一种细胞保存液制造技术

本发明专利技术提供一种细胞保存液，包括以下组分：30‑120mM渗透压稳定剂、2‑6mM糖类物质、0‑10mM还原剂、0‑120mM电解质溶液、25‑60mM氨基酸；所述细胞保存液的渗透压为310‑350mOsm/L。本发明专利技术的细胞保存液在低温条件下，能够有效降低细胞代谢，减少低温损伤，方便了活细胞在运输过程中的保存，也方便了机构短期保存有功能的活性细胞。

A cell preservation solution

The present invention provides a cell preservation solution, including the following components: 30 120mM osmotic stabilizer, 2 sugar 6mM carbohydrate, 0 10mM reductant, 0 electrolyte solution and 25 60mM amino acid; the osmotic pressure of the cell preservation solution is 310 of 350mOsm/L. The cell preservation solution of the invention can effectively reduce cell metabolism, reduce the damage of low temperature, facilitate the preservation of living cells during the transportation process, and also facilitate the short-term preservation of functional active cells.

【技术实现步骤摘要】
一种细胞保存液
本专利技术属于细胞保存
，具体涉及一种细胞保存液及其应用。
技术介绍
细胞是生物体的基本结构单位，细胞质量将影响着身体状态。细胞广泛应用于科研和临床上，其应用的关键是大量供体细胞的获得和免疫排斥反应的克服，大量供体细胞的获得主要靠体外细胞培养和保存来解决。目前，细胞保存还存在一些问题，如运输不便，临时储存不便，运输过程中细胞活性下降快，细胞容易积聚成团等。细胞长时间运输后细胞的活率很低，细胞大量死亡，直接影响临床效果。因此，在临床医疗中，如何维持细胞活性是一项极大的挑战，在短时间内保存细胞时，往往使用生理盐水或者细胞培养基来维持细胞活性，然而细胞在生理盐水中活性降低速度非常快，细胞在培养液中保存效果也不理想，难以高效保存细胞生物活性。目前细胞低温保存液大多借鉴和采用器官/组织低温保护液和灌洗液，例如HTK液、UW液、Collins液等。这些保护液和灌洗液基础成分比较简单，多为1960-1970年代专利技术，后来，为适用于不同器官/组织的需要，又经过各种改良，可以保存器官10-72小时。这些改良后的保护液和灌洗液现在可用于低温保存细胞，但是保存细胞与保存器官/组织的需求不同，细胞在低温保存液中容易发生以下生理改变：缺乏天然细胞外结构和物质，易发生细胞膜膨胀；更多环境压力造成氧化损伤，生成大量脂质过氧化物，细胞保存液变酸；过多的生长因子和营养提高细胞基础代谢率，生成更多的代谢产物，这些代谢产物堆积进一步有害细胞活性。这些特点导致低温保存的细胞非常容易受到细胞外环境影响，例如细胞保存液的渗透压、离子浓度、能量底物、抗凋亡和抗坏死物质。因此，针对细胞的低温生物学特征，专利技术一种优化的低温细胞保存液是必要的。专利公开号为CN104542578B的专利技术专利公开了一种细胞保护液，该细胞保存液包括白蛋白、葡萄糖、维生素C和保存基础液；保存基础液为复方电解质注射液和复方氨基酸注射液的混合物。在0～4℃条件下，间充质干细胞和免疫细胞在该细胞保存液中保存48h，活力能够保持在90％以上，形态也没有出现变化。但是该保存条件下，细胞长时间保存会使细胞活性发生退化，并且不能满足大规模保存需求。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种细胞保存液，有效延长了细胞保存时间，提高了保存效果，高效维持活性细胞的低温存活。本专利技术的第一方面是提供一种细胞保存液，包括以下组分：30-120mM渗透压稳定剂、2-6mM糖类物质、0-10mM还原剂、0-120mM电解质溶液、25-60mM氨基酸；所述细胞保存液的渗透压为310-350mOsm/L。本专利技术所述细胞保存液，其有益效果在于：有效延长了细胞保存时间，提高了保存效果。进一步地，所述电解质溶液包含：1-20mMNa+、20-120mMK+、7-15mMMg2+、0-0.25mMCa2+。所述电解质溶液中，盐离子的浓度模拟细胞内液，采用低浓度Na+、高浓度K+、高浓度Mg2+、低浓度Ca2+，可降低细胞膜表面离子泵活性，减少酸性物质产生。进一步地，所述氨基酸选自组氨酸、谷氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸中的至少一种。优选地，所述氨基酸选自组氨酸和谷氨酸；所述组氨酸的含量为25-60mM，所述谷氨酸的含量为15-40mM。采用所述氨基酸作为pH缓冲剂，缓冲能力强，能有效防止溶液变酸；加入所述谷氨酸可被细胞合成谷氨酰胺，谷氨酰胺可进一步被合成为谷胱甘肽，也可清除代谢产生的氧化自由基。进一步地，所述渗透压稳定剂选自甘露糖醇和/或乳糖酸。所述渗透压稳定剂能够有效保持细胞稳定性。进一步地，甘露糖醇的浓度为30-80mM，所述乳糖酸的浓度为30-120mM。进一步地，所述糖类物质为葡萄糖和/或果糖。采用葡萄糖、果糖等糖类物质能够作为能量底物提供能量，低温时，细胞代谢降低，提供少量能量底物有助于细胞维持最低代谢；若缺乏，细胞会因缺少能量而活性不好，不能长时间保存；若过量，会无氧糖酵解引起溶液酸化。进一步地，所述还原剂选自α-酮戊二酸、谷胱甘肽、维生素C、N-乙酰-L-半胱氨酸、叔丁基氢醌中的至少一种。所述还原剂能够清除氧化自由基和铵离子，减少氧化损伤。进一步地，所述α-酮戊二酸的浓度为0.5-2mM，所述谷胱甘肽的浓度为3-6mM，所述维生素C的浓度为1-10mM，所述N-乙酰-L-半胱氨酸的浓度为0-5mM，所述叔丁基氢醌的浓度为1-10μM。进一步地，所述细胞保存液中还包含0.1-10mM能量底物。进一步地，所述能量底物选自腺嘌呤、腺苷、还原型谷胱苷肽中的至少一种。优选地，所述能量底物为腺苷。采用所述腺苷作为能量底物可用于合成磷酸腺苷，维持细胞ATP水平，保持细胞的生理活动。进一步地，所述细胞保存液用于保存细胞时的保存温度为0-10℃；优选地，所述细胞保存液用于保存细胞时的保存温度为2-8℃。本专利技术的另一方面在于提供一种细胞保存方法，包括采用上述细胞保存液保存细胞。进一步地，所述细胞选自干细胞或免疫细胞。本专利技术的另一方面在于提供一种组织保存方法，包括采用上述细胞保存液保存组织。本专利技术的另一方面在于提供上述细胞保存液在保存细胞中的应用；优选地，所述细胞为干细胞或免疫细胞。本专利技术的另一个方面在于提供上述细胞保存液在保存组织中的应用；优选地，所述的组织为肝组织、肺组织、肾组织、肝癌旁组织、胆管癌组织、肝癌组织、肺癌组织或卵巢。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术采用氨基酸作为pH缓冲剂，缓冲能力强，能有效防止溶液变酸。(2)本专利技术所述细胞保存液中加入所述谷氨酸可被细胞合成谷氨酰胺，谷氨酰胺可进一步被合成为谷胱甘肽，也可中和代谢产生的酸性物质。(3)本专利技术所述细胞保存液采用所述甘露糖醇和/或乳糖酸作为渗透压稳定剂能够保持细胞膜稳定性。(4)本专利技术所述细胞保存液采用所述葡萄糖、果糖等糖类物质能够作为能量底物提供能量，低温时，细胞代谢降低，提供少量能量底物有助于细胞维持最低代谢；若缺乏，细胞会因缺少能量而活性不好，不能长时间保存；若过量，会无氧糖酵解引起溶液酸化。(5)本专利技术所述细胞保存液采用所述腺苷作为能量底物可用于合成磷酸腺苷，保持细胞的生理活动。(6)本专利技术所述细胞保存液采用所述α-酮戊二酸、谷胱甘肽、维生素C、N-乙酰-L-半胱氨酸、叔丁基氢醌等还原剂能够清除氧化自由基和铵离子，减少氧化损伤。(7)本专利技术所述细胞保存液采用的所述电解质溶液中，盐离子的浓度模拟细胞内液，采用低浓度Na+、高浓度K+、高浓度Mg2+、低浓度Ca2+，可降低细胞膜表面离子泵活性，减少酸性物质产生。附图说明下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。图1显示了不同细胞保存液对骨髓间充质干细胞增殖的影响。图2显示了不同细胞保存液对不同组织活性的影响。具体实施方式除非另作定义，本专利技术权利要求书和说明书中使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属
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【技术保护点】
一种细胞保存液，其特征在于，包括以下组分：30‑120mM渗透压稳定剂、2‑6mM糖类物质、0‑10mM还原剂、0‑120mM电解质溶液、25‑60mM氨基酸；所述细胞保存液的渗透压为310‑350mOsm/L。

