min后，加入100mL已灭...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，孟璐璐，张清明，练森，李保华，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37