一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法技术

本发明专利技术公开了一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，选取处于壮苗阶段的高的铁皮石斛幼苗，在超净工作台上将其切割，去除种苗残叶、老叶和基部褐化老化组织，按照2叶1心的标准把铁皮石斛切割分离成高度为1‑2cm的单株，接种于装有培养基的培养瓶中，每瓶接种1‑2株，在光照为2000‑3000Lx，温度为20‑25℃培养50‑60天，即得。本发明专利技术方法对铁皮石斛进行组织培养时，生根率高，幼苗长势好。

A method for improving rooting rate of Dendrobium candidum

The invention discloses a culture method of Dendrobium officinale group, which improves the rooting rate, selects the tall Dendrobium seedlings in the stage of the strong seedling stage, cuts the seedlings on the super net work table, removes the leaves of the seedlings, the old leaves and the browning aging tissues of the base, and separates the Dendrobium officinale by the standard of the 2 leaves and 1 hearts into a single plant with a height of 1 2cm. Inoculated in culture bottles containing culture medium, each bottle was inoculated with 1 strains of 2 strains at 2000 3000Lx for illumination and 20 to 25 days for 50 days. The method has high rooting rate and good seedling growth when it is used for tissue culture of Dendrobium candidum.

【技术实现步骤摘要】
一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法
本专利技术涉及一种铁皮石斛的组织培养方法，特别是一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法。
技术介绍
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。石斛碱型倍半萜类生物碱为石斛属植物特有，其中石斛碱是最早发现，研究最多的生物碱；金钗石斛碱与非甾体类抗炎药药理作用相似，具有免疫调节、抗炎、扩张血管等作用。目前，利用组培技术对铁皮石斛在种质保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但优良品种经数次继代或因激素使用不当、培养环境等因素，生根率极低。
技术实现思路
本专利技术的目的，是提供一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，本专利技术方法对铁皮石斛进行组织培养时，生根率高，幼苗长势好。本专利技术是这样实现的：一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其选取处于壮苗阶段的高的铁皮石斛幼苗，在超净工作台上将其切割，去除种苗残叶、老叶和基部褐化老化组织，按照2叶1心的标准把铁皮石斛切割分离成高度为1-2cm的单株，接种于装有培养基的培养瓶中，每瓶接种1-2株，在光照为2000-3000Lx，温度为20-25℃培养50-60天，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁5-15mg、蔗糖5-15mg、地黄提取物1-6mg、丹参汁2-5mg、山茱萸提取物3-9mg、桂圆提取物5-10mg、甘草提取物1-5mg和大枣提取物6-12mg，混匀，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁8-12mg、蔗糖8-12mg、地黄提取物2-4mg、丹参汁3-4mg、山茱萸提取物5-7mg、桂圆提取物7-8mg、甘草提取物2-4mg和大枣提取物8-10mg，混匀，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁10mg、蔗糖10mg、地黄提取物3mg、丹参汁4mg、山茱萸提取物6mg、桂圆提取物7mg、甘草提取物2mg和大枣提取物9mg，混匀，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的地黄提取物这样制备：取地黄，加入8-10倍量的水浸泡10-15min后，煎煮1-2h，过滤，滤渣再加入5-6倍量水提取2-3次，每次20-30min，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，备用；滤渣再加入5-6倍量50-60％的乙醇溶液，回流提取2-3次，每次20-30min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得醇提取液，醇提液与上述水提液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的山茱萸提取物这样制备：取山茱萸，加入6-8倍量60-70％的乙醇溶液回流提取2-3次，每次20-30min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得醇提取液，浓缩成浓至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的甘草提取物这样制备：取甘草，洗净，晾干后，置于润药容器内，用喷淋的方法喷洒食醋，边喷洒边搅拌直至均匀，接着闷润35分钟至醋液完全被甘草药材吸尽后，加热，炒至黄颜色略干时，取出放凉6h后，于34-40℃下干燥85小时，粉碎成粗颗粒，即得，期间每12小时翻药一次，甘草与食醋的重量比为35:3；取上述甘草颗粒，加入9倍量浓度为80％的乙醇提取2次，每次1.5小时，提取液合并，过滤，滤液回收乙醇并浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，浸膏干燥，粉碎，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的桂圆提取物这样制备：取桂圆，加8-10倍量水煎煮,2-3h后，过滤，滤液浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的大枣提取物这样制备：取大枣，加8-10倍量水煎煮,2-3h后，过滤，滤液浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，即得。前述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法中，所述的丹参汁这样制备：丹参加3-5倍量水，打成汁，即得。申请人对本专利技术进行了大量的实验研究，部分实验如下：实验例.1方法设置3个处理组，即本专利技术组、对比组1和对比组2。本专利技术组：按实施例1进行组织培养；对比组1：组织培养方法同实施例1，但所述培养基中不含地黄提取物、丹参汁、山茱萸提取物、桂圆提取物、甘草提取物和大枣提取物。对比组2：组织培养方法同实施例1，但所述培养基中：所述地黄提取物这样制备：地黄加8倍量水煎煮3，每次2h，煎煮过滤，浓缩成50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，即得。所述的山茱萸提取物这样制备：取山茱萸，加8倍量水煎煮3，每次2h，煎煮过滤，浓缩成50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，即得。所述的甘草提取物这样制备：取甘草，加8倍量水煎煮3，每次2h，煎煮过滤，浓缩成50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，即得。接种60d后测定各组植株的株高、叶片数、新增根数及相对增重率。每组结果以组内平均值为准。相对增重率(％)＝(每瓶组培苗培养后的重量-每瓶组培苗接种前的重量)/每瓶组培苗接种前的重量×100％。2结果2.1对铁皮石斛组培苗生长的影响经60d培养后的生长情况见表1。表1对组培苗生长的影响组别株高/cm叶片数/片新增根数相对增重率/％对比组12.80±0.183.05±0.251.55±0.10182.32±23.76对比组23.26±0.153.52±0.401.95±0.08212.56±33.43本专利技术组3.89±0.124.45±0.382.51±0.09249.22±33.12由表可知，本专利技术组植株的株高、叶片数、新增根数及相对增重率均高于对比组1和对比组2。与现有技术相比，用本专利技术方进行组织培养时，组培苗生长好，植株的株高、叶片数、新增根数及相对增重率高,且培养基中不含激素。具体实施方式实施例1。一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，选取处于壮苗阶段的高的铁皮石斛幼苗，在超净工作台上将其切割，去除种苗残叶、老叶和基部褐化老化组织，按照2叶1心的标准把铁皮石斛切割分离成高度为1-2cm的单株，接种于装有培养基的培养瓶中，每瓶接种1-2株，在光照为2000-3000Lx，温度为20-25℃培养60天，即得。所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁10mg、蔗糖10mg、地黄提取物3mg、丹参汁4mg、山茱萸提取物6mg、桂圆提取物7mg、甘草提取物2mg和大枣提取物9mg，混匀，即得。所述的地黄提取物这样制备：取地本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：选取处于壮苗阶段的高的铁皮石斛幼苗，在超净工作台上将其切割，去除种苗残叶、老叶和基部褐化老化组织，按照2叶1心的标准把铁皮石斛切割分离成高度为1‑2cm的单株，接种于装有培养基的培养瓶中，每瓶接种1‑2株，在光照为2000‑3000Lx，温度为20‑25℃培养50‑60天，即得。

