组织因子途径抑制剂抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合TFPI并抑制其活性的抗体及其抗原结合片段。这些抗体及片段可用于治疗出血性病症并缩短凝血时间。

Tissue factor pathway inhibitor and its use

The present invention relates to an antibody and an antigen binding fragment that specifically combines TFPI and inhibits its activity. These antibodies and fragments can be used to treat hemorrhagic disease and shorten the time of coagulation.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组织因子途径抑制剂抗体及其用途
本专利技术涉及结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的抗体。
技术介绍
血友病A和B是分别由血浆蛋白因子VIII(FVIII)或因子IX(FIX)功能缺陷所引起的X染色体连锁遗传疾病。血友病的临床严重性与凝血因子活性的残留水平有关。<1％的因子活性与重型表型有关，中间型血友病与2％至5％的因子活性有关，轻型与5％至40％的因子活性有关。这些疾病的护理标准是通过静脉输注来替代缺失的凝血因子。该替代因子通常是重组蛋白，例如Xyntha(因子VIII)或BeneFIX(FIX)，但仍使用各种纯度的血浆衍生产品。以替代因子进行的治疗可是不定期的(在出血发生时根据需要来治疗出血)，或预防性(通过将因子水平保持在保护范围内来预防出血)。有明显证据表明，预防性治疗可预防出血及血友病患者主要发病的相关关节损伤。有效的预防性治疗需要每周静脉注射因子3至4次，这对依从性造成困难并降低生活质量。由于制造凝血因子的复杂性，治疗成本亦昂贵。此外，大量患者(高达32％的是重型血友病A患者)发展出针对所施用的因子的中和抗体，这被在这些基因中具有突变的患者视为外源蛋白。这些患者需要替代的治疗方式，例如旁路因子、因子VIIa(NovoSeven)。治疗的替代方法是通过扩充完整的外源性途径来绕过对替代因子的需求。血友病患者具有一些通过其完整的外源性途径来停止出血的能力；然而这不足以停止大出血(majorbleed)或预防自发性出血。该外源性途径不足以提供保护，因为其被组织因子途径抑制剂(TFPI)快速关闭。虽然WO2010/017196(拜耳公司(Bayer))、WO2011/109452(拜耳公司)、WO2014/144577(拜耳公司)、WO2010/072687(诺和诺德公司(NovoNordisk))、WO2012/001087(诺和诺德公司)、WO2014/140240(诺和诺德公司)和WO2015/007880(诺和诺德公司)公开了结合人类TFPI的抗体，但是它们并未提供本专利技术的抗体，所述抗体具有成为新型血友病潜在治疗剂的特征。可提供预防性保护同时减少凝血因子给药频率、减少因子使用量、允许替代递送途径(例如皮下)及具有较低的产生中和抗体的风险的产品，将满足血友病患者大量未被满足的需求。
技术实现思路
本专利技术公开及例示了结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的抗体(及其抗原结合片段)。本领域技术人员仅使用常规实验将认识到或能够确定本专利技术所描述的本专利技术具体实施方案的许多等价物。该类等价物预期包含在下列实施方案(E)中。E1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2(K2)的表位，其中所述表位包含残基Ile105、Arg107及Leu131(根据SEQIDNO：2编号)。E2.实施方案1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合TFPI的Kunitz结构域1(K1)。E3.实施方案1或2的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含一或多个选自以下组的残基：Cys106、Gly108、Cys130、Leu131及Gly132(根据SEQIDNO：2编号)。E4.实施方案1至3任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含残基Cys106、Gly108、Cys130、Leu131及Gly132(根据SEQIDNO：2编号)。E5.实施方案1至4任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)。E6.实施方案1至5任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)。E7.实施方案1至6任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位不包含一或多个选自以下组的残基：E100、E101、P103、Y109、T111、Y113、F114、N116、Q118、Q121、C122、E123、R124、F125、K126及L140(根据SEQIDNO：2编号)。E8.实施方案1至7任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位不包含：E100、E101、P103、Y109、T111、Y113、F114、N116、Q118、Q121、C122、E123、R124、F125、K126及L140(根据SEQIDNO：2编号)。E9.实施方案1至6任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位不包含一或多个选自以下组的残基：D31、D32、P34、C35、K36、E100、E101、P103、Y109、K126及G128(根据SEQIDNO：2编号)。E10.实施方案1至6及9任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位不包含：D31、D32、P34、C35、K36、E100、E101、P103、Y109、K126及G128(根据SEQIDNO：2编号)。E11.