一种低成本合成ARK‑Cu的方法技术

本发明专利技术公开了一种低成本合成ARK‑Cu的方法，采用液相合成法，将Cbz‑Ala‑OH与H‑Arg(NO2)‑OH连成二肽Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑OH，再与Lys(Cbz)‑OH反应，生成全保护三肽Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑Lys(Cbz)‑OH，然后经氢气/钯碳脱保护生成H‑Ala‑Arg‑Lys‑OH，最后在水中与醋酸铜生成ARK‑Cu。本发明专利技术合成方法简单，无需柱色谱纯化，用乙酸乙酯重结晶就可得到纯度97％以上的Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑Lys(Cbz)‑OH，合成低成本，可用于大量合成ARK‑Cu。

【技术实现步骤摘要】
一种低成本合成ARK-Cu的方法
本专利技术属于多肽合成
，具体涉及一种铜肽的合成方法。
技术介绍
ARK-Cu是一种新型铜肽，是由丙氨酸、精氨酸和赖氨酸组成的三肽与铜形成的络合物，具有深层修复疤痕，修复老损细胞，灭菌以及深层美白等功效。ARK-Cu是基于GHK-Cu的一种改构，用丙氨酸替代甘氨酸，用精氨酸替代组氨酸。现在目前针对这种三肽的合成有固相合成和液相合成两种，固相合成的优点在于快速、方便、产率高、纯度好，缺点在于成本高，以及将肽从固相树脂上切割下来经常用三氟乙酸，因此非常依赖反向色谱纯化以及离子交换。液相合成的优点是成本低，但是合成的纯度较差，每步中间体都需要处理，纯化，周期太长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低成本、大量合成ARK-Cu的方法。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案由下述步骤组成：1、合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO2)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，得到Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH。2、合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，用乙酸乙酯重结晶，得到纯度97％以上的Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH。3、合成H-Ala-Arg-Lys-OH将Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇和水的混合溶剂中，加入钯碳，通氢气脱保护，生成H-Ala-Arg-Lys-OH，即ARK。4、合成ARK-Cu将H-Ala-Arg-Lys-OH与醋酸铜在水中络合，经冷冻干燥，得到ARK-Cu。上述步骤1中，优选Cbz-Ala-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO2)-OH、N,N'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选4～7小时。上述步骤2中，优选Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)-OH、N,N'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选2～5小时。上述步骤4中，优选H-Ala-Arg-Lys-OH与醋酸铜的摩尔比为1:1。本专利技术的创新点和有益效果：1、本专利技术以Cbz-Ala-OH、H-Arg(NO2)-OH、H-Lys(Cbz)-OH为起始原料，最后合成的全保护三肽Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH，在脱除保护的时候，用氢气/钯碳还原即可得到三肽H-Ala-Arg-Lys-OH，避免了传统意义上常用三氟乙酸脱除保护，避免了用三氟乙酸脱保护时带来的副产物，以及避免了用三氟乙酸脱完保护后必须用反相色谱纯化除杂质，以及再用离子交换除三氟乙酸的繁琐过程。2、本专利技术用液相法直接合成全保护三肽Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH的粗品，无需柱色谱纯化，用乙酸乙酯重结晶就可以到达97％以上的纯度，克服了常规液相合成中每步中间体都需要柱色谱纯化，操作非常繁琐的技术问题。3、本专利技术用N,N'-二异丙基乙胺(DIC)代替N,N'‐二环己基碳酰亚胺(DCC)作为缩合剂，DCC的副产物DCU很难除去，即使柱色谱纯化都很难去除干净，但是用DIC就很好的解决了这个问题，在用乙酸乙酯重结晶的过程中，就可以完全除去。4、本专利技术ARK在与铜的络合中，用水作为溶剂，用醋酸铜为铜的供体，在等摩尔条件下生成ARK-Cu，反应完后，无需处理，直接将水冻干，就得到ARK-Cu，简单方便。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实例。实施例11、合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH将44.6g(0.2mol)Cbz-Ala-OH搅拌溶解于600mLN,N'-二甲基甲酰胺中，然后加入27.6g(0.24mol)N-羟基琥珀酰亚胺、37.8g(0.30mol)N,N'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入44g(0.2mol)H-Arg(NO2)-OH、26g(0.2mol)N,N'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入3L水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到76gCbz-Ala-Arg(NO2)-OH，产率90％。2、合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH将63.75g(0.15mol)Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH搅拌溶解于750mLN,N'-二甲基甲酰胺中，然后加入20.7g(0.18mol)N-羟基琥珀酰亚胺、28.35g(0.225mol)N,N'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入42g(0.15mol)Lys(Cbz)-OH、19.5g(0.15mol)N,N'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入3L水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到82.5gCbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH粗品，用乙酸乙酯重结晶，得到68.7g纯度97％的Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH，产率67％。3、合成H-Ala-Arg-Lys-OH将68.7gCbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH搅拌溶解于600mL水与甲醇体积比为1:1的混合溶剂中，加入5g10％钯碳，常温常压下通入氢气，搅拌5小时，反应完全，减压蒸干甲醇，加入300mL乙酯，搅拌，分层，取水层，将水层冻干，得到35gH-Ala-Arg-Lys-OH，产率95％。4、合成ARK-Cu将35g(0.093mol)H-Ala-Arg-Lys-OH搅拌溶解于200mL水中，加入18.6g(0.093mol)醋酸铜，室温搅拌2小时，将反应液冷冻干燥，得到40gARK-Cu产率99％。实施例21、合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH将89.2g(0.4mol)Cbz-Ala-OH搅拌溶解于1200mLN,N'-二甲基甲酰胺中，然后加入50.6g(0.44mol)N-羟基琥珀酰亚胺、65.52g(0.52mol)N,N'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入96.8g(0.44mol)H-Arg(NO2)-OH、57.2g(0.44mol)N,N'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入6L水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到147gCbz-Ala-Arg(NO2)-OH，产率87％。2、合成Cbz本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低成本合成ARK‑Cu的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：(1)合成Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑OH以N,N'‑二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz‑Ala‑OH与N‑羟基琥珀酰亚胺、N,N'‑二异丙基碳二亚胺、H‑Arg(NO2)‑OH、N,N'‑二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，得到Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑OH；(2)合成Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑Lys(Cbz)‑OH以N,N'‑二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑OH与N‑羟基琥珀酰亚胺、N,N'‑二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)‑OH、N,N'‑二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，用乙酸乙酯重结晶，得到纯度97％以上的Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑Lys(Cbz)‑OH；(3)合成H‑Ala‑Arg‑Lys‑OH将Cbz‑Ala‑Arg(NO2)‑Lys(Cbz)‑OH溶解于甲醇和水的混合溶剂中，加入钯碳，通氢气脱保护，生成H‑Ala‑Arg‑Lys‑OH；(4)合成ARK‑Cu将H‑Ala‑Arg‑Lys‑OH与醋酸铜在水中络合，经冷冻干燥，得到ARK‑Cu。...

【技术特征摘要】
1.一种低成本合成ARK-Cu的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：(1)合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO2)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，得到Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH；(2)合成Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-Arg(NO2)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，用乙酸乙酯重结晶，得到纯度97％以上的Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH；(3)合成H-Ala-Arg-Lys-OH将Cbz-Ala-Arg(NO2)-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇和水的混合溶剂中，加入钯碳，通氢气脱保护，生成H-Ala-Arg-Lys-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王惠嘉，李晨，陈科，张忠旗，郭添，王慧，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61