具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法，本发明专利技术中所述的具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物，其能够很好的抑制SIRT 1的活性，适宜作为标准品及药物开发用；其中所述的提取方法具有较高的收率，成本低、耗时短，操作简便，且所得产品纯度高。

【技术实现步骤摘要】
具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法
本专利技术涉及一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法。
技术介绍
组蛋白去乙酰化是一种重要的组蛋白共价修饰方式，在基因表达中起着非常重要的调控作用，组蛋白去乙酰化主要由组蛋白去乙酰化酶催化完成。SIRT1（silentinformationregulator1）相关蛋白（sirtuins）家族是一组高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的组蛋白去乙酰化酶，广泛存在于从低等生物到人类的各物种中。SIRT1主要定位于细胞核中，具有较高的NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶活性，通过对组蛋白及多种非组蛋白底物的去乙酰化修饰，调节底物的乙酰化水平和活性，从而参与基因表达调控、细胞凋亡、分化等诸多生理过程，进而影响肿瘤等疾病的发生发展。特异性的SIRT1抑制剂作为潜在的药物来源已经引起愈来愈多科学家的关注。近年来，多种不同结构的小分子sirtuin抑制剂被发现或合成，并已有部分小分子抑制剂进入临床研究阶段。花椒为芸香科（Rutaceae）花椒属（ZanthoxylumL）植物花椒（ZanthoxylumbungeanumMaxim.）或青椒（ZanthoxylumschinifoliumSieb.etZucc.）的干燥成熟果皮，是十三种调味料之首，既可食用，又可入药。秋季采收，晒干，除去种子和杂质。我国花椒种质资源十分丰富，花椒产量居世界第一，应用广泛。花椒的化学成分主要有挥发油、生物碱、酰胺、脂肪酸、木脂素和香豆素等，具有多种生理功能。花椒中含有糖苷类化合物，该类化合物具有潜在的SIRT1抑制活性，故本专利技术以花椒为主要研究对象，进行糖苷类化合物的发现和SIRT1抑制活性筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法。为了满足上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：其中R选自以下基团：其中基团R1选自以下基团：其中基团R2和R3各自独立的为以下基团：H、OH、OCH3；其中基团R4选自以下基团：H、甲基、乙基、丙基；其中化合物(e)、(f)、(g)中，6位和9位的绝对构型各自独立的为：（6R,9R）、（6R,9S）、（6S,9R）、（6S,9S）。优选的，一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物的制备方法，其具体步骤如下：1）将花椒用提取溶剂进行提取，所述花椒和提取溶剂的质量比为1:3-20，得提取液，再浓缩提取液至无有机溶剂，得到总浸膏A；2）将总浸膏A溶于水，再利用D101大孔吸附树脂柱层析，或者利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得到不同的浸膏组分；利用D101大孔吸附树脂柱层析，得到的五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；利用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取，得到四个不同的浸膏组分G（石油醚相）、H（乙酸乙酯相）、I（正丁醇相）和J（水相）；3）D101大孔吸附树脂柱层析所得浸膏组分B、C、D、E、F和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取所得浸膏组分G、H、I、J分别进行液质联用仪（HPLC-MS/MS或UPLC-MS/MS）分析，寻找糖苷类化合物所在部位，实验发现浸膏组分C和I为糖苷类化合物部位，且化合物类型相同，对浸膏组分C和I进行SIRT1抑制活性实验测试，实验证实C和I均具有SIRT1抑制活性；4）对浸膏组分C或者I进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂洗脱，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用薄板层析色谱（TLC）定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6或者I-1～I-6；5）对浸膏C-1～C-6或者I-1～I-6进行制备HPLC分离纯化，得到活性化合物，通过核磁共振谱（NMR谱），确定活性化合物的结构。优选的，所述步骤1）中的提取溶剂为水、甲醇/水的混合溶液或者乙醇/水混合溶液，所述甲醇的体积百分数为0-100%，所述乙醇的体积百分数为0-100%。优选的，所述步骤1）中的提取方法有室温冷浸提取、加热回流提取、渗漏提取或超声提取。优选的，所述步骤2）中的利用D101大孔吸附树脂柱层析，所用实验条件为用乙醇/水混合溶液或甲醇/水混合溶液为洗脱溶剂梯度洗脱，梯度洗脱溶剂体积比为水、30%、60%、80%、100%，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积为3-6倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个浸膏组分。优选的，所述步骤2）中利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，所用实验方法为总浸膏A溶于水后，用等体积的石油醚萃取三次，合并石油醚萃取液，浓缩，得到石油醚相，用同样的方法分别进行乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯相和正丁醇相，水相浓缩得到水相。