【技术特征摘要】
1.一种细胞保存液，其特征在于，包括以下组分：30-120mM渗透压稳定剂、2-6mM糖类物质、0-10mM还原剂、0-120mM电解质溶液、25-60mM氨基酸；所述细胞保存液的渗透压为310-350mOsm/L。2.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述电解质溶液包含：1-20mMNa+、20-120mMK+、7-15mMMg2+、0-0.25mMCa2+。3.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述氨基酸选自组氨酸、谷氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸中的至少一种。4.根据权利要求3所述的细胞保存液，其特征在于，所述氨基酸选自组氨酸和谷氨酸；所述组氨酸的含量为25-60mM，所述谷氨酸的含量为15-40mM。5.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述渗透压稳定剂选自甘露糖醇和/或乳糖酸。6.根据权利要求5所述的细胞保存液，其特征在于，所述甘露糖醇的浓度为30-80mM，所述乳糖酸的浓度为30-120mM。7.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述糖类物质为葡萄糖和/或果糖。8.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述还原剂选自α-酮戊二酸、谷胱甘肽、维生素C、N-乙酰-L-半胱氨酸、叔丁基氢醌中的至少一种。9.根据权利要求8所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢和新，杨秋蕊，翟志敏，吴红平，唐为忠，翟博，
申请(专利权)人：上海赛立维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31