【技术特征摘要】
1.一种提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：选取处于壮苗阶段的高的铁皮石斛幼苗，在超净工作台上将其切割，去除种苗残叶、老叶和基部褐化老化组织，按照2叶1心的标准把铁皮石斛切割分离成高度为1-2cm的单株，接种于装有培养基的培养瓶中，每瓶接种1-2株，在光照为2000-3000Lx，温度为20-25℃培养50-60天，即得。2.如权利要求1所述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁5-15mg、蔗糖5-15mg、地黄提取物1-6mg、丹参汁2-5mg、山茱萸提取物3-9mg、桂圆提取物5-10mg、甘草提取物1-5mg和大枣提取物6-12mg，混匀，即得。3.如权利要求2所述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁8-12mg、蔗糖8-12mg、地黄提取物2-4mg、丹参汁3-4mg、山茱萸提取物5-7mg、桂圆提取物7-8mg、甘草提取物2-4mg和大枣提取物8-10mg，混匀，即得。4.如权利要求3所述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：所述的培养基为：向1LMS培养基中加入香蕉汁10mg、蔗糖10mg、地黄提取物3mg、丹参汁4mg、山茱萸提取物6mg、桂圆提取物7mg、甘草提取物2mg和大枣提取物9mg，混匀，即得。5.如权利要求2-4中任一项所述的提高生根率的铁皮石斛组培养方法，其特征在于：所述的地黄提取物这样制备：取地黄，加入8-10倍量的水浸泡10-15min后，煎煮1-2h，过滤，滤渣再加入5-6倍量水提取2-3次，每次20-30min，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，备用；滤渣再加入5-6倍量50-60%的乙醇溶液，回流提取2-3次，每次20-30min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞金奎，周杭杰，
申请(专利权)人：贵州济生农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52