优选的，所述提取方法室温冷浸提取每次需要将花椒在提取溶剂中浸泡5-9天，浸提次数为1-4次；所述提取方法加热回流提取的加热温度为30-100℃，每次提取10-300分钟，提取次数为1-4次，所述提取方法渗漏提取需要将花椒在提取溶剂中浸泡6-24h，再置于渗漏装备；所述提取方法超声提取的提取温度为30-100℃，频率为20-100Hz，功率为70-1000W，每次提取0.1-2.0小时，提取次数为1-4次。优选的，所述步骤3）中UPLC-MS/MS分析所用色谱柱为WatersACQUITYUPLC®HSSC18column(2.1×50mm,1.8μm)；HPLC-MS/MS分析所用色谱柱为HanbanSci&TechMegresC18column(4.6×250mm,5μm)；流动相为乙腈:0.5%冰醋酸水=A:B；乙腈:0.5%冰醋酸水的洗脱比例：1-20min，A2-15%；20-24min，A15-50%；24-28min，A50-70%；28-32min，A70-92%；流速为0.3mL/min，进样体积：2μL，检测器：PDA，检测波长：275nm，离子源：电喷雾离子源。优选的，所述步骤4）中硅胶柱层析所用洗脱剂氯仿-甲醇中氯仿与甲醇的体积比为30:1～1:3。优选的，所述步骤5）中制备HPLC分离所用色谱柱为半制备BenetnachC18柱（HanbanSci&Tech,10.0×250mm,10μm），流动相为甲醇-水，甲醇与水的洗脱比例为1:20～1:1，流速为2～5mL/min，进样体积：1-100μL，检测器：紫外检测器，检测波长：208nm和254nm。本专利技术的有益效果为：1、在癌症的发生发展方面，SIRT1主要通过调节p53基因（p53基因是人体抑癌基因）进而调节癌症的发生发展过程，SIRT1抑制剂被应用于多种癌症研究，如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、慢性骨髓性白血病、肺癌等。具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物组分的发现及其制备方法的研究，为癌症的治疗提供了一种研究思路，为抗癌药物的研制提供了物质基础。2、本研究方法运用HPLC-MS/MS或UPLC-MS/MS指导研究工作，实现糖苷类化合物的快速发现，节省了时间和溶剂、试剂，提高了效率。运用TLC指导研究工作，合并相同组分，提供了分离效率。3、半制备HPLC分离纯化样品，制备单体化合物，获得高纯度（99%以上）的化合物，确本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：

【技术特征摘要】
1.一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：其中R选自以下基团：其中基团R1选自以下基团：其中基团R2和R3各自独立的为以下基团：H、OH、OCH3；其中基团R4选自以下基团：H、甲基、乙基、丙基；其中化合物(e)、(f)、(g)中，6位和9位的绝对构型各自独立的为：（6R,9R）、（6R,9S）、（6S,9R）、（6S,9S）。2.根据权利要求1所述的一种具有SIRT1抑制活性的糖苷类化合物的制备方法，其特征在于具体步骤如下：1）将花椒用提取溶剂进行提取，所述花椒和提取溶剂的质量比为1:3-20，得提取液，再浓缩提取液至无有机溶剂，得到总浸膏A；2）将总浸膏A溶于水，再利用D101大孔吸附树脂柱层析，或者利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得到不同的浸膏组分；利用D101大孔吸附树脂柱层析，得到的五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；利用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取，得到四个不同的浸膏组分G（石油醚相）、H（乙酸乙酯相）、I（正丁醇相）和J（水相）；3）D101大孔吸附树脂柱层析所得浸膏组分B、C、D、E、F和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取所得浸膏组分G、H、I、J分别进行液质联用仪（HPLC-MS/MS或UPLC-MS/MS）分析，寻找糖苷类化合物所在部位，实验发现浸膏组分C和I为糖苷类化合物部位，且化合物类型相同，对浸膏组分C和I进行SIRT1抑制活性实验测试，实验证实C和I均具有SIRT1抑制活性；4）对浸膏组分C或者I进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂洗脱，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用薄板层析色谱（TLC）定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6或者I-1～I-6；5）对浸膏C-1～C-6或者I-1～I-6进行制备HPLC分离纯化，得到活性化合物，通过核磁共振谱（NMR谱），确定活性化合物的结构。3.根据权利要求2所述一种用于SIRT1抑制活性的糖苷类化合物的提取方法，其特征在于：所述步骤1）中的提取溶剂为水、甲醇/水的混合溶液或者乙醇/水混合溶液，所述甲醇的体积百分数为0-100%，所述乙醇的体积百分数为0-100%。4.根据权利要求3所述的一种用于SIRT1抑制活性的糖苷类化合物的提取方法，其特征在于：所述步骤1）中的提取方法有室温冷浸提取、加热回流提取、渗漏提取或超声提取。5.根据权利要求4所述一种用于SIRT1抑制活性的糖苷类化合物的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中的利用D101大孔吸附树脂柱层析，所用实验条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨军丽，孟宪华，师彦平，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62