实施方案1至10任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含一或多个选自以下组的残基：Asp102、Gly104、Ile105、Cys106、Arg107、Gly108、Arg112、Tyr127、Gly129、Cys130、Leu131、Gly132、Asn133、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)，其中所述表位残基由于与所述抗体或其抗原结合片段的相互作用而在隐藏的表面区域(BSA)中具有非零变化。E12.实施方案11的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含：Asp102、Gly104、Ile105、Cys106、Arg107、Gly108、Arg112、Tyr127、Gly129、Cys130、Leu131、Gly132、Asn133、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)。E13.实施方案1至12任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg107、Arg112、Tyr127及Leu131(根据SEQIDNO：2编号)，其中所述表位残基与来自所述抗体或其抗原结合片段的残基参与氢键。E14.实施方案13的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含：Asp102、Arg107、Arg112、Tyr127及Leu131(根据SEQIDNO：2编号)。E15.实施方案1至14任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含一或多个选自以下组的接触残基：Asp102、Gly104、Ile105、Cys106、Arg107、Gly108、Arg112、Tyr127、Gly129、Cys130、Leu131、Gly132、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)。E16.实施方案15项的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含：Asp102、Gly104、Ile105、Cys106、Arg107、Gly108、Arg112、Tyr127、Gly129、Cys130、Leu131、Gly132、Met134及Glu138(根据SEQIDNO：2编号)。E1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2(K2)的表位的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含选自以下组的残基：(a)根据SEQ ID NO：2编号的残基Ile105、Arg107及Leu131；(b)根据SEQ ID NO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Cys106、Gly108、Cys130及Gly132；(c)根据SEQ ID NO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu 138；(d)根据SEQ ID NO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Cys106、Gly 108、Cys130及Gly132，且进一步包含一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu138。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.19 US 62/207,229;2016.07.08 US 62/360,2051.一种特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2(K2)的表位的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含选自以下组的残基：(a)根据SEQIDNO：2编号的残基Ile105、Arg107及Leu131；(b)根据SEQIDNO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Cys106、Gly108、Cys130及Gly132；(c)根据SEQIDNO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu138；(d)根据SEQIDNO：2编号的残基Ile105、Arg107、Leu131及一或多个选自以下组的残基：Cys106、Gly108、Cys130及Gly132，且进一步包含一或多个选自以下组的残基：Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134及Glu138。2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含根据Kabat编号的下列重(H)链及轻(L)链残基：H33Ala、H58Tyr、H95Leu、H96Gly、H97Ala、H98Thr、H99Ser、H100Leu、H100ASer、L29Ala、L31Tyr、L91Tyr、L95ASer及L95BGly。3.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其包含根据Kabat编号的下列残基：(a)H33是Ala或Val；(b)H47是Trp；(c)H50是Ala；(d)H51是Ile；(e)H52是Ser、Arg、Lys、Phe或Tyr；(f)H56是Ser、Arg或Lys；(g)H58是Tyr；(h)H95是Leu；(i)H96是Gly、Ala、Arg、Asn、Lys、Pro、Ser或Val；(j)H97是Ala；(k)H98是Thr、His、Ile、Leu、Met、Phe或Tyr；(1)H99是Ser；(m)H100是Leu、Phe、Trp或Tyr；(n)H100A是Ser、Arg、Asn、Gln、Glu、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro或Trp；(o)L29是Ala；(p)L31是Tyr；(q)L91是Tyr；(r)L95A是Ser、Phe、Trp或Tyr；(s)L95B是Gly；及(t)L95C是Ser、Arg、Asn、Gln、Glu、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Trp、Tyr或Val；并任选地包含下列残基：(u)L93是Ser；(v)L96是Gly。