The invention discloses a method for the establishment of a lipopolysaccharide induced programmed necrosis model for piglet liver cells. The following steps are as follows: the piglets were treated with lipopolysaccharide, and the piglets were collected and the serum was isolated from the anterior vena cava of the piglets, and the biochemical indexes in the serum were measured, and the lipopolysaccharide was induced to be induced to piglets. The effects of liver function were observed, the morphological structure of liver tissue and the ultrastructure of liver cells were observed, and the key genes and protein expression of programmed necrosis of liver cells were measured, and the effect of lipopolysaccharide on the programmed necrosis of liver cells in piglets was analyzed. In the technical scheme, using lipopolysaccharide as the inducer, the liver cells are used as the model cells of the cell programmed necrosis model, and the piglet is used as the modeling object. The liver cell programmed necrosis model is successfully established. The operation method is simple and easy, and the key gene of the procedure necrosis of the liver cells is determined. Protein expression has the advantages of reliable and reproducible results.
【技术实现步骤摘要】
一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法
本专利技术涉及细胞程序性坏死研究
,特别涉及一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法。
技术介绍
细胞程序性坏死是一种由死亡受体介导的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)非依赖性细胞死亡模式,通常在凋亡被抑制的情况下发生,死亡细胞具有明显的坏死特征。研究表明,细胞程序性坏死在缺血再灌注和炎症反应等多种因素导致的组织(如肝脏)损伤或坏死中发挥重要作用,有效抑制细胞程序性坏死对这些因素诱导的组织损伤或坏死具有重要的预防和治疗作用。目前常用于诱导细胞程序性坏死的诱导剂包括融合蛋白、病毒转染系统和黍子籽粒蛋白,但是其中涉及复杂的诱导剂制备过程,包括构建载体、转染、诱导等许多步骤,以及涉及脱盐、阳离子交换层析和凝胶层析等繁琐步骤获得纯化蛋白的制备过程,因此,利用此类诱导剂构建细胞程序性坏死模型存在步骤繁琐的缺点。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,旨在成功建立肝脏细胞程序性坏死模型,且建立方法简单、效果稳定可靠。为实现上述目的,本专利技术提出一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,包括如下步骤:对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔猪;从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血清,测定血清中的生化指标,判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响;取待测仔猪的肝脏样品,观察肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构,并测定肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达,分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用。优选地,对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔 ...
【技术保护点】
一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔猪;从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血清,测定血清中的生化指标,判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响;取待测仔猪的肝脏样品,观察肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构,并测定肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达,分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用。
【技术特征摘要】
1.一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔猪;从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血清,测定血清中的生化指标,判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响;取待测仔猪的肝脏样品,观察肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构,并测定肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达,分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用。2.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔猪的步骤中:所述脂多糖为大肠杆菌血清型脂多糖,纯度大于99%,诱导处理的方式为腹膜注射。3.如权利要求2所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,所述大肠杆菌血清型脂多糖的注射量为仔猪每公斤体重注射80~150μg,诱导时长为2~24h。4.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,对试验仔猪进行脂多糖诱导处理,得到待测仔猪的步骤之前,还包括:将试验仔猪饲养在饲养笼中,试验仔猪于22~25℃温度条件下自由采食饮水10天;其中,在对仔猪进行诱导处理前10~13h停止供料。5.如权利要求4所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法,其特征在于,所述试验仔猪为34~36日龄的断奶...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘玉兰,康萍,汪龙梅,朱惠玲,王秀英,
申请(专利权)人:武汉轻工大学,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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