4.一种特异性结合TFPI的K2的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自由包含以下的抗体所组成的组：(a)包含重链可变区(VH)互补决定区1(CDR-H1)、CDR-H2及CDR-H3的VH，所述CDR-H1包含SEQIDNO：38的氨基酸序列，所述CDR-H2包含SEQIDNO：39的氨基酸序列且所述CDR-H3包含SEQIDNO：40的氨基酸序列；(b)包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的VH；(c)包含SEQIDNO：63的氨基酸序列的VH；(d)包含轻链可变区(VL)互补决定区1(CDR-L1)、CDR-L2及CDR-L3的VL，所述CDR-L1包含SEQIDNO：33的氨基酸序列，所述CDR-L2包含SEQIDNO：34的氨基酸序列且所述CDR-L3包含SEQIDNO：35的氨基酸序列；(e)包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的VL；(f)包含SEQIDNO：20的氨基酸序列的重链恒定区(CH)；(g)包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的轻链恒定区(CL)；(h)包含SEQIDNO：64的氨基酸序列的重链；(i)包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的重链；(j)包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的轻链；(k)包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-H2及包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-H3；(l)包含CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的VL，所述CDR-L1包含SEQIDNO：43的氨基酸序列，所述CDR-L2包含SEQIDNO：44的氨基酸序列且所述CDR-L3包含SEQIDNO：45的氨基酸序列；(m)包含CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的VH和包含CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的VL，所述CDR-H1包含SEQIDNO：38的氨基酸序列，所述CDR-H2包含SEQIDNO：39的氨基酸序列且所述CDR-H3包含SEQIDNO：40的氨基酸序列，以及所述CDR-L1包含SEQIDNO：33的氨基酸序列，所述CDR-L2包含SEQIDNO：34的氨基酸序列且所述CDR-L3包含SEQIDNO：35的氨基酸序列；(n)包含SEQIDNO：63的氨基酸序列的VH和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的VL；及(o)由SEQIDNO：64的氨基酸序列所组成的重链及由SEQIDNO：37的氨基酸序列所组成的轻链。5.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含根据SEQIDNO：2的编号的一或多个选自以下组的残基：Glu100、Glu101、Asp102、Gly104及Tyr109。6.一种特异性结合TFPI的K2的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含根据SEQIDNO：2的编号的残基Glu101、Pro103、Tyr109、Thr111、Ser119、Gln121、Glu123、Arg124、Lys126及Leu140。7.权利要求6的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)包含CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的VH，所述CDR-H1包含SEQIDNO：87的氨基酸序列，所述CDR-H2包含SEQIDNO：88的氨基酸序列且所述CDR-H3包含SEQIDNO：89的氨基酸序列；及(b)包含CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的VL，所述CDR-L1包含SEQIDNO：81的氨基酸序列，所述CDR-L2包含SEQIDNO：82的氨基酸序列且所述CDR-L3包含SEQIDNO：83的氨基酸序列。8.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自以下组：(a)包含根据Kabat编号的至少一个抗原互补位残基的抗体，所述抗原互补位残基位于下述根据SEQIDNO：2编号的TFPI上至少一个表位残基的内：表位残基102Asp位于抗原互补位残基H58Tyr的内；表位残基104Gly位于抗原互补位残基H58Tyr的内；表位残基105Ile位于抗原互补位残基H33Ala、H50Ala、H51Ile、H52Ser、H56Ser、H58Tyr及H95Leu的内；表位残基106Cys位于抗原互补位残基H100Leu和H100ASer的内；表位残基107Arg位于抗原互补位残基H96Gly、H97Ala、H98Thr、H99Ser及H100Leu的内；表位残基108Gly位于抗原互补位残基H100Leu的内；表位残基112Arg位于抗原互补位残基L29Ala和L31T...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·R·阿普加，S·贝纳德，G·J·卡尔旺，S·R·赫特，M·霍尔斯蒂，R·贾舒亚，M·吉恩，Z·S·尤奥，D·彼德曼，M·施塔尔，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：美国,US